黄酮含量测定知识讲解
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮是一类化合物的总和，常用的测定方法有色谱法、光谱法和比色法等。
1. 色谱法：色谱法是一种常用的分离和测定化合物的方法。
常用的色谱方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
其中，HPLC是最常用的测定总黄酮含量的方法。
它可以将样品中的黄酮分离开，并通过检测器测量它们的浓度。
2. 光谱法：光谱法是利用物质对光的吸收、发射、散射等特性进行测定的方法。
常用的光谱法包括紫外-可见光谱法（UV-Vis）和荧光光谱法等。
这些方法通过测量样品在特定波长下的吸光度或荧光强度来确定总黄酮含量。
3. 比色法：比色法是通过比较样品与标准溶液的颜色差异来测定样品中的化合物含量的方法。
通常使用染色剂与样品中的黄酮发生反应，形成有色产物，并通过比色仪或分光光度计测量吸光度，进而计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同的测定方法可能对不同类型的总黄酮有不同的适用性和灵敏度。
因此，在选择测定方法时，需要考虑样品的特性和实验室的仪器条件，确保能够准确测定总黄酮的含量。
总黄酮含量测定-比色法
总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。
实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。
（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。
【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。
25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。
②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。
黄酮含量测定实验报告
黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。
2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。
黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。
黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。
3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。
- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。
3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。
2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。
3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。
4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。
5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。
3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。
2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。
3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。
3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。
2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。
3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。
4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。
4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。
5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。
通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。
本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。
黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。
因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。
黄酮含量的测定方法[优质文档]
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黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。
③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。
各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。
在510nm的波长下测定吸光度。
2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。
从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。
②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。
③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。
分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。
④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。
总黄酮的含量测定的操作流程图-分光光度法与比色法-简易图解-李熙灿-Xican-Li
