间接免疫荧光法精品PPT课件
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Baidu Nhomakorabea
First antibody secondary antibodyfluorochrome
原理
PBMC
Target cells
材料
• PBMC • 兔抗人白细胞血清 (Ab1) • FITC-抗兔单克隆抗体 (Ab2)
方法
• 吸管取1滴PBMC液体（约10ul）滴加到标本片黑色圈圈背 面中央, 静止5-10分钟，待PBMC干燥。
You Know, The More Powerful You Will Be
结束语
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
[材料]
1、淋巴细胞分层液（葡蔗糖-泛影葡胺， 比重为 1.077±0.001g/L） 2、 2％台盼蓝染液 3、 Hank’s液或者RPMI-1640培养基 4、试管、吸管、水平离心机等
[方法] 1、无菌采集静脉血2ml注入盛有2ml Hank’s液（含
100u/ml肝素）的试管中，混匀。
2、吸取淋巴细胞分层液2ml加入离心管中，再将稀 释抗凝血液小心沿管壁加至分层液上，应注意保 持两者界面清晰。（关键）
间接免疫荧光
武汉大学基础医学院 免疫学教研室 潘勤
外周血单个核细胞分离
----- 葡蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法
[原理] 外周血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞、
单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同。 红细胞和多核细胞比重较大，为1.092左右，而淋 巴细胞和单核细胞比重为1.075左右。利用比重为 1.077左右的分层液作密度梯度离心，使一定比重 的细胞按密度梯度分布，从而将各种血细胞加以 分离。
• 15 ml Ab1 加入玻片上湿盒内孵育 30min。 • 甩干玻片, 用洗脱液洗5次，甩干玻片 • 玻片上加15 ml 荧光二抗 (Ab2) 湿盒内孵育 30min。(避
光操作) • 甩干玻片, 用洗脱液洗5次，甩干玻片 • 用荧光显微镜观察结果
RESULTS
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
3、室温2000r／min离心20min。管内可分为四层。
4、用毛细吸管轻轻吸出乳白色的单个核 细胞，加入另一支已含有2~5 mlHank’s液的离心管中，混匀。
5、室温下，1500 rpm离心10 min。
6、弃上清，将PBMC用1ml PBS稀释，混 匀
间接免疫荧光 检测人外周血单个核细胞
First antibody secondary antibodyfluorochrome
原理
PBMC
Target cells
材料
• PBMC • 兔抗人白细胞血清 (Ab1) • FITC-抗兔单克隆抗体 (Ab2)
方法
• 吸管取1滴PBMC液体（约10ul）滴加到标本片黑色圈圈背 面中央, 静止5-10分钟，待PBMC干燥。
You Know, The More Powerful You Will Be
结束语
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
[材料]
1、淋巴细胞分层液（葡蔗糖-泛影葡胺， 比重为 1.077±0.001g/L） 2、 2％台盼蓝染液 3、 Hank’s液或者RPMI-1640培养基 4、试管、吸管、水平离心机等
[方法] 1、无菌采集静脉血2ml注入盛有2ml Hank’s液（含
100u/ml肝素）的试管中，混匀。
2、吸取淋巴细胞分层液2ml加入离心管中，再将稀 释抗凝血液小心沿管壁加至分层液上，应注意保 持两者界面清晰。（关键）
间接免疫荧光
武汉大学基础医学院 免疫学教研室 潘勤
外周血单个核细胞分离
----- 葡蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法
[原理] 外周血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞、
单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同。 红细胞和多核细胞比重较大，为1.092左右，而淋 巴细胞和单核细胞比重为1.075左右。利用比重为 1.077左右的分层液作密度梯度离心，使一定比重 的细胞按密度梯度分布，从而将各种血细胞加以 分离。
• 15 ml Ab1 加入玻片上湿盒内孵育 30min。 • 甩干玻片, 用洗脱液洗5次，甩干玻片 • 玻片上加15 ml 荧光二抗 (Ab2) 湿盒内孵育 30min。(避
光操作) • 甩干玻片, 用洗脱液洗5次，甩干玻片 • 用荧光显微镜观察结果
RESULTS
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
3、室温2000r／min离心20min。管内可分为四层。
4、用毛细吸管轻轻吸出乳白色的单个核 细胞，加入另一支已含有2~5 mlHank’s液的离心管中，混匀。
5、室温下，1500 rpm离心10 min。
6、弃上清，将PBMC用1ml PBS稀释，混 匀
间接免疫荧光 检测人外周血单个核细胞