4-中药制剂分析_含量测定详解
第四章 中药制剂的含量测定
EX、ES分别为供试品和对照品溶液的百分吸光系数 注意：仪器和操作条件的控制
3．标准曲线法
配制一系列不同浓度的对照品溶液 （n>5），分别测定吸光度，绘制A-C曲 线或求出回归直线方程（r≥0.999）。 在相同条件下测定供试品溶液的吸 光度，求得供试品中被测成分的浓度或 含量。
氧化还原滴定法
适用于测定具有氧化还原性的物质 如：含酚类、糖类及矿物药Fe、As等成分 的中药制剂。
需严格控制实验条件，且方法的专属性不高（干扰 因素较多）。
滴定分析法的计算
1. 滴定度T 每1mL滴定液所相当的被测物质的重量（mg/mL） aA + bB = cC + dD T= CA ∙ MB ∙ b/a 注意：滴定剂与被测药物的计量关系
适用：
1. 湿法不易破坏完全的有机物；
2. 某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。
不适用：含易挥发性金属（如汞、砷等）
有机药物的破坏
注意事项：
（1）加热或灼烧时，应控制温度在 420℃以下，防止金属化合物的挥发
（2）一定要灰化完全
（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易
溶解，但不要轻易弃去
第二节 常用定量分析方法
液一液萃取法
⒈ 直接萃取法 ：利用被测成分与干扰成分在有机溶 剂（萃取剂）中的溶解度不同，通过多次萃取达到 分离净化的目的。 萃取次数：实验考察（回收率符合） 溶剂的选择：根据被测组分疏水性的相对强弱 选择极性适当的溶剂 水相pH的控制：弱酸性成分 pH≤Ka-2 弱碱性成分 pH≥PKa+2 盐析作用：水相用NaCl饱和，提高提取率。
LSE常用填料 ：
⒈ 硅胶、氧化铝等： 传统吸附剂 不极性吸附作用 氧化铝：用于生物碱、苷类等碱性、中性成分的 测定，吸附酸性成分 硅胶：适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留 碱性化合物。 ⒉ 键合相硅胶： 十八烷基键合相硅胶（C18，ODS）、 C8 ——分离脂溶性杂质或成分 苯基、氰基键合相硅胶 ——分离水溶性杂质或成分
中药制剂分析第四章中药制剂的含量测定
2.速率理论 H=A+Cu
（二）ＨＰＬＣ实验条件的选择 １.色谱柱选择 ２.流动相选择 ３.洗脱方式 ４.检测器 ５.ＨＰＬＣ前处理
（三）ＨＰＬＣ法分类及方法 １.反相键合相色谱
１.键合相色谱法 ２.正相键合相色谱 ３.离子对色谱法 ４.离子抑制色谱法
２.胶束色谱法
六、荧光分析法 七、原子吸收分光光度法
2.定量方法 外标一点法
（1）外标法 外标两点法
（2）内标法 （3）回归曲线定量法
四、气相色谱法
（一）基本原理
气化后的试样被载气带入色谱柱，由 于各组分在两相间的作用不同，在色谱柱 中移动有快有慢，经一定柱长后得到分离， 以此被载气带入检测器，将各组分浓度或 质量变化转化为电信号变化记录为色谱图， 利用色谱峰保留值进行定性分析，利用峰 面积或峰高进行定量分析。
验证内容有：
准确度 精密度(包括重复性,中间精密度,重现性) 专属性、 检测限、定量限、 线性、范围 耐用性。
一、准确度
准确度系指用该方法测定的结果与真实 值或参考值接近的程度，一般用回收率 （%）表示。准确度应在规定的范围内测 试。用于定量测定的分析方法均需做准确 度验证。
1、测定方法的准确度
（一）基本原理 一般是指波层色谱斑点的色谱扫描 固定波长，斑点移动，测定A-l或F-l曲线 根据波层扫描的测定方式可分为薄层吸收
扫描法和薄层荧光扫描法
1.薄层吸收扫描法
适用于在可见、紫外区有吸收的物质， 及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物 的样品组分，可分别以氘灯和钨灯为光源， 在200-800nm波长范围内选择合适波长进行 测定。
精密度包含重复性、中间精密度和重现 性。
三、专属性
专属性系指在其他成分可能存在的条件 下，采用的方法能够正确测定出被测成份 的特征。
中药制剂的含量测定
中药制剂的含量测定前言随着中药制剂的广泛应用，如何准确的检测中药制剂的含量成为了一项重要的任务。
这不仅关系到中药制剂的质量，也与人们生命安全相关。
因此，中药制剂的含量测定一直是中药研究领域中的热点问题。
本篇文档将介绍中药制剂含量测定的原理、方法、步骤以及注意事项。
原理中药制剂含量的测定方法主要分为物理方法和化学方法两类。
物理方法主要有干燥法、称量法等；化学方法主要有滴定法、比色法、显色法等。
其中，比色法是目前应用最广泛的含量测定方法之一，因其快速、准确、操作简单、经济实用等优点而广受欢迎。
方法1.比色法•器材：天平、分析天平、分别装有定量凹板的试剂瓶、比色皿；•试剂：药物溶液、重铬酸钾溶液、稀硫酸、碳酸钠溶液、磷酸二氢钠溶液、苯甲酸溶液、氯仿、无水乙醇、苯酚溶液。
