对痰液进行定量培养和半定量培养

痰液标本是临床微生物学检验最常见的的标本，但不是下呼吸道感染的最佳标本。而痰为下呼吸道的分泌物，其病原菌的情况最能真实的反应下呼吸道的感染情况，因此痰涂片镜检即格兰染色和痰培养一直受到临床上的关注，且常规用以指导临床治疗。

痰培养的目的：检查痰液中的致病菌。可根据需要进行需氧菌培养、厌氧菌培养、结核杆菌培养、或真菌培养，用于呼吸道感染的病因诊断。痰培养的理论依据是致病菌应高于污染菌，据此，对痰液进行定量培养和半定量培养。常与药物敏感试验一起进行。在抗菌素使用前采集价值高。最好注明相关体征、感染指标、前期用药情况。

采集方法

2.1自然咳痰法尽可能在用抗菌药物之前采集标本。以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙（为减少口腔正常菌群污染标本），用力咳出呼吸道深部的痰（非后鼻部分泌物、非唾液），痰液直接吐入无菌痰杯中，标本量应≥1ml。对于痰量少或无痰或咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的10%NaCl水溶液(痰液粘稠难咳,阻塞气道的,需要用α-糜蛋白酶盐水溶液)，使痰液易于排出后咳痰。

2.1.1浓缩法找结核杆菌时，则应留取24h痰液：正确的留痰方法是，在留痰之前先用清水漱口数次，以清除口腔内的食物残渣及部分杂菌。留取的痰应是用力咳嗽后自气管内咳出的痰，然后盛于痰盒内送检。不要将唾液或鼻涕吐入痰盒，以免影响查痰结果。初次就诊需查痰者，医生要求送三个痰标本：〈1 〉即时痰：就诊当时咳出的痰，〈2〉夜间痰：前一天晚间咳出的痰，〈3〉清晨痰：起床后深咳吐出的痰，其中以清晨第一次咳出的痰效果最好。

痰培养注意事项：

痰液的采集必须注意两个环节，即所留的痰标本必须是从肺部咳出（不要混入唾液、鼻咽分泌物、食物、漱口水等）及痰液必须十分新鲜（送检标本在1小时内处理，以防细胞自溶）。采集方法通常包括：让患者自然咳痰，清晨留取，用清水反复漱口三次，以清除口腔中的细菌。无痰者可用加温45℃左右的10%的盐水雾化吸入。痰咳出后立即放入干净消毒的痰盒内，封好盖子，立即送检。

1、量正常人一般不咯痰或仅有少量泡沫样痰或粘液样痰。当呼吸道有病变时，痰量可增加（＞50ml），大量痰液提示肺内有慢性炎症或空腔性化脓性病变，如支气管扩张症、肺脓肿、肺结核等。在病程中如痰量逐渐减少，表示病情好转；反之表示病情有所发展。在肺脓肿或脓胸向支气管破溃时，痰量可突然增加并呈脓性，因此观察痰量可了解病情的变化

2、痰结核菌培养阳性，是肺结核诊断的另一个金标准。在100个结核患者中约有40个患者可能培养出结核菌。约有60%的结核患者痰结核菌培养阴性。由于不是每个患者都做痰培养结核菌，痰培养结核菌费用高，时间长。过去要1月余，现在也要10天左右。而且不是每一家医院都能做痰培养结核菌的，大多数医院没有开展这一检查。即使痰培养阴性，仍不能说没有传染性，因为结核菌数需1x102/ml，才可能有阳性结果。另外取到的痰中结核菌可能处置不当已经死了，故培养不出来。所以由于技术和其他原因仍有可能造成这一结果为阴性。

3、检查痰中有无结核菌，是基于一定量痰样品中能够检测到的结核菌数量超过某一数量集，一般涂片检查菌数需5x103/ml，培养需1x102/ml，标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果。如果痰中结核菌数量低于这一数字，痰找结核菌结果就呈现阴性，还有其他因素可能造成这一阴性结果。大家就容易误以为

