细胞膜蛋白的提取方法
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细胞膜蛋白的提取方法
生物侠们,还在实验室奋战吗?还在为科研经费不够发愁吗?今天我就给各位通宵达旦的大侠们带来一个福音。下面就让我替他给你讲讲,抓紧时间啊!
首先你需要一株需要提前膜蛋白的细胞、NP40、氯化钠、Tris-Hcl、SDS、脱氧胆酸钠和PMSF,东西齐全了,就开始配裂解液吧。下面是配方哦!
RIPA Buffer For100ml:
150mM NaCl5ml3M NaCl
50mM TrisHCl pH8.05ml1M TrisHCl pH8.0
1mM EDTA pH8.00.2ml0.5M EDTA pH8.0
1%NP-405ml20%NP-40
0.1%SDS1ml10%SDS
0.1%Deoxycholate100mg Deoxycholate
那东西都齐全了,那么来开始讲步骤吧!
1.收集细胞,将1000转离心收集的(最好低温哦)细胞悬于裂解液中20分钟;
2.就12000离心吧,收集沉淀哦;
3.在加入裂解液;
4.然后超声10-15次,每次2秒,间隔15秒;
5.再12000低温离心,收集上清,开始做实验咯!