粪大肠菌群的测定演示文稿.

(2)
三倍乳糖蛋白胨培养基
按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培 养液，制法同上。
注：本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品
的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。
(3)
成分： 胰胨 乳糖
EC 培养液
20g 5g 1.5g
胆盐三号
磷酸氢二钾（K2HPO4）
适用 范围

适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定
1.2 方法原理
粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在 44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大
肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的
大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大 肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。 多管发酵法是以最可能数（most probable number），简称 MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水
MPN值 MPN指数 10 （mL） 接种量最大的一管（ mL）
• 表3 最可能（MPN） 表
作 业
1. 为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受粪
便污染的情况？
2. 根据试验情况，报告每升水中含粪大肠菌群的数目。
谢谢！
杜 氏 小 管 10 ml 1倍
生化培养箱 培养条件： 37℃、24h
3.4 观察粪大肠菌群的初发酵结果 1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）
2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）
表2.1 记录—初发酵阳性管数 由接种量为 由接种量为 由接种量为 10-3mL管转接 10-4mL管转接 10-5mL管转接 阳性管数
任务7 粪大肠菌群ห้องสมุดไป่ตู้测定
1 2 测定方法和原理 试剂和仪器 测定过程 结果计算
3
4
4.1 粪大肠菌群测定的结果分析与报告
• 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3 中查得每升水样中的粪大肠菌群。 • 接种5份10mL 水样、5 份1mL 水样、5 份0.1mL 水样时， 查表3 求得MPN 指数，MPN 值再乘10，即为1L水样中的粪 大肠菌群。如果接种的水样不是10mL、1mL 和0.1mL，而 是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表3 求得 MPN 指数，再经下式计算成每100mL 的MPN 值。
体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
任务7 粪大肠菌群的测定
1 2 测定方法和原理 试剂和仪器 测定过程 结果计算
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2.1 培养基和试剂
(1)
单倍乳糖蛋白胨培养基
成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳 糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水 1000mL 制法： 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中， 调节pH 为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀， 分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115 ℃灭菌20min，贮存于暗处备用。
职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库
《环境监测》
项目四：城镇污水监测 任务7 粪大肠菌群的测定
主讲教师 李孝坤
任务7 粪大肠菌群的测定
1 2 测定方法和原理 试剂和仪器 测定过程 结果计算
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1.1 方法名称与适用范围
方法
名称

水质 粪大肠菌群的测定——多管发酵法 HJ/T 347-2007
3.5 粪大肠菌群的复发酵试验
• 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养 物转接到EC培养液中。 • 在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h。培养后立即观察，发酵 管产气则证实为菌群阳性。
表2.2 记录—复发酵阳性管数 由接种量为 由接种量为 由接种量为 10-3mL管转接 10-4mL管转接 10-5mL管转接 阳性管数
杜 氏 小 管
杜 氏 小 管
杜 氏 小 管
10 mL 1倍
10 mL 3倍 10 mL 1倍 10 mL 1倍
（3） 准备其他要灭菌的物品
水源 90 ml 无菌水 水
9 ml 无菌水
移液管
（4） 灭菌:115 OC，20 min
3.2 水样制备及稀释
（1） 采样瓶
（2）采集污水处理厂出水口的水样
磷酸二氢钾（KH2PO4） 氯化钠 蒸馏水
4g
1.5g 5g 1000mL
制法： 将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高 压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH 应为6.9。
2.2 仪器和设备
高压灭菌锅
生化培养箱
任务7 粪大肠菌群的测定
1 2 测定方法和原理 试剂和仪器 测定过程 结果计算
• 表1
接种水量参考表
• 由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的 浓度梯度为10-3、10-4、10-5。
（2） 乳糖蛋白胨培养基分装
如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨 培养液5mL；如接种量为1mL或少于1mL，则可接种于普通浓度的 乳糖蛋白胨培养液10mL中。
杜 氏 小 管
3
4
3.1 培养基制备及灭菌
（1）水样接种量的确定 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。
每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五
管。 相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染 水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、 0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。
（3）水样的稀释
10 mL 1 mL
1 mL 1 mL 1 mL
原液
90 mL 无菌水 10-1
9 mL 无菌水 10-2
9 mL 无菌水 10-3
9 mL 无菌水 10-4
9 mL 无菌水 10-5
3.3 粪大肠菌群的初发酵
10-3
10-4
10-5
杜 氏 小 管 10ml 3倍
杜 氏 小 管
10 ml 1倍