实验步骤如下：1.取一定数量的药物样品称重，加入适量的碳酸钠溶液，胶凝宁影响测定过程，加碳酸钠则可中和胶凝宁的影响；2.将药物样品进行干燥、灰化等处理；3.将试剂瓶中的定量凹板定量取药物样品（准确取药物，避免空气中水蒸汽和杂质的污染），加稀硫酸、重铬酸钾溶液等进行溶解，使其中的有机物被氧化成二价铬（Cr2+）离子；4.加入苯甲酸溶液，将其中的铬酸根离子（CrO42-）转化为铬酸（Cr2O72-）；5.加入磷酸二氢钠溶液，其中的铬酸与磷酸二氢钠反应生成深绿色络合物；6.用无水乙醇稀释药物成份，将溶液量稀释至定量容器规定的刻度，过滤残留物；7.取药液50ml放入比色皿中，加入苯酚溶液，在显色剂不变的情况下取得适当的颜色；8.用橄榄油从药典比色皿的背面直接观察，直至标准色完全与样品色匹配为止；9.记录比色皿中药典含量所对应的颜色，由比色皿上的刻度计算出其所含药物的含量。
2.滴定法•器材：托盘电子天平、分析天平、容量瓶、滴定管、pH计、阴离子交换树脂柱等；•试剂：硝酸银、氮氢化钠溶液、磷酸钠、草酸。
实验步骤如下：1.取一定数量的药物样品称重，加适量纯水制成1：10药水；2.用pH计测定药水的pH值，若超出一定值域，则需加入少量磷酸钠缓冲调整药水pH，使其在7~10之间；3.将药水放入分析样品瓶中，使用阴离子交换树脂柱滤过，以去除异物离子等杂质物质；4.取药水20ml，加入搪瓷瓶中，加入足量氮氢化钠溶液实现药物中的钠碱滴定，并用硝酸银滴定药物中的氯离子。
中药制剂分析含量测定
中药制剂分析含量测定中药制剂含量测定是一项非常重要的分析工作，它用于确定中药制剂中各种有效成分的含量以及检查其是否符合国家标准。
本文将详细介绍中药制剂含量测定的一般方法和实验步骤。
中药制剂含量测定的一般方法可以分为化学分析方法和物理分析方法两大类。
化学分析方法是通过化学反应测定中药制剂中各种成分的含量。
其中最常用的方法是滴定法、比色法、显色反应法、光谱法、色谱法等。
滴定法是一种常用的定量分析方法，通过滴定一定浓度的标准溶液来测定中药制剂样品中其中一种成分的含量。
它具有简便、快速、准确的优点，适用于多种中药成分的含量测定。
比色法是通过比较溶液的颜色来测定其中其中一种成分的含量。
一般是将样品与标准溶液进行比较，用颜色的深浅或者吸光度的大小来确定其含量。
比色法适用于颜色明显的中药成分的含量测定，如黄酮类、黄醌类、鞣质类等。
显色反应法是利用染色剂与中药中的特定成分发生显色反应，从而测定其含量。
常见的显色反应有碘酸反应、邻氨基苯磺酸反应、重铬酸盐反应等。
显色反应法适用于含氮物质、鞣质类、游离胺类等成分的含量测定。
光谱法包括紫外-可见光谱法、红外光谱法、核磁共振光谱法等。
这些方法可以根据物质的吸收、散射和发射光谱来分析和测定其中的有效成分。
色谱法是将中药制剂中的成分分离并定量测定的方法。
常用的色谱方法有高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法等。
其中，高效液相色谱法广泛用于中药制剂的含量测定，它具有快速、高效、准确的特点。
物理分析方法是通过物理性质的测定来确定中药制剂中成分的含量。
常用的方法有比重法、测定固体颗粒尺寸的微粒分析法、测定其中一种物理性质的方法等。
比重法是利用密度的性质来测定中药制剂中其中一种成分的含量。
它通过测定制剂的比重来估计该成分的含量，适用于比重稳定的中药成分含量的估算。
微粒分析法是通过测定中药制剂中的固体颗粒尺寸来间接判断其中的有效成分含量。
这种方法适用于固体颗粒尺寸与有效成分含量之间存在一定关系的中药制剂。
中药制剂的含量测定解析
第一节 含量测定样品的处理
样品的分离净化 关键——保留有效成分
原则：从提取液中除去对测定有 干扰的杂质，而又不损失被测定 成分
依据：被测定成分和杂质在理化 性质上的差异，结合测定方法的 要求
样品的提取
回流提取法
1、提取效率高于冷浸法； 优点
2、每次提取时间为0.5～2小时，直至提取 完全为止。
缺点1、提取杂质较多； 2、不适于对热不稳定或具有挥发性的成分。
第一节 含量测定样品的处理
样品的提取
连续回流提取法
样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发 的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用 新鲜溶剂提取），一般提取数小时方可完 全。
第一节 含量测定样品的处理
样品的提取
关键——提取完全
回流提取法 连续回流提取法 冷浸法 超声法 超临界流体提取法
第一节 含量测定样品的处理
样品的提取
冷浸法
称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后放置，浸泡 提取，溶剂用量为样品重量的10～50倍，并称重。 浸泡时间12～24小时，浸泡期间应注意经常振摇。 取浸泡后的溶液测定有效成分。
沉淀法 蒸馏法 液-液萃取法
A 直接萃取法 B 离子对萃取法
色谱法 消化法
第一节 含量测定样品的处理
样品的分离净化
沉淀法
原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离 沉淀或保留溶液以得到精制的方法。 这种方法须注意：
1）复过方量益母的草试口剂服若液干中水扰苏被碱测的组含分量的测定测定，则应设法除去； 2）利大用量雷氏杂盐质（以硫沉氰淀酸铬形铵式）除作去沉时淀，剂，被在测酸成性分介不质中应可产与生大共部沉淀 而损失分；有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。 3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直 接用重量法测定。
