采血管中柠檬酸钠溶液浓度测定方法研究

一次性使用真空采血管又叫一次性使用人体静脉血样采集容器，简称采血管，是用于体外诊断检查，制造商预期一次使用，含有一定真空度的商品。由盖帽、塞子、试管、添加剂或附加物等组成。根据临床需求不同，产品添加剂可以有很

多种不同类型，比如添加剂EDTA 类，为血常规管，用于血液学血常规、全血检测；添加剂为肝素类，用于快速血浆生化、血流变检测；添加剂为柠檬酸钠类，有血凝管用于凝血机制（PT 、APTT 、凝血因子）检测，有血沉管用于血细胞沉降率检测；有促凝管用于生化、免疫、血清等检验血液样本的采集和贮存等等。这些产品具有一定的促凝或

者抗凝作用，但是产品的性能怎样完全取决于产品的预置真空度和添加剂的多少。当产品的真空

采血管中柠檬酸钠溶液浓度测定方法研究

徐向彩 文燕 国家食品药品监督管理总局杭州医疗器械质量监督检验中心，国家重点实验室 （杭州 310009）

文章编号：1006-6586(2013)07-0045-04 中图分类号：R197.39 文献标识码：A

收稿日期：2012-08-21

度确定时，完全取决于产品中添加剂的多少。本文以添加剂为柠檬酸钠溶液的血凝管和血沉管为例，介绍柠檬酸钠溶液浓度的检测方法。

柠檬酸钠溶液作为采血管的抗凝剂之一，对产品性能起着至关重要的作用，因而有必要控制真空采血管中柠檬酸钠溶液的浓度。在YY0314-2007《一次性使用人体静脉血样采集容器》附录NC中，柠檬酸钠用于凝血化验的抗凝剂浓度应为（105~109）mmol/l（即3.13%~3.2%，通常被称为3.2%）的二水合物形式的柠檬酸钠[1]，用于血细胞沉降率检测的抗凝剂浓度应为（123~135）mmol/l（3.61%~3.96%,通常被称为3.8%）的二水合物形式的柠檬酸钠。本文分别通过渗透压法、高效液相色谱法、非水滴定法、原子分光光度法对柠檬酸钠溶液浓度进行测定，通过比较，确定了简单可行的检测方法。

1.仪器与材料

1.1 仪器

渗透压摩尔浓度测试仪（天津天河医疗仪器有限公司SMC-30C），高效液相色谱仪（美国Waters公司），原子分光光度计（美国PE公司AA800），超纯水机（默克密理博Milli-Q）。1.2 材料

选用实验室检品为本次试验样品，柠檬酸钠二水合物（分析纯），乙二酸（分析纯），磷酸（色谱纯），甲醇（分析纯），超纯水（实验室自制），高氯酸（0.1mol/l标准滴定溶液），冰乙酸（分析纯），乙酸酐（分析纯），结晶紫（分析纯），钠标准溶液（500mg/l,国家环境保护总局标准样品研究所，中华人民共和国国家标准GSB07-1262-2000，钠标准溶液证书101405）。

2.方法

2.1 渗透压法

2.1.1标准曲线的制备

精密称取柠檬酸钠10g，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度约为100mg/ml的溶液，再精密量取上述溶液适量，制成含柠檬酸钠为10-100mg/ml的标准溶液。按照《中华人民共和国药典》2010版附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法，分别测定每点的渗透压。绘制标准曲线并求出回归方程。

