葡萄糖测定方法

葡萄糖测定方法

原理

3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原性糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，该物质在520 nm处有最大吸收峰，且在一定范围内吸收峰的强度（OD值）与还原糖浓度成线性关系，利用比色法可测得样品的含糖量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰少。

试剂

1）3, 5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）甲液：溶解 6.9 g苯酚于mL 10%

NaOH中，并稀释至69 mL，

在此溶液中加入 6.9 g

NaHSO3；

乙液：称取255 g酒石酸钾钠，加到

300 mL 10% NaOH中，再加入

880 mL 1%的3,5-二硝基水杨

酸。

甲、乙液混合得黄色试剂，贮存于棕色瓶中，室温放置7-10天后备用。

2）%葡萄糖标准液（1 g/L）

准确称取100 mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），加少量的蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱中保存备用。

操作步骤

2 mL样品（稀释）+ mL DNS →沸水浴 5 min →流水立即冷却至室温→定容至25 mL → 520 nm处检测OD值

浓度范围

0 ~ 0.5 g/L

标准曲线

葡萄糖母液1 g/L：称取g葡萄糖，溶于1000 mL去离子水。

反应体系：

DNS

（mL）

葡萄糖01

母液

（mL）

水（mL）21

注意事项

1）考虑葡萄糖的结晶水；

2）可以根据稀释倍数计算加入反应体系的样品量，不足的补水。

3）OD520在~之间时，葡萄糖的浓度基本上与吸光值呈线性关系，超过该范围，则应当适当稀释。

参考文献

[1] Miller G L. Use of dinitrosalicylic acid

reagent for determination of reducing sugars [J]. Anal. Chem., 1959, 31: 426-428