实验八 细胞融合实验

三、材料、试剂与器材
பைடு நூலகம்
1、材料： 鸡红细胞液 2、试剂：

Alsever液：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、NaCl 0.42g 溶于
100ml蒸馏水

GKN溶液：NaCl 8g、KCl 0.4g、Na2HPO4.2H2O 1.77g、 NaH2PO4.H2O0.69g 、葡萄糖2g、酚红0.01g 溶于1000ml蒸 馏水中

0.02%詹纳绿B染液：用生理盐水配 50%PEG溶液：称取一定量PEG(WM=4000） 放入小烧杯，沸水浴加热，使其融化，冷却 到50度时，加入等体积预热至50度的GKN溶 液，混匀，备用

0.9%生理盐水

3、器材： 离心机、水浴锅、显微镜、电脑、载玻片、
盖玻片、移液器等
四、实验操作
实验八 动物细胞融合实验
---------鸡红细胞融合实验
一、目 的

1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理
2、通过PEG诱导的鸡红细胞之间的融合 实验，初步掌握细胞融合技术
二、实验原理
PEG可与H2O借氢键结合， PEG作用：①可促
使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双 分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合， 进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细 胞。 所以，在高浓度50%PEG溶液中自由水消失，导 致细胞脱水是质膜结构发生改变，引起细胞融合。

最后弃去上清，加GKN液2ml，充分混匀， 1500r/min离心10min,弃去上清，若离心液为 0.5ml，加入4ml的GKN溶液（体积比1:9），制 成10%细胞悬液；

3、细胞悬液处理： 取上述细胞悬液1ml放入离心管中，然后放入39℃水浴 中预热，同时将50％PEG液一并预热20min，20min后将慢慢
五、观察与结果

1、在显微镜下，观察细胞融合情况，计
算细胞融合率

2、细胞融合率=视野里发生融合的细胞
核总数/视野里细胞核总数×100%
六、实验报告要求：
1、计算细胞的融合率
2、绘图所观察到的细胞融合图

3、思考：
细胞融合率受哪些因素的影响？

在进行细胞融合时，要注意哪些问题？

1、采集鸡血： 抽取公鸡2ml血，加入盛有6ml的Alsever液广口瓶中， 使血液与Alsever液的的比例达1∶4，混匀后可在冰箱中存 放一周。 2、制备细胞悬液：
取储存鸡血1ml加入4ml的0.9％生理盐水，充分混匀， 1500r/min离心5min，弃去上清，加入0.5ml的0.9％生理盐水， 重复上述条件离心两次。
逐滴加0.5ml的50％PEG溶液沿离心管壁加入到1ml细胞悬液
中，边加边摇匀，然后放入39℃水浴中保30min；加入GKN 溶液8ml，静止于水浴中20min左右；1000r/min离心5min， 弃去上清，加4mlGKN溶液再离心1次；弃去上清，加入GKN 液少许，混匀。

4、制片：
取少量悬浮于载玻片上，加入詹纳绿B染 液，用牙签混匀，5min后盖上盖玻片，观 察细胞融合情况。