抗原抗体及其结合反应PPT课件

抗原抗体反应比例性示意图
四、阶 段 性
第一阶段：特异性结合阶段 第二阶段：反应可见阶段
➢第五节 影响抗原抗体结合反应的因 素
➢抗原抗体本身因素 ➢反应基质因素 ➢ 实验环境因素
一、抗原抗体本身因素
➢抗原:理化性状、表位种类和数目 ➢抗体:来源、特异性、亲和性、效价
来源
R型Ab：等价带宽， 易出现可见反应。 H型Ab：等价带窄，易出现前带或后带 McAb: 不宜用于凝集和沉淀反应。
抗原抗体及其结合反应
教学目的
掌握：抗原抗体结合力、抗原抗体结合反 应特点
熟悉：影响抗原抗体结合反应的因素
第一节 抗原
一、抗原的特性
免疫原性、免疫反应性 特异性
二、用于免疫测定的抗原分类
天然、合成多肽、基因重组
第二节 抗体
一、抗体的特性
特异性、多样性、免疫原性
二、用于免疫测定的抗体分类
第四节 抗原抗体结合反应的特点
特异性 可逆性 比例性 阶段性
亲水胶体转化为疏水胶体示意图
亲水胶体 疏水胶体 可见反应
➢一、特异性
➢抗原抗体反应特异性示意图
➢特异性示意图
➢交叉反应（cross reactions）
➢抗原抗体交叉反应示意图
➢二、可逆性
可逆性：抗原与相应抗体结合成复 合物后，在一定条件下又可解离为游 离抗原与抗体的特性 影响因素：
供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力 供氢体：羧基、氨基和羟基 受氢体：羧基氧、羧基碳和肽键
氢键具有高度的方向性
4.疏水作用力（疏水键）
两个疏水基团在水 溶液中相接触时， 由于对水分子排斥 而趋向聚集力。
➢二、抗原抗体的亲和力和亲合力
抗原抗体亲和力示意图
Avidity
• The overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent Abs
标记免疫技术 用荧光物质、放射性核素、酶或化学 发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原 抗体反应后，通过检测标记物对抗原或 抗体进行定性、定位或定量分析
➢思 考 题
➢1．抗原抗体结合反应的原理？ ➢2．抗原抗体的结合力有哪些？ ➢3．抗原抗体结合反应的特点？
多克隆、单克隆、基因工程
三、抗体产生的规律
初次应答、再次应答
第三节 抗原抗体结合反应的原理
➢抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所 发生的特异性结合反应。
抗原表位与抗体高变区间的结构互补
物 质
抗原表位与抗体高变区的紧密接触
基 抗原抗体之间的结合力
础 亲水胶体转化为疏水胶体
➢一、抗原抗体结合力
➢静电引力 ➢范德华引力 ➢氢键 ➢疏水作用力
Keq =
104
Affinity
106 Avidity
1010 Avidity
抗原抗体亲合力示意图
三、液相中抗原抗体的结合反应
抗原 ﹢ 抗体
(亲水胶体)
抗原抗体复合物 (疏水胶体)
电解质
可见反应
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四、固相表面抗原抗体的结合反应 1. 抗原抗体结合反应时间 2. 反应体积 3. 解离速度 4. 固相化抗原或抗体的构象
➢抗原抗体结合力示意图
１.静电引力（electrostatic forces）
抗原和抗体分子带 有相反电荷的氨基和 羧基基团之间相互吸 引的力。
又称为库伦引力
2.范德华引力（Vonder Waals forces）
抗原和抗体相互接近时，由于分子的极 化作用而出现的引力。
范德华引力<静电引力
➢3.氢键结合力
同上 同上 观察沉淀，检测浊度 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 观察测定溶血现象
同上
反应类型
中和反应
标记免疫反应
实验技术
病毒中和试验 毒素中和试验 荧光免疫技术 放射免疫技术
酶免疫技术 发光免疫技术
金免疫技术
结果判断
检测病毒感染性 检测外毒素毒性 检测荧光现象 检测放射性强度 检测酶底物显色 检测发光强度 检测金颗粒沉淀
➢作用：中和胶体表面电荷，破坏水化 层，使Ag-Ab聚集。 ➢常用：0.85%NaCl溶液，缓冲液、 Ca2+、Mg2+等。
（二）酸碱度
抗原抗体反应中一般以pH6-8为宜， 有补体参与的反应最适pH为7.2-7.4 酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌 Ag的等电点，可出现非特异性凝集。
（三）温度
最适温度为37℃或室温18-25℃ 为宜。若温度高于56℃，可导致已 结合了的抗原抗体复合物解离，甚至 分子变性。
抗原抗体反应类型
反应类型 凝集反应
沉淀反应
补体参与的 反应
实验技术 直接凝集试验 间接凝集试验 抗球蛋白试验 液相沉淀试验 免疫电泳技术 补体溶血试验
补体结合试验
结果判断 观察凝集现象
➢ 抗体对相应抗原的亲合力
➢ 环境因素对复合物的影响
【Ag】+【Ab】
【Ag-Ab】
解离后抗原抗体仍保持原 有特性。
一定条件：低pH、高浓度 盐等。
Ab1
➢三、比例性
➢比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循 一定的量比关系 ➢最适比： 沉淀物最多时的抗原抗体的浓 度比或量比 ➢等价带: 抗原与抗体分子比例合适范围 ➢前 带： 抗体过量 ➢后 带： 抗原过量
浓度：是相对Ag而言，比例要合适，故实验前 需滴定，以求最适Ag与Ab比例。
特异性与亲和力：关键因素，选择特异性与亲 和力高的Ab。
二、反应基质因素 非特异性因素，如蛋白、盐、 药物等
三、实验环境因素
电解质: 0.85%生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH 6~8 温 度: 37℃最适
(一）电解质