总黄酮的含量测定方法：操作流程图2017.11【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。
为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。
其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。
常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。
采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。
【检测方法与实验流程图】图1实验流程图【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.2012;26:1050-1053.【溶液配制】1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。
2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。
3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。
4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。
5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。
浓度尽量高，但要有精确的数值。
【标准曲线绘制】（芦丁）精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 芦丁标准液，代替上图中的 “样品液0.5mL ”，依“实验流程图”，测A 508nm 值：绘制标准曲线如下：A 508n m Concentration (mg/ml)总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。
黄酮含量测定的方法
黄酮含量测定的方法
黄酮是一类天然的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗癌等作用。
因此，测定黄酮含量是对植物提取物、草药或食物中黄酮类化合物进行研究和评价的重要手段。
目前常用的黄酮含量测定方法包括色谱法、分光光度法和高效液相色谱法等。
1. 色谱法：色谱法常用的分离技术有薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（GC）。
其中TLC常用于初步筛选和分离样品中的黄酮类化合物，GC常用于定量分析。
2. 分光光度法：分光光度法是通过黄酮类化合物吸收特定波长处的紫外光来间接测定其含量。
这种方法简单、快速，但对样品的成分和色素的影响较大。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是目前最常用的分析方法。
通过选择合适的柱型、流动相和检测波长，可以实现对不同黄酮类化合物的分离和定量。
此外，还可以结合质谱（MS）等技术，用于黄酮类化合物的结构鉴定和定量分析。
需要注意的是，不同的黄酮类化合物在不同的测定方法中可能表现出不同的灵敏度和选择性，因此在选择测定方法时需要考虑到样品中的主要成分和相关性质。
同时，还应注意样品的前处理、提取和色谱条件等因素，以获得准确可靠的测定结果。
总黄酮含量测定微板法
总黄酮含量测定微板法总黄酮是一类重要的生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生理功能。
因此，测定样品中的总黄酮含量对于食品、草药、化妆品等行业具有重要意义。
本文将介绍一种常用的总黄酮含量测定方法——微板法。
微板法是一种基于酶促反应的测定方法，通过酶促反应将总黄酮转化为有色产物，再利用分光光度计测定产物的吸光度，从而计算出样品中的总黄酮含量。
下面将详细介绍该方法的步骤和操作要点。
准备实验所需的试剂和设备。
试剂主要包括缓冲液、酶液、底物液和标准品。
设备主要包括微孔板、分光光度计、移液器等。
接下来，进行样品的制备。
将待测样品粉碎并称取适量，加入适量的缓冲液进行提取。
提取的条件可以根据具体样品的特点进行调整，一般采用温度控制、pH调节等方法提高提取效果。
然后，离心样品提取液，取上清液进行后续操作。
然后，将提取液分装到微孔板中。
根据实验需求，可以选择不同孔数的微孔板。
将提取液均匀地加入到微孔板的每个孔中，确保每个孔的体积相同。
接着，加入酶液和底物液。
酶液是用来催化总黄酮转化为有色产物的，底物液是酶促反应所需的底物。
将酶液和底物液按照一定比例加入到每个孔中，注意不要产生交叉污染。
然后，将微孔板放入分光光度计中进行测定。
设置合适的波长和测量时间，测量各个孔的吸光度值。
将测得的吸光度值记录下来，作为后续计算总黄酮含量的依据。
计算样品中的总黄酮含量。
根据已知标准品的吸光度和浓度之间的关系，利用线性回归等方法计算出待测样品中总黄酮的含量。
一般情况下，可以通过查阅相关文献或使用专业的数据处理软件来完成计算。
总黄酮含量测定微板法是一种简单、快速、可靠的测定方法，在食品、草药、化妆品等领域具有广泛的应用。
但需要注意的是，在操作过程中要严格控制各个步骤的条件，确保实验结果的准确性。
另外，不同样品的测定条件可能有所差异，需要根据具体情况进行调整。
微板法是一种有效测定总黄酮含量的方法，通过酶促反应和分光光度计的配合，可以准确测定样品中的总黄酮含量。
黄酮含量测定知识讲解
黄酮含量测定一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。
2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。
然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。
以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。
3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。
加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。
4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。
加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。