没有传染性，实际上这些患者仍有可能从痰中向外排放结核菌。

对检验人员的要求：查找痰中的结核菌是一项耐心细致的工作，只要在工作上疏忽大意就有可能使痰菌的检出率下降。一般认为，痰涂片阳性的病人的含菌量每毫升痰在100万个左右，而在涂片时在涂片上的细菌数就比较少了，因为在涂片时只是在载坡片上，只涂上薄薄一层。所以，我们要求检验人员在显微镜下查痰菌时必须仔细搜索每一个镜下视野，至少搜索100～300个视野。如果能做到一丝不苟，痰结核菌的检出率就会大大提高。

标本的采集。当肺部结核病灶与支气管相通时，咳出的痰中含菌量就较高。怎样提高标本中结核菌的检出率？正确的操作方法应该按如下面的步骤进行：在采集标本前，患者应以清水漱口，这样可以去掉口腔内的大部分染菌，然后鼓励病人用力咳嗽（如有出血危险的病人应避免用力咳嗽）尽力将气管深部的痰液咳出，并将咳出的痰液放于清洁（最好消毒过的）容器内并加盖，马上送检验室，直接涂片检查。采集痰液的最好时间是清晨起床时咳出的痰。另一个必须注意的问题是，有的病人无痰，咳嗽也很少，而为了应付查痰就将唾沫作为痰标本进行检查，这样的痰标本、结核菌的检出率很低，甚至根本检测不到结核菌，报告结果肯定是阴性的，这样的检验结果是不正确的，也绝对不可靠。

检验方法：对结核菌的检验，用得最多的方法是，直接厚涂片染色后在显微镜下检测，还有将痰液离心沉淀，漂浮集菌等处理后，再进行涂片检测，这些方法都必须由专业人员操作，我们只要作一般了解就行了。

下面介绍一下结核菌的培养，由于结核菌属于缓慢生长需氧的抗酸杆菌，营养要求高，在培养基中要有血清、卵黄、甘油、天门冬素及马铃薯等物质条件，温度必须在37℃～37.5℃，PH值为6.5～7.0的酸碱度，才缓慢生长。在培养基上生长2周～8周，以后才可以用肉眼看见菌落，如果碰到耐药菌株可能在20周以上才能培养成可见菌落。结核菌的培养对临床上的难治病例，耐药病例意义较大，可以帮助医生正确选择敏感药物制订有效的治疗方案。而我们在临床上对初治病人或者其他复治病人，在痰中找结核菌阳性以后即可开始抗痨治疗，而不必等到培养报告阳性才开始治疗，一则培养一般在2个月以后才有结果，不马上治疗势必耽误病情；二则，如果进行结核菌药敏试验，那么时间就更长，病情会进一步延误；三则在培养和做药敏的一段时间里结核菌在体内是否会产生变异而给治疗带来困难。

痰结核菌检查，我们可以根据显微镜下每个视野的菌量的多少，来判断每位病人排菌量大小，判定治疗效果。

通过上面这些介绍，结核病，特别是肺结核的诊断和治疗，结核菌的检测是非常重要的。所以，我们应该重视该项工作，该项工作做好了，关系到我们今后在结核病防治方面成绩的大小。由于结核菌的感染是全身性的，所以，结核菌的检测，我们还可以从胸水、腹水、脑脊液、脓汁、尿液、粪便以及结核病灶中进行检测，操作要求都比较高，都必须专业技术人员来完成。

2.2吸痰器吸痰对难于自然咳痰患者也可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。吸痰器吸痰，质量保证有困难。如果一个责任性不强的护士从咽喉处途径吸痰器吸出来的“痰液”也许比自然咳取的质量更糟糕，更有甚者，吸取的根部不是插管内的样本，而是顺着口腔吸取的是咽喉处的分泌物，此处唾液、鼻涕、咽部分泌物什么都有，根本不适合作培养的，作拒收处理。

2.3支气管镜采集法和气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行。

4.4纤维支气管镜抽吸：通常用于在患者行纤维支气管镜检查时顺便抽取