膜-胞浆蛋白提取方法

有效期： 一年。
产品简介： 哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜
蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制 备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。 去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A，2ul 蛋白酶抑制剂混合物，2ul 蛋白稳定剂，
高速涡旋振荡 15 秒，置冰上 10-15 分钟。
4. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，13000×g 条件下离心 5 分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴 5-10 分钟，37℃下②2000g
B． 组织蛋白提取 1. 取适量组织样本剪碎，加冷 PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或 用液氮研磨），冰上静置 5 分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。 2. 在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，弃上清。 3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 ຫໍສະໝຸດ Baidu格 试剂 A 试剂 B 试剂 C
蛋白酶抑制剂混合物 蛋白稳定剂
BB-3111-1 50T 10ml 20ml 10ml
250μl 100ul
BB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul
储存条件： 蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存； 蛋白提取液 2-8℃保存。
参考文献：
● 李素芬, 杨鹰. 不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用 第三军医大学学报, 2010,32(23): 2530-2532.
● 何鸿保 孙浩等. 5-Aza-CdR 对肾细胞癌 Caki-1 细胞生长及 E-钙黏蛋白基因表达的影响 江苏大学学报, 2011 年 01 期
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 活性蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151
贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提 取试剂盒。本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。提取 过程简单方便，可在 1 小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交 叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫 共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用实例：
1
4
4
图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western
照片。图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
使用方法：
A． 细胞蛋白提取 1. 取 5-10×106 个以上细胞①，在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。
离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层约为 20μl。 6. 收集上层，即为胞浆蛋白③。 7. 用 150-200μl 冰冷的试剂 B 稀释下层相，混匀后冰浴 2min，37℃水浴 5-10 分钟，
37℃下②2000g 离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层相约为
20μl。 8. 按步骤 7 再次抽提下层相(此步骤可以选做)。 9. 用 80-200μl 冰冷的试剂 C 稀释下层相，即得膜蛋白。 10. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 真菌蛋白提取试剂盒 磷酸酶抑制剂混合物 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） 酵母蛋白提取盒（2D 电泳用） 线粒体蛋白提取盒（2D 电泳用）
BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3182 BB-3185 BB-3191
● 余冬梅 陈明. 雷米普利通过干预瞬时感受器阳离子通道 C3 的表达对心肌纤维化的影响 重庆医科大学学报, 2011 年 01 期
● 赵萍 贺英 等.
山羊支原体山羊肺炎亚种 M1601 株外膜蛋白的免疫原性
中国兽医科学, 2010 年 12 期
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BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3181 BB-3183 BB-3187