中药制剂分析：04-中药制剂的含量测定-1
使成10ml，各加活性炭0.5g（140℃干燥4～5小时，备
用），置沸水浴中加热半分钟，边加热边搅拌，滤至
25ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液10ml分次洗涤烧杯和
滤器，洗液并入同一量瓶中；另取0.1mol/L盐酸溶液
20ml，置另一25ml量瓶中，作为空白溶液；各精密加 入新制的 2％硫氰酸铬铵溶液3ml，摇匀，用0.1mol/L 盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；置冰水浴中放置1小时， 用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0.1mol/L盐酸溶液为空 白，照紫外-可见分光光度法(附录Ⅴ A)，在520nm波 长处分别测定吸光度，用空白试剂的吸光度分别减去对 照品溶液的吸光度，以吸光度的差值为纵坐标、浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
例 十全大补丸
Ch.P.（2010）
【处方】党参，白术 ，黄芪等
【鉴别】（4）取本品水密丸18g，研细；或取大蜜 丸18g，剪碎，加硅藻土10g，研匀，加乙醚80ml，超声 处理15分钟，弃去乙醚液，残渣挥去乙醚，加甲醇80ml， 超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶 解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇 液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次50ml，再用水 20ml洗涤。正丁醇液蒸干，残渣加水25ml使溶解，通过 Dl01型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm、柱高为13cm）， 先后以水50ml和40％乙醇40ml洗脱，再用70％乙醇80ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为 供试品溶液。
* 被测组分生成沉淀，可用重量法测定含量 或者可重新溶解
例 益母草口服液
Ch.P（2005）
【含量测定】对照品溶液的制备 取在105℃干燥至
中药分析4-含量测定
每片实测含量
每片重量
实测含量
＝
取样量
每片实测含量 标示量％＝ 100％ 每片标示含量 实测量 平均片重 ＝ 100％ 取样量 标示量 平均片重 ＝含量％ 标示量
计算 华山参片（生物碱）
【含量测定】对照品溶液的制备 精密称取
在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每
1mL相当于含莨菪碱75g的溶液。
组分分离，根据被测组分和供试 品的重量比计算组分的百分含量
优点 缺点
准确度高，精密度好 操作繁琐、费时
灵敏度低
测定方法
挥发法 萃取法
沉淀法
1. 挥发法 利用被测组分具有挥发性或
将其转化为挥发性物质，称取挥
发前后供试品的重量，计算被测 组分的含量
例
水分测定法中的烘干法
或干燥失重测定法
重量干燥前 重量干燥后 供试品重量 100%
验，精密量取5mL，置氧化铝柱上，用乙醇25
mL洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，加乙醇
至刻度，摇匀，精密量取2mL，置50mL量瓶中，
用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，照分 光光度法（附录Ⅴ A），在345nm波长处测得吸 收度为0.449，按盐酸小檗碱（C20H17NO4· HCl）
用10mL氯仿振摇提取5分钟，待溶液完全分层后， 再用氯仿提取3次，每次5mL，依次滤入量瓶中， 照分光光度法（附录Ⅴ B）分别在415 nm的波长处测定吸收度为0.304和0.393，计算。
超临界流体
当压力和温度超过物质的临界
点时所形成的单一相态，是介于气
体与液体之间的一种物相，兼有气
体与液体的一些特性
超临界流体萃取优点
1. 密度与液体相似，故溶解性能较强 2. 类似于气体黏度系数小，质量传递快 3. 表面张力为0，故易渗透到样品中带走组分 4. 正常状态下变为气体逸出，易浓集 5. 可在较低温度下萃取，特别适合于分离热 稳定性差的成分
中药制剂的含量测定-中药分析学课件
三、样品的分离净化（色谱法）
固相萃取（ Solid-Phase Extraction ）/液 -固萃取（Liquid-Solid Extraction)
原 理
当目标分析物与SPE填料极性相似时，样品流过 SPE柱后，目标化合物在填料上有较好的保留，而极 性与填料相差较远的非目标化合物或杂质直接流出， 再用适当洗脱液把目标化合物洗脱、收集，可直接 分析或浓缩后分析；或使杂质保留于柱上，直接洗 脱被测成分进行测定。
目的 通过制剂中某种成分的含量高低是否符
合规定来判定药物的优劣
意义 保证中药制剂的质量，达到临床用药有