以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。
带入标准曲线中，计算黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。
二、矿质元素的测定每份需0.2g。
黄酮类化合物的含量测定方法
黄酮类化合物的含量测定方法该文综述了近年黄酮类化合物含量测定时常见的方法，分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法，分析了各种方法的优缺点，并介绍了一些应用比较少的方法。
标签：黄酮类化合物；含量；测定；方法黄酮类化合物是广泛分布于自然界中的一类化合物，生活中常见的食品茶叶、豆类、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有C6-C3-C6的基本骨架，是许多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。
该文综述了近年黄酮类化合物分析中主要应用的方法，为广大同行提供一些参考。
1 分光光度法分光光度法主要适用于总黄酮的测定，具有操作简便、快速、准确度及精密度较好的特点。
目前黄酮类化合物测定法有直接测定法和比色法。
直接测定法直接以黄酮类化合物为对照物测定样品中的此成分的含量，比色法是将化合物加入显色剂后测定吸光度再进行换算测定，其中常用的显色剂有Al（NO3）3和AlCl3。
直接测定法和比色法的选择要综合考虑，样品中成分是否会与显色剂发生沉淀反应、样品成分的复杂性等都会影响结果的准确性，在NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 体系中，碱性条件经常会影响结果的准确性和稳定性，只有物质中含有邻二酚羟基，并且邻二酚羟基的邻位没有取代时，Al（NO3）3比色法才在510 nm 左右有最大吸收[1]。
王东升等[2]、李春红等[3]采用紫外分光光度法分别测定了淫羊藿、黄芪中总黄酮的含量。
吕凛等[4]比较了直接测定法和NaNO2-Al（NO3）3-NaOH显色法测定桔皮中总黄酮含量，结果表明显色法检测，会出现浑浊现象；直接法检测，操作简便，结果准确，重现性好。
时维静等[5]研究直接测定法和NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法测定中药复方总黄酮含量，结果表明NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法测定中药复方总黄酮含量稳定可靠，快速准确。
徐灵源等[6]采用AlCl3-HAc-NaAc （pH 5.5）为显色剂，建立一种青天葵药材中总黄酮检测的方法，并考察14批青天葵药材中总黄酮的含量。
黄酮含量测定
一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。
2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。
然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。
以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。
3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。
加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。
4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。
加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。
以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。
带入标准曲线中，计算黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。
二、矿质元素的测定每份需0.2g。
实验——总黄酮含量的测定
《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。
其主要结构式如图。
图黄酮类化合物分子结构式黄酮类化合物主要结构类型见表。
表黄酮类化合物主要结构类型原理黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。
用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制称量13.2mg 芦丁，用60%乙醇定容到25ml 容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml 芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml 的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min ；（扫描找到最大吸收）在510nm 处测定吸光度。
用0.0ml 作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
3.6.4 总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g 样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml 圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min 。
过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml ，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml ；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml 摇匀，放置6min ；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml ，放置6min 后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml ，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min ；在510nm 处测定吸光度。
黄酮类成分的结构特征,鉴别方法,含量测定方法
