家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测

家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测

姓名温正煌学号201212200904011专业临床医学班级本部4班

实验目的

1.用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。

2.观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化，从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能

发病机制。

实验材料和方法

实验仪器：分光光度计，离心机，恒温水浴锅，哺乳动物手术器械，注射器，试管架，试管，试管夹，微量移液器，量筒

实验药品和试剂：20%氨基甲酰乙酯，0.6%酚红溶液，20%葡萄糖溶液，10%NaOH，12.5%NaOH 溶液，50%乙酸溶液，1%氯化汞，碱性你苦味酸，生理盐水，肌酐标准应用

液，蒸馏水

实验动物家兔

实验步骤

1.1急性肾功能不全模型复制：于实验前24h，取两只家兔，称重，一只作为实验兔，按

0.8~1.0ml/kg体重剂量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用，另一只

皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。

1.2麻醉固定：用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量注射耳缘静脉，缓慢注射。待兔麻

醉后将其仰卧，先后固定四肢及兔头。

1.3心脏采血：剪去家兔胸前区部位的毛，在第3~4肋间靠近胸骨处，用左手食指摸到心跳

最明显处，右手持注射器垂直刺入心脏，当针穿刺心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器，取血3ml，推入干燥试管，静置。

1.4 膀胱插管术：从耻骨联合向上沿中线作约3~4厘米的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱

轻拉至腹壁外，先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位，先用注射器取尿液2ml于试管中，然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再用止血钳提起膀胱前壁（靠近顶端部分），选择血管较少处，切一纵行小口，插入插管后结扎，将膀胱插管平放于耻骨处，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，术毕，用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯，收集尿液。

1.5酚红排泄试验：按1ml/kg耳缘静脉注射0.6%酚红溶液,开始计时，再按30ml/kg耳缘静

脉缓慢注射20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集15分钟（对照组），30分钟（模型组）尿液。

1.6生化检测

1.6.1测酚红排泄率

a.收集注射酚红后的全部尿液移入500ml量筒内，加入10%NaOH10ml，使之显色，再加

入自来水至500ml摇匀。

b.从量筒中吸出尿液置于试管中，与标准管比色管进行比较，即为15min、30min酚红排

泄率。

1.6.2测血肌酐

将静置后心脏采血的血用离心机2000r/min离心5分钟，小心吸取血清置于另一干燥试

管中，测血肌酐用。取硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样，混匀，37℃水浴30min，用分光光度计以波长510nm，空白调零，读OD值。然后各管液体倒回试管，加50%乙酸溶液两滴，静置6min后，再测OD’值。按公式Cr（mg%）=（OD测-OD’测）/（OD标-OD’标）×0.01/0.2×100（正常值=0.7~0.8mg%）

表1 血清肌酐测定

单位/ml 空白管标准管测定管

肌酐标准应用液/（0.05mg/ml) 0.2

血清0.2

蒸馏水0.2

碱性苦味酸 2.0 2.0 2.0

1.6.3测尿肌酐

a.按表2中步骤操作

b.混匀，放10min后加蒸馏水6.0ml，摇匀，用分光光度计以波长530nm，空白调零，读

取OD值，按公式计算尿肌酐值[Cr]p(mg%)=OD测/OD标×0.05mg×100ml/0.1ml

表2 尿肌酐测定

单位/ml 空白管标准管测定管

尿液（原尿或1:50稀释）0.1

尿肌酐标准应用液0.1

蒸馏水0.1

碱性苦味酸 2.0 2.0 2.0

12.5%NaOH溶液0.5 0.5 0.5

1.6.4内生肌酐清除率

内生肌酐清除率=尿中肌酐含量/血中肌酐含量×尿量（ml/min)

1.7肾形态学观察：于耳缘静脉注射10ml空气处死家兔，解剖取出肾脏，沉重，计算肾脏与

体重之比（即肾系数），并观察肾外形、质地，包膜，最大径纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。

实验结果：

家兔的血肌酐、尿肌酐数据表

管号

对照组模型组

血肌酐

尿肌酐

血肌酐

尿肌酐加乙酸前加乙酸后加乙酸前加乙酸后

标准管0.423 0.052 0.461 0.051 0.016 0.181 测定管0.056 0.049 0.157 0.150 0.040 0.086

对照组和模型组家兔各项生化指标

血清肌酐[Cr]p（mg%）尿肌酐[Cr]u

（mg%）

尿肌酐/

血肌酐

酚红排泄

率（%）

肾比重

（g/kg)

内生肌酐

清除率

对照组9.4 7.85 0.83 45 8.79 0.0835 模型组15.7 4.3 0.27 <5 7.33 0.0054

不同浓度标准比色液分光光度值

排泄率（%） 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 OD值0.01 0.034 0.065 0.113 0.134 0.164 0.178 0.272 0.284 0.312

结果说明：与正常组的家兔对比，急性肾功能不全的家兔血清肌酐升高，尿肌酐明显降低，每分钟的尿量减少，内生肌酐清除率明显下降，酚红排泄率下降，肾系数降低（由于实验中结扎尿道时不慎将输尿管结扎，造成尿路梗阻，肾脏积水，以致对照组肾系数大于模型组）。正常肾脏颜色为红褐色，切面色泽鲜艳，皮髓质分界清晰。模型组的家兔肾脏重量增加，肾脏颜色苍白，表面肿胀，切面为苍白色，皮髓质分界不清，偶有淤血。

实验讨论：

1.氯化汞是一类具有较强毒性的重金属盐，溶于水，其中的汞离子可使含巯基的酶丧失活性，失去功能；还能与酶中的氨基、二巯基、羧基、羟基以及细胞内的磷酰基结合，引起相应的损害。家兔皮下或肌肉注射1%氯化汞，可引起以肾小管坏死为主的急性肾功能不全。急性肾功能不全临床分为少尿型和非少尿型两种，前者多见。少尿型一般表现少尿甚至无尿、等渗尿。血浆肌酐进行性升高，肌酐从尿中排出障碍，尿肌酐/血肌酐<20，与功能性肾衰时>40有明显区别.

2.氯化汞引起家兔急性肾功能不全的机制：

（1）管内的NaCl增加，刺激致密斑使肾素分泌增加，肾素-血管紧张素系统激活，血管紧张素Ⅱ增加，从而使入球小动脉收缩，肾小球毛细血管血压下降，肾小球有效滤过压下降，肾小球滤过率下降，导致少尿。

（2）肾小管阻塞：当HgCl2引起急性肾小管上皮细胞坏死时，管型、细胞碎片或细胞肿胀等阻塞肾小管，直接引起少尿；另一方面，近端肾小管阻塞，肾小囊内压升高，有效滤过压下降，肾小球滤过率降低，尿量减少。

（3）原尿回漏和肾间质水肿：肾小管上皮细胞受损，基膜断裂，原尿到达肾小管时便回漏到肾间质，而后进入肾血管，直接使尿量减少。肾间质水肿和间质压增高，一方面使有效滤过压下降，导致肾小球滤过率降低，尿量减少；另一方面，压迫肾血管，妨碍尿液流入肾小管，压迫肾周围毛细血管，导致肾缺血，进一步引起少尿。

3.急性肾功能衰竭时的功能代谢变化：（本实验中毒家兔处于少尿期）