效、安全、稳定
含量测定的目的与意义
中药制剂含量测定的特点
中药制剂与化学药品含量测定区别
含量测定内 容
对象不同 供试品溶液制备 待测成分确定
中药制剂
化学药品
组成及成分复杂 成分单一 方法繁琐，大多需要净化分 方法简单 离 成分明确，一般 先根据中医药理论选择药味， 选择主要成分 再综合选择待测成分
重量 法定 容
第一节 含量测定样品的处理
供试品的制备方法
2.全部测定法（即总量测定法）：将浸泡 后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至 提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或蒸 干，残留物用另一溶剂溶解，定量转入 量瓶中，稀释至刻度，摇匀，进行测定 注意： 转移完全
乙肝宁颗粒 （黄芪甲苷） 中国药典 2005年版一 部P291
类别 醇溶性 浸出物 测 定
品名 七厘散 刺五加浸膏 刺五加片 儿康宁糖浆 独一味胶囊 鼻窦炎口服液
溶剂 乙醇 甲醇 甲醇 正丁醇 正丁醇 正丁醇
方法 热浸法 热浸法 热浸法
限度（%） ≥60.0 ≥60.0 ≥80mg/片 ≥3.0 ≥8.0 ≥1.2
中药制剂的含量测定
05
中药制剂含量测定的挑战与解决方案
含量测定的准确度与精密度问题
总结词
准确度与精密度是中药制剂含量测定 的关键指标，但实际测定中常常面临 各种挑战。
详细描述
准确度问题主要源于样品处理、仪器 校准、标准品纯度等方面；精密度问 题则与操作技术、仪器性能、样品均 匀性等因素有关。
不同种类中药制剂的测定难点
气相色谱法（GC）
适用于具有挥发性、可气化的中药制剂成分的含量测定。
紫外可见分光光度法（UV-Vis）
利用紫外可见光谱吸收特性进行成分含量测定的方法，具有操作简便、 准确度高等优点。
质谱法（MS）
通过测定中药制剂成分的质荷比来进行成分鉴定和含量测定的方法， 具有高灵敏度、高分辨率的特点。
含量测定的法规与标准
批次质量控制
对每个批次中药制剂进行 含量测定，确保每个批次 的质量符合标准。
持续改进
通过含量测定数据的分析， 不断优化生产工艺，提高 中药制剂的质量和产量。
04
中药制剂含量测定的发展趋势
新技术与新方法的研发
1 2
高效液相色谱法（HPLC） HPLC具有高分离效能、高灵敏度、高分析速度 等优点，适用于中药制剂中多种成分的同时测定。
中药制剂的含量测定
• 中药制剂含量测定概述 • 中药制剂含量测定的流程 • 中药制剂含量测定的应用 • 中药制剂含量测定的发展趋势 • 中药制剂含量测定的挑战与解决方案 • 中药制剂含量测定案例分析
01
中药制剂含量测定概述
定义与重要性
定义
中药制剂的含量测定是指通过一定的方法和技术，对中药制剂中有效成分或指 标性成分进行定量分析的过程。
测定方法的建立
选择合适的测定方法
第四章 中药制剂的含量测定
沉淀法
含量测定样品的预处理
步骤 样品的粉碎 样品的提取 样品的分离净化
样品预处理的目的
将被测成分有效地从样品中释放出来， 将被测成分有效地从样品中释放出来， 并制成便于分析测定的稳定试样。 并制成便于分析测定的稳定试样。 除去杂质、纯化样品， 除去杂质、纯化样品，以提高分析方法 的重现性和准确性。 的重现性和准确性。 富集浓缩或进行衍生化， 富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量 被测成分。 被测成分。 使试样的形式及所用溶剂符合分析测定 的要求。 的要求。
色谱法
常用色谱方法 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 操作方式有柱色谱、薄层色谱、 操作方式有柱色谱、薄层色谱、纸色谱 最常用的为柱色谱法 最常用的为柱色谱法
柱色谱常用的填料 柱色谱常用的填料
硅胶 氧化铝 键合相硅胶 大孔树脂 聚酰胺 硅藻土 纤维素 离子交换树脂
硅胶、 硅胶、氧化铝
键合相硅胶
十八烷基键合相硅胶（简称 十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）、 ）、 苯基、氰基键合硅胶相， 苯基、氰基键合硅胶相，其中十八烷基键合 相硅胶最常用，可用来分开脂溶性 分开脂溶性和 相硅胶最常用，可用来分开脂溶性和水溶性 成分，如苷元和苷的分离。 成分，如苷元和苷的分离
大孔树脂
是最近十几年才出现的新型的高分子分离材 可分为极性 非极性型。极性型为 极性和 料，可分为极性和非极性型。极性型为丙烯 酰胺聚合物， 极性化合物有 化合物有相对强的吸附 酰胺聚合物，对极性化合物有相对强的吸附 如商品XAD-7、8等。非极性型为苯乙 力，如商品 、 等 非极性型为 二乙烯苯的共聚物 的共聚物， 烯和二乙烯苯的共聚物，对非极性水溶性成 有相对强的吸附力，如商品XAD-1、2、 分有相对强的吸附力，如商品 、 、 4、5、D101，D101是最常用的 、 、 ， 是最常用的回收率 (%)R源自D%1 2 3 4 5 6
4-中药制剂分析 含量测定
双波长分光光度法（等吸收点法、系数倍率 发）
三波长法 导数光谱法 一般应用于供试品溶液中含有2中或2种 以上的组分的含量测定。
差示光谱法 利用比样品浓度稍低的标准品 作为空白,进行测定及计算的方法.
