癌细胞免疫原性的探讨

小鼠B7-1基因转染的黑色素瘤细胞免疫原性探讨

小鼠B7-1基因转染的黑色素瘤细胞免疫原性探讨

免疫学杂志2000年第3期第16卷基础免疫学

作者：刘然义屈伸过建莉

单位：刘然义（中山医科大学肿瘤防治中心，广东广州510060）；屈伸（同济医科大学生化教研室，湖北武汉430030）；过建莉（同济医科大学生化教研室，湖北武汉430030）

关键词：B7-1；黑色素瘤；免疫原性；肿瘤疫苗

［摘要］目的探讨B7-1分子对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法将小鼠B7-1基因转染的黑色素瘤细胞（B16-mB7.1）与野生型及空载体转染细胞（B16-wt和B16-neo）的免疫原性在体内外进行了比较。同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养（MTLCs）后测定淋巴细胞增殖指数和CTLs活性；将B16-neo和B16-mB7.1细胞接种于小鼠皮下，观察肿瘤生长速度。结果B16-mB7.1在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显强于对照细胞（P＜0.05）；尽管B16-mB7.1与B16-neo细胞在体外增殖能力一致，但B16-B7.1细胞体内生长速度明显减慢（P＜0.05）。结论B16-B7.1分子在B16细胞中表达能增强其免疫原性。

［中图分类号］R739.5；R392.11［文献标识码］A

［文章编号］1000-8861（2000）03-0186-03

Study on the immunogenicity of murine B7-1 cDNA transfected B16 melanoma cells

LIU Ran-yi

（Cancer Center，Sun Yet-sen University of Medical Sciences，Guangzhou 510 060，China）

QU Shen，GUO Jian-li

（Department of Biochemistry，Tongji Medical University，Wuhan 430030，Chin a）

［Abstract］Objective To investigate the effect of B7-1 molecule on increasing t he immunogenicity of tumor cells.Methods Immunogenicity of murine B7-1 cDNA-tr ansfected B16 melanoma cells（B16-mB7.1）was compared with that of parental an d mock-transfected B16 cells（B16-wt，B16-neo）.The lymphocytes were examined f or both proliferation indices（PI）and specific lysis activity against B16-wt cells afte r syngeneic Mixed Lymphocyte Tumor Cultures（MLTCs）had been conducted for 6d.Injected subcutaneously into syngeneic mice，the growth rates of B16-neo and B 16-mB7.1 cells were tested.Results B16-mB7.1 cells could induce more effective pr oliferation of effector lymphocytes and stronger specific lytic activity against B16-wt cells than control cells（P＜0.05）.In vivo，B16-mB7.1 cells grew slower than B16-n eo cells（P＜0.05），though they showed the same growth rate in vitro.Conclusion B7-1 expression can help poor immunogenic tumor cells to increase their immunog enicity.

［Key words］B7-1；melanoma；immunogenicity；tumor vaccine

大多数肿瘤细胞表达MHC-Ⅰ类分子和肿瘤抗原，是潜在的抗原提呈细胞［1］。但其免疫原性较弱，不能有效地激活淋巴细胞，故能逃避机体免疫监视发展成为肿瘤［2］。经研究发现，B7-1分子的缺乏是重要原因之一［3］。为此，我们对mB7-1基因转染的小鼠黑色素瘤细胞B16-mB7.1的免疫原性和致瘤性进行了实验研究。

1材料与方法

1.1实验动物和细胞C57BL／6小鼠，6～8周龄，雌性，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司。小鼠黑色素瘤细胞系B16（F0）（B16-wt，源于C57BL／6小鼠）购自武汉大学；B16-mB7.1和B16-neo系本室建立的分别转染小鼠B7-1基因和空载体的B16细胞系［4］，用含10％小牛血清的DMEM（Gibco）培养；淋巴细胞来源于未免疫的同源小鼠脾脏，用含10％FCS的1640（Gibco）培养。培养条件为37°C、5％CO2。

1.2淋巴细胞增殖指数（Proliferation Indices，PI）的测定将3种肿瘤细胞灭活（5×106／ml肿瘤细胞用80mg丝裂霉素C37°C处理1h）后，与淋巴细胞混合培养（每

孔0.2ml培养液，含105淋巴细胞和104肿瘤细胞，对照组只含淋巴细胞或者肿瘤细胞）。

培养条件同淋巴细胞。6d后用MTT法测定淋巴细胞增殖指数（PI）。PI值＝（实验孔A57

—肿瘤细胞孔A570nm）／淋巴细胞孔A570nm。

0nm

1.3CTLs的诱导及其杀伤活性的检测淋巴细胞与灭活的肿瘤细胞混合培养6d（每孔2ml，含6×106淋巴细胞和2×105肿瘤细胞）。收集淋巴细胞作为效应细胞，以B16-wt 为靶细胞，用LDH释放改良法［5］测定其特异杀伤活性，效靶比为25∶1。杀伤活性按下列公式计算：杀伤活性＝（实验孔A570nm—自然释放孔A570nm）／（最大释放孔A570nm—自然释放孔A570nm）×100％。

1.4肿瘤细胞体内外生长增殖能力的观察肿瘤细胞体外增殖能力以A570nm来衡量（MTT法）。体内实验分两组进行，分别在C57BL／6小鼠皮下接种B16-neo或B16-mB 7.1细胞（5×104／0.1ml），观察肿瘤生长情况。肿瘤生长速度以成瘤潜伏期、荷瘤小鼠存活期和肿瘤结节大小来衡量。潜伏期和存活期分别为肿瘤结节直径达到2mm和荷瘤小鼠死亡所需的天数，而肿瘤结节大小用两垂直方向直径的平均值来表示。

1.5统计学处理本实验中数据均采用未配对资料的t检验进行统计分析。

2结果

2.1淋巴细胞增殖效应和CTLs杀伤活性B16-mB7.1组淋巴细胞增殖指数（PI值）和CTL杀伤活性均显著高于B16-wt和B16-neo组（见图1，图2）。这说明表达B7-1分子有利于诱导T细胞活化。

*P＜0.05，compared with B16-wt and B16-neo cells（n＝3）