原花色素分离纯化及鉴定

原花色素的提取纯化和鉴定

(一)山楂原花色素的提取

(二)原花色素的测定（盐酸-正丁醇法）

原理

原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分

离得到的在热酸条件下能产生花色素的多

酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。

原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合

而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，

此外还有三聚体，四聚体等。依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。

生理功能：

1.最好的心脏保护剂。抵御引发心血管病的诱变因素的冲击。强化血管，有消肿化瘀的功效。减少毛细血管的阻力和改善渗透性，使细胞更容易吸收养分与排除废物。

2.高校抗氧化能力。清除氧自由基的能力比

其他天然抗氧化剂如胡萝卜，维生素C和E，儿茶素等强很多。

3.产生组胺的抑制剂，减轻炎症。抗过敏，皮肤保健，抗衰老。

利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附，洗脱得到原花色素。

D101树脂是一种球状，非极性教练聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类，黄酮类，生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取泪滴性质的有机物质。

原花色素的检测方法：

1.紫外分光光度法：利用原花色素在波长280nm处具有最大吸收的特点。该方法简便易行，但提取物成分多样，标准难定。

2.香草醛检测法：原花色素在酸性条件下，其组成单元儿茶素的A环上的羟基和香草醛发生缩合反应，在浓酸的作用下形成的产物变为有色的正离子。

3.铁盐催化比色法

4.薄层层析法

5.HPLC法

6.HPLC-MS质谱法

试剂：

1)1mg/ml原花色素标准品（实验室提供）

精确称取10.0mg原花色素标准品用甲醇溶解，与10.0ml容量瓶中定容至刻度。

2)H cl-正丁醇（自配）

取5.0ml浓盐酸加入95.0ml正丁醇中混匀。

3)2%硫酸铁铵：称取2.0g硫酸铁铵溶于100.0ml2.0mol/LHCl中。

4)样品液：将上次实验收集的样品溶液用甲醇稀释至一定浓度（1.0~3.0mg/ml）。

操作

1.称取新鲜山楂10.0g，剪成细小块状，置于锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，沸水浴45min，间期混匀。冷却后加入20ml蒸馏水，抽滤，滤液备用。

2.取一根层析柱（1.5×20cm），洗净，竖直装好，关闭出口，加入蒸馏水约1cm高，用烧杯取一定量已处理好的大孔吸附树

脂D-101，搅匀，严管内壁缓慢加入，待柱底积约1cm高时，缓慢打开出口，继续装柱至高度15cm（液面高于树脂约3cm）。

3.平衡：用蒸馏水洗2倍体积的柱床体积（约30ml），控制流速在1ml/min左右,至流出液pH显中性。

4.滤液上样(约2ml/min)。上完样后，先用蒸馏水洗2倍柱床体积洗脱（1ml/min 约

30min），然后换60%乙醇进行洗脱，控

制流速在1ml/min。待有红色液体流出时开始收集，直至收集液无红色为止。

5.将收集液用60%乙醇定容至100ml，留作测定。

注意事项：

1.实验前应检查层析柱是否完好，有无堵塞或漏气现象。

2.装柱要求连续、均匀、没有气泡和断纹，液面不得低于树脂表面，否则应重新装柱。

3.洗脱时流速不宜过快。