2.1.2样品溶液的制备

取采血管样品，分别测定每管的渗透压，将样品测定值代入回归方程并计算样品中柠檬酸钠溶液的浓度。

2.2高效液相色谱法

2.2.1 测试条件

色谱柱：KC-811；流动相：0.5%磷酸溶液；流量：1.0ml/min；柱温：35℃；检测器：UV；进样量：10µl。

2.2.2标准液的配制及标准曲线的绘制

2.2.2.1标准贮备液制备

将柠檬酸钠在105℃条件下干燥3h后，精确称取2.5g于50ml容量瓶中，溶解，稀释，摇匀，定容，即得到标准贮备液50mg/ml。

2.2.2.2标准原液制备

精确移取2.2.2.1项下标准贮备液5ml、12.5ml分别置于25ml的容量瓶中，用水稀释，摇匀，定容，即得到标准原液10mg/ml、25mg/ml。

2.2.2.3 内标液制备

精确称取0.5g乙二酸到500ml的容量瓶中，用水稀释，溶解、摇匀，定容即得。

2.2.2.4 标准液制备

分别精确移取10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml 标准原液2ml到100ml容量瓶中，再加入3ml的乙二酸内标液，用水稀释，摇匀，定容，得到0.2mg/

ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml的标准液。

2.2.2.5标准曲线的绘制

用高效液相色谱仪对2.2.2.4项的标准液进行测试，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。

2.2.3供试液的配制与测试

取采血管，第一次称重得W1（g），用约20ml的水充分转移采血管内柠檬酸钠溶液至50ml的容量瓶中，再加入3ml乙二酸内标液后，用水稀释，摇匀，定容得供试液。用高效液相色谱仪测定供试液，通过标准曲线计算得到供试液浓度C（mg/ml）,吹干采血管内壁第二次称重得W2（g），样品中柠檬酸钠溶液的密度以1.0g/ml 计算。

2.2.4计算公式

CX=50×1.0×C/294.1×(W1-W2)

CX—样品中柠檬酸钠溶液的浓度，mol/l；

C—表示柠檬酸钠溶液的测试浓度，从标准曲线上读出，mg/ml；

（W1-W2）—表示采血管内柠檬酸钠溶液的重量，g

2.3 非水滴定法

2.3.1 样品前处理

取20支采血管，分别用实验用水将样品内的柠檬酸钠溶液充分转移至100ml的蒸发皿中，在水浴上蒸干。

2.3.2 测定方法

取上述蒸干后的柠檬酸钠固体粉末,用适量约10ml冰乙酸加热充分溶解并转移到碘量瓶中,放冷，加乙酸酐10ml,再加 0.5％结晶紫溶液2滴,用0.1N的高氯酸标准溶液滴定至溶液显蓝绿色,同时做空白滴定试验进行校正。

2.3.3 计算公式

C X=N(V-V0)×0.09803×1000 /294.1×20×V1

CX—柠檬酸钠溶液浓度，mol/l；

N—高氯酸标准当量浓度；

V—试样滴定消耗用高氯酸标准溶液体积,ml；

V0—空白滴定消耗用高氯酸标准溶液体积,ml；

V1—采血管中柠檬酸钠溶液的体积，ml；

0.09803—1毫克当量柠檬酸钠的质量，g。2.4 原子分光光度法

2.4.1标准溶液的制备

依据样品中钠的浓度以及钠元素的检测范围，选择以下浓度梯度进行稀释，20μg/ml，40μg/ml，60μg/ml，80μg/ml。

2.4.2样品溶液的制备

取2只采血管样品，分别用超纯水转移至50ml容量瓶中，反复清洗，合并所有清洗液，加水稀释至刻度，摇匀，分别用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，即得二份供试品溶液。按照同样方法制备空白对照液。

2.4.3 试验方法

分别将钠标准溶液的不同浓度进样，得到不同的吸收率，以标准溶液的浓度为横坐标，吸收率为纵坐标，得到回归方程及相关系数，同样的方法将样品溶液分别进样，从曲线上可以读取样品的浓度，根据稀释倍数换算出柠檬酸钠溶液的浓度。

2.4.4 计算公式

X=C×50×0.001/23×V×3

X—样品中柠檬酸溶液的浓度,mol/l；

C—曲线上钠元素的浓度，μg/ml；

V—样品中柠檬酸钠溶液的体积，ml。

3.结果

3.1 渗透压法（表1）

3.2 高效液相色谱法（表2）3.3 非水滴定法（表3）3.4 原子分光光度法（表4）