紫外－可见分光光度法
计算分光光度法
应用实例：银黄口服液由金银花和黄芩的提取 物组成，其主要成分绿原酸和黄芩苷在紫外区 均有吸收，且吸收峰相互重叠干扰，经测定绿 原酸在278nm和322nm处有等吸收点，且黄芩苷 在278nm处有最大吸收。现测的某银黄口服液 1% E1cm A278nm=0.621，A322nm=0.315，黄芩苷 278nm 1% E =631.20， 1cm 322nm=368.40。试计算该银黄口 服液的黄芩苷的含量。
紫外－可见分光光度法
吸收系数法
A=ECL
对照品比照法
对照品溶液浓度应与供试品浓度接近
（100±10％）
计算分光光度法
等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数 光谱法
紫外－可见分光光度法
吸收系数法
根据Beer定律A=ε cl，若l和吸光系数ε 或
已知，即可根据测得的A求出被测物的浓度。
按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱 装柱方法：湿法装柱、干法装柱 微柱色谱（固相萃取）
样品的分离纯化
色谱法（层析法）
硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分 的层析，强烈保留碱性化合物。
洗脱顺序：极性小→大
氧化铝：带有碱性，分离一些碱性中草药成 分，不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化 合物分离
超临界流体提取法
中药制剂分析重点
中药制剂分析重点
一、中药原料分析
1.含量测定：中药原料含量测定是检测中药原料质量的重要技术手段，一般常用的有化学分析法和物理测定法，如红外光谱、多种定性定量分析法，热分析，电位分析、NMR等。
2.活性成分测定：中药原料活性成分的测定，是指检测药物的主要活
性成分，如皂苷、安息香素、甙类等，常用的测定手段为色谱法、物理分
析法、物理化学测定分析等。
3.扩增技术：中药原料扩增技术，是指对中药原料进行DNA或RNA的
测定，以确定原料中的毒素、有害成分和活性物质，常用的扩增技术有PCR技术、组织胞培养技术等。
二、中药制剂分析
1.含量测定：中药制剂含量测定，指检测中药制剂样品所含有效成分
的含量，通常是指药物成分中的主要活性成分，常用的测定手段有色谱法、物理测定法、电位分析、定性定量分析法等。
2.比重测定：中药制剂比重测定，指检测中药制剂的比重配比，是评
估中药制剂质量的重要技术手段，一般采用重量和体积的测定方法，也可
采用比积仪的测定方式。
3.挥发性检测：中药制剂挥发性检测，指检测中药制剂样品中的挥发
性物质，以确定药物的挥发性物质的含量。
药物分析：中药制剂的含量测定方法
（1）外标法：若标准曲线过原点，测定组分含量变化不⼤，可使⽤外标⼀点法。
由于中药制剂中测定组分含量波动范围较⼤，所以采⽤标准曲线定量。
（2）内标法：中药制剂组成复杂，若使⽤内标法，会增加分离的难度，其组分很容易⼲扰内标峰，所以中药制剂含量测定中，当组成相对简单，杂质不⼲扰内标峰时，才使⽤内标法。
3.供试品溶液的制备由于⾼效液相⾊谱法本⾝具有分离的功能，因此所⽤供试品⼀般经提取制得，不在需要纯化处理。
但组成复杂的制剂，仍需采⽤萃取、柱⾊谱等预处理⽅法对供试品进⾏纯化处理。
中药制剂多含有糖，制备供试液时，宜使⽤⾼浓度的醇或其他有机溶剂提取测定组分，不使⽤⽔为溶剂，以免提出糖污染⾊谱柱，提取的⽅法视制剂的情况⽽定，可采⽤萃取（⽤于液体制剂）、回流或超声震荡提取（固体制剂）等。
由于中药制剂组成复杂，分析时应在分析柱前加预柱。
分析完毕后⼀般⽤⽔或低浓度的醇⽔先洗去糖等⽔溶性杂质，再⽤甲醇等有机溶剂将⾊谱柱冲洗⼲净。
⽰例桂枝茯苓丸中桂⽪酸的含量测定。
本品桂枝为君药，采⽤⾼效液相⾊谱法测定其中桂⽪酸的含量。
供试品的制备精密称取本品细粉约1g，置50ml量瓶中，加50%甲醇40ml，超声震荡提取30分钟，放冷，加50%⾄刻度，离⼼10分钟（1200r/min），取上清液⽤0.45µm的滤膜过滤，取续滤液备⽤。
对照品溶液的制备精密称取桂⽪酸对照品适量，加50%甲醇定量稀释成每ml中含0.01mg的溶液。
⾊谱条件 Inersil 5ODS-Ⅱ柱（25cm×4.6mm）；流动相：⼄腈-0.1%磷酸（29：71）；检测波长285nm；流速1.0ml/min。
⽤外标法测定其含量。
桂⽪酸对照品和样品的⾊谱图见图。
展望 中药制剂质量标准应该能够说明质量与疗效，即疗效与物质基础的关系，其分析检测⽅法应包括理化指标、⽣物指标和疗效指标。
⽅法应简便、快速，具有准确性和专属性的特点。
只要有成品⽣产和销售与使⽤，就需要有质量标准的监测和保证。
中药制剂的含量测定—中药学
⒊大孔树脂：分为极性和非极性型 ，D101最常用 注意：预处理；定量时回收率 ⒋聚酰胺： 氢键吸附——常用于含ph－OH的黄酮类成分 ⒌硅藻土、纤维素：亲水型填料，分配作用 流动相：与水不混溶的有机溶剂 洗脱：亲脂性的成分 ⒍离子交换树脂： 萃取样品液中可离解化合物 除去样品中的离子，防止组分分解
适用：
1. 湿法不易破坏完全的有机物；
2. 某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。
不适用：含易挥发性金属（如汞、砷等）
有机药物的破坏
注意事项：
（1）加热或灼烧时，应控制温度在 420℃以下，防止金属化合物的挥发