黄酮类成分的结构特征,鉴别方法,含量测定方法黄酮类成分是指一类广泛存在于植物中的天然有机化合物，具有苯并杂环上结合的若干羟基和其他官能团。
它们的化学结构具有苯并杂环的骨架，苯环上有一个或多个羟基，还可能存在甲基、苯基等官能团。
其中常见的黄酮类化合物包括黄酮、异黄酮、黄酮苷、异黄酮苷等。
鉴别方法：黄酮类成分的鉴别方法主要包括色谱分析法、红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振法等方法。
含量测定方法：常用的含量测定方法包括高效液相色谱法、紫外分光光度法、比色法、HPLC-MS法等。
其中，高效液相色谱法是目前最为常用的含量测定方法之一，通过建立样品和标准品的响应因子曲线，可以准确地测定黄酮类成分的含量。
黄酮类含量测定方法
黄酮类含量测定方法
黄酮类是一种常见的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此，测定黄酮类的含量对于研究植物的生物活性和药用价值具有重要意义。
以下是测定植物中黄酮类含量的常用方法：
1. 酸水解法
通过酸水解将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法（UV）或高效液相色谱法（HPLC）等方法测定莽草中黄酮类的总含量。
但是，该方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构、消耗大量的试剂和时间。
2. 高效液相色谱法（HPLC）法
由于黄酮类化合物的分子结构复杂，所以HPLC法是测定黄酮类含量的有效方法之一。
通过将样品在特定条件下分离、纯化，利用紫外或荧光探测器分析检测出样品中的黄酮类含量并计算。
该法具有分离效率高、检测灵敏度、可靠度高等优点。
3. 毛细管电泳法（CE）法
毛细管电泳法是利用毛细管对混合物进行分离，将混合物分离为单独的组分的方法，实现其含量分析。
该方法抗干扰性强、检测速度快，适用于对样品含量分析较低且复杂的情况。
综上所述，不同的样品或应用领域需要不同的黄酮类含量测定方法，研究者可以
根据自己的需要选用不同的方法进行研究。
总黄酮含量测定
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
黄酮含量的测定
加2ml 4％ NaOH 用30%乙醇定容，混匀，放置15min
510nm下测定吸光度 （以芦丁为标样制作标准曲线）
结果记录：记载表老师检查
用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去
值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面。
下一个实验：油脂中黄曲霉的测定
黄酮含量的测定教材
谢谢
纯电子能态间跃迁
S2
h
S1
A
锐线光谱
S0 分子内电子跃迁
带状光谱
定性分析与定量分析的基础
A
定性分析基础
B A
物质对光 的选择吸收
ma(xA) ma(xB)
定量分析基础
A
在一定的实验
条件下，物质对 光的吸收与物质 的浓度成正比。
增 大 C
透光率 （透射比）
二、溶液的吸光定律
入射光 I0
透射光 It
六、黄酮含量的测定流程图
取3支10ml具塞试管（2支测定管，一支空白管）
3支测定管加入粗提液 5ml， 1支空白管加同量30％乙醇
各管加0.5ml 5% NaNO2， 摇匀，静置5min
总黄酮的测定方法
总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。
黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。
近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。
因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
黄酮含量的测定方法
黄酮含量的测定方法黄酮是一类天然产物，常见于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。
在药学和食品工业中，测定黄酮含量的方法非常重要，因为它可以评估原料的质量和产品的纯度。
目前常用的测定方法包括光谱法、色谱法和化学法等。
光谱法是测定黄酮含量最常用的方法之一。
常见的光谱法包括紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）和高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）。
紫外-可见吸收光谱法通过测定黄酮在特定波长下的吸光度，从而反应其含量。
这种方法操作简单，快速，但需要参考品的标准曲线进行定量分析。
相比之下，HPLC-UV法需要使用高效液相色谱仪，可以通过分离样品中的黄酮类化合物，再通过紫外检测器进行定量分析。
这种方法准确性高，分离效果好，但需要耗费较多的时间和资源。
除了光谱法，色谱法也是测定黄酮含量的常用方法之一。
目前常用的色谱法包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。
气相色谱法通过将黄酮类化合物转化为易挥发的衍生化合物，再通过气相色谱仪进行分离和定量。
这种方法对于易挥发的黄酮类化合物特别有效，但对于不易挥发的化合物则不适用。
液相色谱法分为高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UHPLC），通过使用不同的色谱柱和移动相来实现黄酮类化合物的分离和定量。
这种方法具有分离效果好，灵敏度高，且适用范围广的优点。
化学法是一种相对简单的测定黄酮含量的方法。
常见的化学法包括显色反应法、比色反应法和化学滴定法等。
显色反应法通过将黄酮化合物与特定试剂反应产生有色产物，再通过测定产物的吸光度进行定量分析。
这种方法快速简便，但对于不同的黄酮类化合物，可能需要不同的试剂进行定量。
比色反应法通过与金属离子或有机碱反应，产生有色络合物，从而测定黄酮含量。
相比之下，化学滴定法需要使用标准溶液进行滴定，通过滴定的体积或浓度差计算黄酮含量。
这种方法操作简单，但限制较大，只适用于某些特定化合物的测定。
总结起来，测定黄酮含量的方法有光谱法、色谱法和化学法等。
枸杞色素中黄酮含量测定国标
枸杞色素中黄酮含量测定国标引言枸杞是一种传统的中药材，被广泛用于保健和药物制剂中。
枸杞中含有丰富的黄酮类化合物，具有多种生理活性和保健功能。
因此，准确测定枸杞色素中的黄酮含量对于评价其质量和功效非常重要。
本文将介绍国标对于枸杞色素中黄酮含量测定的要求及相关方法。
