血流感染实验室诊断新技术
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素, 减少污染结果。但是 此方法受采血 前患者皮肤 消毒等检 验前 处理质 量控制 、 临床应 用过抗 生素、 采血量 及细 菌数量 等诸 多因素的影 响, 易出现假 阴性 或假 阳性的 结果 , 使 实验 室误报 而导致 临床误诊 , 耽误 患者的治疗。另外生长缓慢或 不能在培 养基上 生长的细 菌及 一些苛 养茵则 不可采 用此 方
法检 测 , 其 应 用有 一 定 的 限 制 。
也不 同。在细菌的快速鉴 定 中利用 R F L P技 术, 对 不 同细 菌 P C R扩增后 的产物进行切割 , 可产 生不 同数 目的条 带,由此
鉴 别 不 同菌 种 。 该 方 法检 测 时 间 不超 过 2 4 h , 且 单 份 标 本 可
・
7 9 0・
广东医学 2 0 1 3 年 3月 第 3 4卷第 5 期 G u a n g d o n g Me d i c a l J o u r n a l M a r . 2 0 1 3 , V o 1 . 3 4 , N o . 5
血 流 感 染 实 验 室诊 断 新 技 术
果 建 立成 图谱 以 筛选 各 种 病 原 茵 , 是 现 时 临床 实验 室 常 用 的
一
同的抗 生素进 行 治疗 , 是 败血 症 能否治愈 的关键 。如何 实 现 血流感染致病 菌的快速 有效检测及 其 药敏 结 果的准确 回 报, 是 长期 困扰 临床 的问题 。随着分子生物 学技 术 的广泛应 用, 对各种致病 菌的检测也从常规的单纯分 离培养鉴 定及 药
鉴定仪 已被广泛应用 于I 临床微 生物室 , 该方 法建 立于传统的
手 工培养及 细菌鉴定 方法 的基 础上。采 集 患者 血液 置于血 培养瓶后立 即装载至全 自动血培养仪 , 实时观察 细菌生长曲
线, 于培养 7 2 h时发 出阴性预报告 , 直 至第 5天发 出阴性最 终报告 。若有细 菌生长 , 即行 革兰染色, 发 出阳性预报 告, 同 时转种相应平板培养 、 鉴 定到种或属 , 同时进 行药敏试验 , 耗 时 3~ 4 d 。本方法较 传统培 养方 法提 高 了阳性 标本 的检 测 率及缩短 了其报告 时 间。全 自动 血培养及 鉴 定 系统是 由电 脑全程监控 , 将 培养、 检测过程一体化 , 方便 快捷 , 同时, 因血
敏 方法过 渡 到 与 聚合 酶 链 反 应 ( p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ,
p c a) 技 术及 其 扩 展 试 验 、 基 因芯 片、 飞 行 时 间质 谱 ( t i m e一
种 方 法 。该 方 法 从 标 本 采 集 到 完 成 P C R 扩 增 仅 过 1 0 h , 速 度 较 目前 临
床常规 培养方法快 。而且 P C R方法 不受患者在检测前 已使
用抗生素治疗的影响, 所 需 菌 量 亦少 ( 可 少至 p g 级) , 可 大 大
0 f — l f i g h t ma s s s p e c t r o me t r y , T O F MS ) 技 术 等 现 代 手 段 相 结 合, 大 大提 高 了检 出率 , 并 且 缩 短 了 细 菌鉴 定 结 果 的 报 告 时 间 。 本 文 就 以上 几 种 方 法 的优 缺 点进 行 浅析 。
不足 , 而且具有特异 性强 、 有 效解 决 P C R污 染 问题 、 自动化
程度 高等特点。较 常规 P C R技术 , 无论从敏 感性 、 特 异性与 速度上都更具有优 势 。
2 . 3 限制酶 片段长度 多态性分析( r e s t r i c t i o n f r a g m e n t l e n g t h
黄 晓燕 ,陈丽 丹 ,王露 霞
广 州 军 区广 州 总 医院 检 验 科 ( 广州 5 1 0 0 1 0 ) 血 流 感 染 引起 的败 血症 临床 常 见 , 且发病危 急, 后 果 严 重 。 可 导 致 血 流 感 染 的 细 茵种 类很 多 , 针 对 不 同细 菌采 用 不
守区组成 , 保守 区为所有 细菌所共 有, 可 变 区具 有属或 种的 特异性 。以保 守区序列设计 出针对所有细菌的通 用引物 , 可 变区经 P C R反应产生的特异条 带数 不同 - 3 ] 。根 据 以上原 理, 利用细菌的 D N A为模板进行 P C R, 并将其特异 的电泳结
加 入 荧光 基 团 , 利 用 荧光 信 号 进 行 实 时监 控 定 量 , 不仅 实现 了P C R从 定 性 到 定 量 的 飞 跃 , 克 服 了 常规 P C R 定 性 检 测 的
1 常 规 方 法
1 . 1 常规 培养 方法 目前 , 全 自动 血培 养仪及 细菌全 自动
提高标本的阳性检 出率。但 P C R一般是 对单种细 菌进 行有 目的的扩增 , 在病原 菌未 明的情况下 , 难 以做到逐一检 测 , 不 能满足于临床 各种感染性 疾病 的快速诊断 。因此 , 该技 术在 临床检测病原茵 中的应用受到一 定限制 。 2 . 2 荧光定量 P C R技术 荧光定量 P C R技 术是 P C R和核 酸杂交以及 荧光电信 号放 大结合 同步 的技术 , 在反 应体 系中
p o l y m o r p h i s m, R F L P ) 限制 性 内切 酶是 一类 能够 识别 特异 性D N A序列并对其进 行切 割的酶, 一条 完整的 D N A分子经
