骨髓细胞形态学检验

第五节：常见血液病的血液学特征
• 一、贫血 • 贫血（anemia）：指单位容积循环血 液中红细胞数，血红蛋白量及血细胞比 容（Hct）低于参考值低限，贫血是一种 症状。
• 3、意义： • （1）多毛细胞白血病（hairy cell leukemia，HCE）诊断：HCL为阳性不 被L-酒酶抑制 • （2）T-B淋巴细胞鉴别：T阳性，B阴性 • （3）协助鉴别Gaucher病与NiemannPick病：Caucher阳性，Niemann-Pick 阴性 • （4）单核细胞、组织细胞、网状细胞、 巨核细胞ACP阴性。
• 5、有助于识别不同功能状态的细胞：
• 记忆T细胞—CD45RO高表达、 CD45RA不表达
• 活化T细胞—CD45RA不表达、CD25、 CD2、CD45RO、CD54、CD58均强表 达。
• 6、用于不同系列和不同分化阶段的细胞 进行分离：分选的流式细胞仪 • 7、白血病的免疫分型 • 8、可用于白血病微小残留病检测： • （1）CD病人：CD19、CD22、CD10、 CD7、CD5、CD13、CD37、CD34阳性 并伴有TbT+——则可诊断微小残留病存 在 • （2）敏感性：10-4水平
• 5、单核细胞系统： • （1）原单核细胞（monoblast）：φ1525um • （2）幼单核细胞（promonocyte）： φ15-25um，核可见凹陷，切迹，扭曲或 折叠 • （3）单核细胞（macrophage）：φ1220um：核呈肾形，马蹄形，笔架形及 “S”形。 • （4）吞噬细胞（macrophage）：单核 细胞→组织细胞→巨噬细胞或吞噬细胞
• 3、参考值： • （1）细胞外铁：1+ — 2（+），大多为 2+ • （2）细胞内铁：20—90% • 4、意义： • （1）缺铁性贫血诊断 • （2）非缺铁性贫血：如AA、铁粒幼细 胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加 • （3）MDS-RARS：环状铁粒幼细胞＞ 15%
• 四、细胞免疫分型： • 1、用单抗和免疫学技术检测细胞表血特异性 • 2、分化抗原—细胞所属系列、分化程度及功 能状态。 • （一）检测方法： • 1、免疫荧光法（immme of luoresence technique） • （1）原理： • ①荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合— —产生荧光 • ②用荧光显微镜和流式细胞仪检测 • ③直接荧光法、间接荧光法 • （2）参考值：有荧光——阳性细胞 • 无荧光——阴性细胞
• （四）氯化醋酸AS-D茶酚酯酶染色 • 1、原理： • AS-D（SE）——氯化醋酸AS-D茶 酚——AS-D+重氮盐GBC偶联——红色 沉淀定位于胞浆中 • 2、结果：粒系——阳性或强阳性反应 • 单核——阴性或弱阴性反应 • 淋巴、嗜酸细胞、浆细胞——阴性 反应 • 3、意义： • （1）急粒——阳性或强阳性 • （2）急单、急淋——阴性反应
• 3、淋巴细胞系统 • （1）原淋巴细胞（Lymphoblast）： φ10-18um • （2）幼淋巴细胞（prolymphocyte）： φ10-16um • （3）淋巴细胞（lymphocyte） • ①大淋巴细胞 ②小淋巴细胞
• 4、浆细胞系统： • （1）原浆细胞（plasmablast）：φ1520um • （2）幼浆细胞（proplasmacyte）： φ12-16um • （3）浆细胞（plasmacyte）：φ8-20um
• 2、粒细胞系统： • （1）原粒细胞（myeloblast）：φ1118um • （2）早幼粒（promyelocyte）：φ1222um • （3）中幼粒（myelocyte） • ①中性中幼粒（neutrophilic myelocyte）：φ10-18um • ②嗜酸性中幼粒（eosinophilic myelocyte）：φ15-20um • ③嗜硷性中幼粒（basophilic myelocyte）：φ10-15um
• 3、意义： • 1、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红 细胞阳性，后者幼红细胞阴性 • 2、白血病：急粒：阴性或弱阳性 • 急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状 或块状 • 急单：呈弥漫均匀或细颗粒状 • 3、其它： • Gaucher细胞——阴性 • Niemann--Pick——阴性