（2）一定要灰化完全
（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易
溶解，但不要轻易弃去
第二节
常用定量分析方法
药物含量测定是评价药品质量优劣的 重要手段
二. 样品的分离净化
沉淀法 ：利用某些试剂与被测成分或杂质生成
沉淀，分离沉淀或保留溶液的精制方法 蒸馏法 ：利用某些被测成分具有挥发性，采用 蒸馏法，收集馏出液进行含量测定；或某些成分 经蒸馏分解成挥发性成分，利用分解产物（要求 结构明确）进行测定。 最常用：水蒸气蒸馏法 适用：挥发油，小分子生物碱 优化：蒸馏液中加入一定量无机盐（盐析作用）， 使挥发性成分更完全地蒸馏出来
破坏能力，且防止硫酸的分解损失。
其它湿法
硝酸—硫酸—高氯酸法
硫酸—氧化剂法（过氧化氢法、高锰
酸钾） 破坏后，金属呈高价态
注意点： 所用仪器一般为硅玻璃或硼玻璃制成的 凯氏瓶 所用试剂应为优级纯 水应为去离子水或高纯水 按相同条件进行空白试验校正 操作在通风橱内进行
⒉干法消化
将有机物灼烧灰化达到分解目的 方法：将适量样品置于瓷坩锅、镍坩锅或 铂坩埚中，常加无水Na2CO3或轻质MgO以 助灰化。混匀后，先小火加热，使样品 完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使 其灰化完全即可。
中药制剂分析含量测定
中药制剂分析含量测定一、引言中药制剂是指在中药原料的基础上，经过加工、制备、配制等工艺制成的药品。
中药制剂的药效成分来源繁多，含量不易确定，因此中药制剂的分析含量测定日趋被重视。
中药制剂的分析含量测定是指通过一定的理化方法和技术手段，对中药制剂中的有效成分进行测定和分析，以确定中药制剂的质量和含量，为中药质量控制提供科学依据。
总的来说，中药制剂分析含量测定具有重要意义，可以确保中药制剂的药效成分含量符合规定标准，提高中药质量稳定性，增强中药制剂在医药市场上的竞争力。
二、中药制剂分析含量测定常用方法目前，中药制剂分析含量测定常用的方法主要包括下面几种。
1. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的分析中药制剂有效成分的方法。
该方法可以测定中药中多种成分，并具有操作简便、分离效果好、检测灵敏度高等优点。
2. 气相色谱法气相色谱法在中药制剂分析含量测定中也有一定应用。
该方法主要适用于挥发性成分的测定。
气相色谱法的优点是分离效果好、灵敏度高，并且可用来测定多种成分。
3. 紫外分光光度法紫外分光光度法是通过测定中药制剂所含有的色素的光吸收率来检测有效成分。
该方法操作简便，且灵敏度高，但与高效液相色谱法相比，分离效果较差。
4. 火焰原子吸收法火焰原子吸收法常用来测定中药制剂中的矿物质等微量元素含量。
该方法操作简便、灵敏度高，但只适用于微量元素的含量测定。
5. 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法可以测定中药制剂中多种成分。
该方法分离效果好，检测灵敏度高，并且可以测定混合物中的不同成分。
三、中药制剂分析含量测定实验步骤以下是中药制剂分析含量测定实验步骤。
1.样品制备：根据需要测定的成分含量，选择适当的样品量，将样品粉碎、过筛或干燥等处理，制成统一细度、分散均匀的样品粉末。
2.提取成分：根据需要提取的成分种类和特性，选择合适的提取剂，进行成分提取。
提取时应注意提取剂的选择、提取温度和时间等因素。
3.检测方法选择：根据实验需要和样品特征，选择合适的检测方法。
第四章中药制剂的含量测定
第二节 含量测定样品的处理
⒈硅胶、氧化铝等：
它们是传统的吸附剂，多以0.07～0.15mm(200～100目)的 颗粒1～5g用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在吸附剂 表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加到柱上 时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶 剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。
最常用的SF是CO2，它的性质稳定，使用安全， 价格低廉，临界点低（Tc=31℃和Pc=7.4MPa），易于 操作。
第二节 含量测定样品的处理
SFE具有优点：
速度快 萃取效率高、 方法准确度高、 选择性较高、 节省溶剂、 易于自动化， 可避免使用易燃，有毒的有机溶剂， 能与色谱和光谱等分析仪器直接联用的特点。
对于由浸膏制成的固体制剂，用上述方法提取时，通常是 精密称取适量药粉于量瓶中，定量加适当溶剂提取后，以干燥 滤纸过滤，弃去滤液，取续滤液（防止滤纸吸附或污染被测组 分），按部分测定法测定。
第二节 含量测定样品的处理
（五）超临界流体提取法（Supercritical-fluid extraction, SFE）
4) 同一种SF在不同温度和压力下可以提取极性或分 子大小都不相同的化学成分。SF的密度、粘度和扩散 系数等都与温度、压力和流体组成有关。温度和压力 稍高于临界点时，SF的压缩系数最大，压力的微小变 化将导致较大的密度变化，而控制密度就可控制SF对 溶质的溶解能力，目前也常用升压力（即升密度）提 取法进行分步提取。
第二节 含量测定样品的处理