限制 性 内切 酶 切 割后 分 解 成 不 同 大 小 的 片段 , 其 电 泳 迁 移 率
培 养瓶本 身为密 闭容 器, 排 除 了检 测 过程 中的人 为干扰 因
法检 测 , 其 应 用有 一 定 的 限 制 。
也不 同。在细菌的快速鉴 定 中利用 R F L P技 术, 对 不 同细 菌 P C R扩增后 的产物进行切割 , 可产 生不 同数 目的条 带,由此
鉴 别 不 同菌 种 。 该 方 法检 测 时 间 不超 过 2 4 h , 且 单 份 标 本 可
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广东医学 2 0 1 3 年 3月 第 3 4卷第 5 期 G u a n g d o n g Me d i c a l J o u r n a l M a r . 2 0 1 3 , V o 1 . 3 4 , N o . 5
血 流 感 染 实 验 室诊 断 新 技 术
果 建 立成 图谱 以 筛选 各 种 病 原 茵 , 是 现 时 临床 实验 室 常 用 的
一
同的抗 生素进 行 治疗 , 是 败血 症 能否治愈 的关键 。如何 实 现 血流感染致病 菌的快速 有效检测及 其 药敏 结 果的准确 回 报, 是 长期 困扰 临床 的问题 。随着分子生物 学技 术 的广泛应 用, 对各种致病 菌的检测也从常规的单纯分 离培养鉴 定及 药
鉴定仪 已被广泛应用 于I 临床微 生物室 , 该方 法建 立于传统的
手 工培养及 细菌鉴定 方法 的基 础上。采 集 患者 血液 置于血 培养瓶后立 即装载至全 自动血培养仪 , 实时观察 细菌生长曲
线, 于培养 7 2 h时发 出阴性预报告 , 直 至第 5天发 出阴性最 终报告 。若有细 菌生长 , 即行 革兰染色, 发 出阳性预报 告, 同 时转种相应平板培养 、 鉴 定到种或属 , 同时进 行药敏试验 , 耗 时 3~ 4 d 。本方法较 传统培 养方 法提 高 了阳性 标本 的检 测 率及缩短 了其报告 时 间。全 自动 血培养及 鉴 定 系统是 由电 脑全程监控 , 将 培养、 检测过程一体化 , 方便 快捷 , 同时, 因血
敏 方法过 渡 到 与 聚合 酶 链 反 应 ( p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ,
p c a) 技 术及 其 扩 展 试 验 、 基 因芯 片、 飞 行 时 间质 谱 ( t i m e一
种 方 法 。该 方 法 从 标 本 采 集 到 完 成 P C R 扩 增 仅 过 1 0 h , 速 度 较 目前 临
床常规 培养方法快 。而且 P C R方法 不受患者在检测前 已使
用抗生素治疗的影响, 所 需 菌 量 亦少 ( 可 少至 p g 级) , 可 大 大
0 f — l f i g h t ma s s s p e c t r o me t r y , T O F MS ) 技 术 等 现 代 手 段 相 结 合, 大 大提 高 了检 出率 , 并 且 缩 短 了 细 菌鉴 定 结 果 的 报 告 时 间 。 本 文 就 以上 几 种 方 法 的优 缺 点进 行 浅析 。
不足 , 而且具有特异 性强 、 有 效解 决 P C R污 染 问题 、 自动化
程度 高等特点。较 常规 P C R技术 , 无论从敏 感性 、 特 异性与 速度上都更具有优 势 。
2 . 3 限制酶 片段长度 多态性分析( r e s t r i c t i o n f r a g m e n t l e n g t h
黄 晓燕 ,陈丽 丹 ,王露 霞
广 州 军 区广 州 总 医院 检 验 科 ( 广州 5 1 0 0 1 0 ) 血 流 感 染 引起 的败 血症 临床 常 见 , 且发病危 急, 后 果 严 重 。 可 导 致 血 流 感 染 的 细 茵种 类很 多 , 针 对 不 同细 菌采 用 不
守区组成 , 保守 区为所有 细菌所共 有, 可 变 区具 有属或 种的 特异性 。以保 守区序列设计 出针对所有细菌的通 用引物 , 可 变区经 P C R反应产生的特异条 带数 不同 - 3 ] 。根 据 以上原 理, 利用细菌的 D N A为模板进行 P C R, 并将其特异 的电泳结
加 入 荧光 基 团 , 利 用 荧光 信 号 进 行 实 时监 控 定 量 , 不仅 实现 了P C R从 定 性 到 定 量 的 飞 跃 , 克 服 了 常规 P C R 定 性 检 测 的
1 常 规 方 法
1 . 1 常规 培养 方法 目前 , 全 自动 血培 养仪及 细菌全 自动
提高标本的阳性检 出率。但 P C R一般是 对单种细 菌进 行有 目的的扩增 , 在病原 菌未 明的情况下 , 难 以做到逐一检 测 , 不 能满足于临床 各种感染性 疾病 的快速诊断 。因此 , 该技 术在 临床检测病原茵 中的应用受到一 定限制 。 2 . 2 荧光定量 P C R技术 荧光定量 P C R技 术是 P C R和核 酸杂交以及 荧光电信 号放 大结合 同步 的技术 , 在反 应体 系中
p o l y m o r p h i s m, R F L P ) 限制 性 内切 酶是 一类 能够 识别 特异 性D N A序列并对其进 行切 割的酶, 一条 完整的 D N A分子经
限制 性 内切 酶 切 割后 分 解 成 不 同 大 小 的 片段 , 其 电 泳 迁 移 率
培 养瓶本 身为密 闭容 器, 排 除 了检 测 过程 中的人 为干扰 因