• （七）铁染色： • 1、原理：（1）铁——铁蛋白或含血黄 素——单核--吞噬细胞质内 • （2）Fe3++亚铁氰化钾——铁氰化铁沉 淀（普鲁土蓝） • 2、结果： • （1）细胞外铁：一、1+ — 4（+） • （2）细胞内铁： • ①含有铁颗粒的幼红细胞——铁粒幼红细 胞 • ②油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性 率 • ③I、II、Ⅲ、Ⅳ和环状铁粒幼细胞
• （六）糖原染色 • 1、原理：PAS反应 • 过典酸（糖原）——醛基+无色品红——紫 红色化合物 • 2、结果： • （1）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀红色 • （2）分为：强阳性、弱阳性和阴性或阳性百 分率 • （3）粒系： • ①原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐 增强 • ②单核弱阳性，淋巴细胞阴性 • ③红系：阴性 • ④巨核：阳性
• 6、巨核细胞学： • （1）原巨核细胞（megakaryoblast）： φ15-30um • （2）幼巨核细胞（promegakaryocyte）： φ30-50um • （3）颗粒型巨核细胞（granular megakaryocyte）：φ50-70um • （4）产板巨（thronbocytogenous megakaryocyte）。 • （5）巨核细胞裸核（naked nucleus）
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3、用于T淋巴细胞亚群检测： T：（CD3） TH（CD4+ CD8—） TS（CD4— CD8+） 4、用于识别不同分化阶段的细胞： （1）造血干细胞—CD34+、CD90+、 lin— • （2）髓系祖细胞—CD34+、CD33+ • （3）T淋巴细胞系祖细胞—CD34+、 TDT+、CD10+、CD7+ • （4）B淋巴细胞系祖细胞—CD34+、 CD19+
• 3、细胞核： • （1）大小：由大到小，由规则到不规则 （巨核细胞核由小到大） • （2）染色质：细致疏松→粗糙→成块
• 4、核/质 比例：由大到小。
• 二、血细胞的形态学特征 • 1、红细胞系 • （1）原红（normoblast）：φ15— 22um • （2）早幼红（basophilic normoblast）：φ11-20um • （3）中幼红（polychromatic normoblast）：φ8-18um • （4）晚幼红（ortho-chromatic nurmblast）：φ7-12um • （5）网织红（RC）： φ7.4um • （6）成熟RBC（RBC）：φ7.4um
第三节 血细胞形态学特征
• 一、血细胞发育过程中形态学演变的一 般规律 • 血细胞发育：从原始到成熟有一定的 规律性 • 1、细胞体积 • （1）胞体由大到小（普通规律） • （2）特殊规律：早幼粒大于原粒细胞 • 巨核细胞体积增大
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2、细胞质： （1）量由少到多 （2）染色由深蓝到浅蓝 （3）颗粒：从无→有→嗜天青颗粒→特 异性颗粒
• （五）α-醋酚茶酚酯酶染色 • 1、原理：α-NAE——α-醋酸茶酚——α茶酚+重氮盐染料偶联——黑色沉淀定位 于胞浆中。 • 2、结果： • 1、单核细胞——阳性（灰黑色沉淀） • 2、粒细胞——弱阳性 • 3、淋巴细胞——阴性 • 3、意义： • 1、急单——强阳性反应 • 2、急粒——弱阳性反应
• 2、免疫酶染色法： • （1）APAAP法（碱性磷酸酶抗碱性磷 酸酶法）： • 一抗+CD抗原+AKP标记二抗——底物显 色 • （2）PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶 法） • 一抗+CD抗原+POX标记抗体——底物显 色 • （3）ABC法（亲和素—生物素—酶复合 物）法： • 一抗+CD抗原+生物素标记二抗——HRP 标记亲和素+底物