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样品的提取
超临界流体提取法 超临界流体——特殊的物质状态
（Supercritical-fluid extraction，SFE）
密度-d液体 → 溶解能力强 粘度-气体 → 传质快，有利于待测组分 的扩散
表面张力几乎为 0 → 浸润性能好
样品的提取
中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于酸性成分 的分离
样品的分离纯化
色谱法（层析法）
键合相硅胶（C18或ODS）：分开脂溶性和水 溶性成分
操作程序： 洗脱顺序：极性大→小
①柱的活化；②上样；③清洗；④洗脱。
样品的分离纯化
色谱法（层析法）
大孔树脂
分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性 （苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型 非极性型（XAD-2等）：分开脂溶性和水 溶性成分
A A C 或C 1% l E1cml
1% E1 cm
1% 例:小檗碱溶液在345nm处的 E1 cm 为728，现测的 某小檗碱溶液在345nm出的吸收度为0.5824， 计算该小檗碱溶液的浓度。
紫外－可见分光光度法
工作曲线法
从标准品吸光度-浓度曲线求得样品溶液 的浓度。
A KC 或 A KC
准确度 准确度的要求 线性范围内进行操作 回收率要求 中药制剂 95%-105% 回收率的RSD ≤3% 对于制剂过程复杂回收率不得小于90% 生物样品分析85%-115 回收率的RSD ≤5%
精密度 表示在相同条件下,同一试样的重复测 定值间的符合程 度。 精密度高低常用S或RSD表示。 标准偏差
样品的提取
回流提取法
万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定
+HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h
连续回流提取法
保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定
+甲醇，加热回流至提取液无色为止
样品的提取
超声提取法
原理：超声波的助溶作用
优点：操作简便，提取速度快
※ 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等 进行考察
（Analysis of Chinese Preparation）
中药学衔接班
学习目的：
1
第四章 中药制剂的 含量测定
了解中药制剂分析的样品测定 处理方法 熟悉含量测定的方法学考察
2
3
掌握中药制剂常用定量分析方 法的运用
反映其制剂中有效 成分或者毒性成分 的含量 衡量其制剂工艺的 稳定性和中药材的 质量优劣
紫外－可见分光光度法
对照品对照法
对照品溶液浓度应与供试品浓度接近
（100±10％）
在一定线性范围内根据Lambert-Beer 定律溶液的浓度和吸光度存在以下关系
A标 C标 A样 C样
对照品对照法
% 例1：某种药制剂中有效成分的 E11cm 365nm=766，在相 % 同条件下分析某厂生产的该制剂的 E11cm 365 nm=759 ，试计算其含量。
银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化 物 四苯硼钠法：+生物碱→白色沉淀
亚铁氰化钾法
化学分析法
滴定分析
配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：
测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、 Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量
氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中 Fe、As等
紫外－可见分光光度法
样品液的制备：精密量取急支糖浆2.5mL置分液漏 斗中，精密加入缓冲液25ml，再精密加入氯仿 25mL和溴麝香草酚蓝染料2.5mL，摇匀，分层。 取氯仿层，即得。 在410nm处测定六次取平均值，得A样=0.428，A标 =0.385，试计算本品中麻黄碱的含量。
紫外－可见分光光度法
计算分光光度法
紫外－可见分光光度法 应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红 素的含量 1.胆红素具有高度共轭体系结构，在波长 453nm处为最大吸收，在可见光照射下胆红素易氧 化成蓝色产物，在453nm处吸收度显著降低。
2.选用日光下照射30分钟或在红外灯下照射4 小时测Δ A值。
紫外－可见分光光度法 应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红 素的含量 3.精密称取胆红素2mg于50ml棕色量瓶中，加入适量 冷(10℃以下)的酸性氯仿(150ml氯仿中含0.05ml 浓盐酸)，于冰水浴中超声振荡20分钟，稀释至刻 度，制成储备液。准确吸取0，4、0．8、1，2、 1.6、2.0ml储备液于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿 至刻度，测其光照前后在453nm处的吸收度。回归 方程为Δ A=0.0804C + 0.00570 (r=0.9995)。 注释：除光照反应外，其余操作均需避光