国标要求根据国家药典委员会发布的《中华人民共和国药典》（2020年版），对于枸杞色素中黄酮含量的测定有以下要求：1.测定方法：采用高效液相色谱法（HPLC）进行测定。
2.检测波长：选择适当的检测波长进行分析。
3.校正曲线：建立合适的校正曲线，并确定分析所需样品体积。
4.样品处理：对样品进行适当处理，如提取、过滤等。
5.仪器条件：设置合适的仪器条件，如流速、柱温等。
6.数据处理：采用适当的数据处理方法，如峰面积法、外标法等。
7.质量控制：采用质量控制样品进行测定，并计算相对标准偏差。
测定方法根据国标要求，我们可以采用以下步骤来测定枸杞色素中黄酮含量：1.准备样品：选择符合要求的枸杞样品，并将其研磨成细粉。
2.提取样品：将细粉加入适量的溶剂中，如甲醇或乙腈，并在适当的条件下进行提取，如超声波提取或加热提取。
3.过滤样品：将提取得到的液体通过滤纸或微孔过滤器进行过滤，以去除杂质。
4.准备标准溶液：根据国标要求，选择适当浓度的黄酮标准物质，并按照一定比例稀释成不同浓度的标准溶液。
5.建立校正曲线：使用HPLC仪器，在适当条件下对不同浓度的标准溶液进行分析，并记录峰面积和浓度之间的关系。
根据这些数据建立校正曲线。
6.样品测定：将经过处理的样品注入HPLC仪器进行分析，记录峰面积。
7.计算含量：使用校正曲线，将样品的峰面积与标准溶液的浓度进行对应，并计算出样品中黄酮的含量。
8.质量控制：使用质量控制样品进行测定，计算相对标准偏差并确保测定结果的准确性和可靠性。
结论通过采用HPLC法测定枸杞色素中黄酮含量，我们可以得到准确且可靠的结果。
根据国标要求，我们需要建立合适的校正曲线，并在适当条件下对样品进行处理和分析。
中国药典中黄酮的含量
中国药典中黄酮的含量黄酮是一类天然的植物化合物，具有广泛的药理学特性。
在中医中，许多草药都含有黄酮成分，因此，在中国药典中，对黄酮的含量有着详细的规定和检测方法。
第一步，需要定义黄酮的含义和作用。
黄酮是一类具有苯丙酮骨架的化合物，广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性。
在中草药中，黄酮类化合物也是重要的药用成分，常用于治疗肝病、心脑血管疾病、癌症等。
第二步，介绍中国药典对于黄酮含量的规定。
根据中国药典2015版，对于黄酮含量的检测标准有两种，分别是UV分光光度法和高效液相色谱法（HPLC）。
以某药材为例，其中黄酮含量的检测标准如下：（1）UV分光光度法测量波长：340nm对照品溶液的质量浓度：1mg/ml线性范围：0.010~0.600mg/ml（2）HPLC法色谱柱：C18检测波长：365nm流速：1.0ml/min某葛根茎黄酮总含量≥4.5%(HPLC法)第三步，讲解黄酮含量的检测方法。
在中药材中，黄酮类化合物的提取方法比较复杂，通常需要采用超临界CO2萃取、超声波提取等技术。
在提取后，根据中国药典的方法，可以采用UV分光光度法或者HPLC法进行定量分析。
其中，UV分光光度法相对简单，仅需要测定药液在波长为340nm处的吸光度即可，但该方法存在选择性差的问题。
而HPLC法则更加准确，采用色谱分离技术对化合物进行分离，再进行检测。
但该方法的复杂度较高，需要专业的检测设备。
最后，需要指出的是，药材中黄酮的含量受许多因素的影响，如采摘时机、存放条件等，因此，该含量是有一定浮动性的。
而中国药典的检测方法及标准，旨在保证药材品质的稳定性和定量性，在中药材的质量控制上具有重要的意义。
总黄酮含量的测定原理
总黄酮含量的测定原理
总黄酮含量的测定原理是通过化学分析方法，利用黄酮类物质与特定试剂发生化学反应产生显色或荧光物质，并据此测定总黄酮含量的多少。
常用的测定方法包括铝盐显色法、氧化还原法和高效液相色谱法。
其中，铝盐显色法是最常用的一种方法。
铝盐显色法基于黄酮类物质与铝离子（如铝酸盐）形成的稳定络合物可以表现出明显的颜色。
具体操作时，首先将样品提取物与铝试剂混合，在适当的条件下（如合适的温度、酸碱度等），黄酮类物质与铝离子发生络合反应，生成显色物质。
然后，使用分光光度计等仪器测定样品的吸光度或荧光强度，通过与标准曲线比对，计算出样品中总黄酮含量的浓度。
铝盐显色法测定总黄酮含量的原理基于黄酮类物质的结构特点，常规黄酮类物质中含有酚羟基（-OH）和芳香环。
铝离子与酚
羟基结合形成络合物，可以通过吸收特定波长的光线而显色。
反应的稳定性取决于黄酮对铝离子的亲合性，不同黄酮类物质的亲合性不同，因此测定不同种类黄酮的总含量时，可能需要根据不同物质的特性进行修正。
总之，总黄酮含量的测定原理是基于黄酮类物质与铝离子的化学反应，并据此测定样品中总黄酮含量的浓度。
不同的测定方法略有差异，但原理基本相同。
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黄酮含量测定
一、黄酮含量的测定方法
1、样品的处理
取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。
2、标准曲线的绘制
准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。
然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。
以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。
3、黄酮的提取（微波提取法）
准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。
加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。
4、黄酮含量的计算
吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。
再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。
加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。
加入蒸馏水2.8ml，摇匀放
置15min。
以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。
带入标准曲线中，计算黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）= c*v/m
式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；
v为提取液总体积（ml）；
m为叶片干重。
二、矿质元素的测定
每份需0.2g。