• （二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色 • 1、原理：NAP（neutrophil alkaline phosphatase）的显示方法有偶氮偶联法： • NAP（PH9.4-9.6）→α-磷酸茶酚钠→α茶酚+重氮盐→形成灰黑色沉淀（定位于 酶活性处）。
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2、结果： （1）5级分类 0级→阴性 1级→+ 2级→++ 3分→+++ 4分→4（+） （2）阳性率报告：计数100NC中阳性 细胞分率。 • （3）积分报告：100NC细胞的累积分 数
• （二）细胞免疫分型的临床应用 • 1、有助于识别不同系列的细胞： • 髓系：CD13、CD14、CD15、CD32、 CD33、CD65、CD91、CD156、 CD166 • 淋巴系：CD1、CD2、CD3、CD4、 CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、 CD19、CD20、CD52、CD77 • 巨核系：CD41、CD42、CD61 • 2、识别不同的淋巴细胞： • T系统：CD2、CD3、CD4、CD7、CD8 • B系统：CD19、CD20、CD22 • NK：CD16、CD56
• （3）第一括号内表示染色体数目，第二括号内表 示染色体区带 • （4）P表示短臂，q表示长臂 • （5）45，X，-Y，t（8；21），（q22，q22）— 表示45条染色体，丢失Y染色体，第8号与第21号 染色体之间易位，断裂点在8号染色体长臂2区2带 与21号染色体长臂2区2带。 • 3、染色体畸变 • （1）二倍体（2n） • （2）数目畸变：整倍体和非整倍体 • （3）亚二倍体：比2n少 • （4）超二倍体：比2n多
（三）急性白血病细胞免疫表型特点
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五、细胞遗传学分析 1、染色体检查方法 2、染色体分析 （1）染色体命名：①46条，22对常染色 体，1对性染色体 • ②男46XY，女：46XX • ③A-G7组 • ④ZP35表示
• （2）核型分析及其书写： • （1）书写顺序：染色体数目、性染色体、 染色体异常 • （2）染色体变异以小写表示： • t—易位 iso或i——等臂染色 inv—倒位 ins——插入 • del—缺失 r—环状染色 • “—”-----丢失 “+”----增加
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7、其它细胞 （1）网状细胞 （ຫໍສະໝຸດ Baidu）内皮细胞 （5）成骨细胞
（3）纤维细胞 （4）组织嗜硷 （6）破骨细胞
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三、细胞化学染色 概念： （1）细胞形态学为基础 （2）对骨髓片按一定程序染色 （3）显微镜下观察（细胞化学成分及其 变化）
• （一）过氧化物酶染色 • 1、原理：细胞中的POX（peroxidase） →H2O2→O2→氧化联苯胺呈蓝色+亚硝 基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。 • 2、结果： • （1）阴性：无颗粒 • （2）弱阳性：细小颗粒分散 • （3）强阳性：颗粒粗大而密集 • 3、意义： • （1）急粒：强阳性 • （2）急单；弱阳性 • （3）急淋：阴性
• （4）晚幼粒细胞（metamyelocyte）： φ10-16um • ①中性 ②嗜酸 ③嗜硷 • （5）杆状核粒细胞（stab granulocyte、 bandgranulocyte） • ①中性 ②嗜酸 ③嗜硷 • （6）分叶核粒细胞（segmented granulocyte） • ①中性 ②嗜酸 ③嗜硷
• 3、参考区间：NAP：阳性率：1040% • 积分：40-80分 • 4、临床意义： • （1）感染性疾病的诊断：鉴别细菌 或病毒感染 • （2）CML和类白血病鉴别 • （3）AA与PNH鉴别
• （三）酸性磷酸酶染色 • 1、原理：ACP（acid phosphatase）： • ACP（PH5.0）——β甘油磷酸钠——磷 酸钠+硝酸铅——磷酸铅沉淀+硫化铵反 应——棕黑色硫化铅沉淀。 • 2、结果：胞质内出现棕黑色颗粒为阳性 反应。