超临界流体提取法
密度受压力、温度的影响大→ 改变对溶质 的溶解能力
加入甲醇、氯仿、苯等改变极性→ 提取不 同极性的成分
优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、 选择性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可 避免使用易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和 光谱等分析仪器直接联用。
样品的分离纯化
沉淀法
蛇胆糖浆口服液含有大量糖，可用无水乙醇回流样品，冷后过 滤，除糖以消除其干扰。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
复方益母草口服液中水苏碱的含量测定
利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部
分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。
样品的分离纯化
蒸馏法
适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、 小分子的生物碱、丹皮酚等 最常用水蒸气蒸馏法
样品的分离纯化
液-液萃取法
离子对萃取法
BH+（水相）+ In-(水相) BH+·In-（水相） BH+·In-（有机相） 适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃 取 ※ 水相酸度的控制 ※ 离子对试剂的选择
样品的分离纯化
色谱法（层析法）
分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交 换色谱、凝胶色谱
样品处理的主要作用 释放被测组分，制成稳定试样 除去杂质，纯化 浓缩 试样形式符合测定的要求 样品处理的主要步骤
1. 样品的粉碎 2. 样品的提取 3. 样品的分离纯化
样品的粉碎
目的——1. 取样均匀 2. 提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机
※ 粒度大小合适 样品粉末的分级（过筛） ※ 防止污染或损失 仪器设备洁净 粉尘和较大颗粒的损失。
测定方法与条件的选择
定量分析方法验证
定量分析方法验证
准确度、精密度 线性与范围 专属性、检测限、定量限 耐用性
准确度 准确度的高低用误差大小表示。 是指以测得结果与真实值之间的接近程度。 常用回收率试验来表示。（加样回收率）
C-A 回收率 100 % B
A为供试品所含被测成分量 B 加入对照品量 C为实际测得值
双波长分光光度法（等吸收点法、系数倍率 发）
三波长法 导数光谱法 一般应用于供试品溶液中含有2中或2种 以上的组分的含量测定。
差示光谱法 利用比样品浓度稍低的标准品 作为空白,进行测定及计算的方法.
紫外－可见分光光度法
计算分光光度法
应用实例：银黄口服液由金银花和黄芩的提取 物组成，其主要成分绿原酸和黄芩苷在紫外区 均有吸收，且吸收峰相互重叠干扰，经测定绿 原酸在278nm和322nm处有等吸收点，且黄芩苷 在278nm处有最大吸收。现测的某银黄口服液 1% A278nm=0.621，A322nm=0.315，黄芩苷 E1cm 278nm 1% E =631.20， 1cm 322nm=368.40。试计算该银黄口 服液的黄芩苷的含量。
例2：水苏碱在510nm处有最大吸收，现用标准品制 的0.002%的水苏碱标准溶液,A510nm=0.502，某水 苏碱供试品溶液在相同条件下测的A510nm= 0.626 ，试计算该供试品溶液中水苏碱的含量。
对照品对照法
例:急支糖浆中麻黄碱的含量测定
标准液的配制：精密量取麻黄碱对照液（ 0.1mg/ml）2.5mL置分液漏斗中，精密加入缓冲 液25ml，再精密加入氯仿25mL和溴麝香草酚蓝 染料2.5mL，摇匀，分层。取氯仿层，即得。
样品的分离纯化
消化法——测定中药制剂中的无机元素
湿法消化
硫酸—硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机 样品的破坏，破坏后得到三价砷或锑。 供试品
灼烧灰化
(+NaCO3/MgO)
干法消化 灰分
※ 控制温度在420℃以下
※不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等， ）有机样品的破坏。
提取条件的考察 方法 学考 察
紫外－可见分光光度法
吸收系数法
A=ECL
对照品比照法
对照品溶液浓度应与供试品浓度接近
（100±10％）
计算分光光度法
等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数 光谱法
紫外－可见分光光度法
吸收系数法
根据Beer定律A=ε cl，若l和吸光系数ε 或
已知，即可根据测得的A求出被测物的浓度。
重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法
酸碱滴定法 沉淀滴定法 配位滴定法 氧化还原滴定法
滴定分析法