血流感染实验室诊断新技术
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鉴定仪 已被广泛应用 于Ｉ 临床微 生物室 ， 该方 法建 立于传统的
手 工培养及 细菌鉴定 方法 的基 础上。采 集 患者 血液 置于血 培养瓶后立 即装载至全 自动血培养仪 ， 实时观察 细菌生长曲
线， 于培养 ７ ２ ｈ时发 出阴性预报告 ， 直 至第 ５天发 出阴性最 终报告 。若有细 菌生长 ， 即行 革兰染色， 发 出阳性预报 告， 同 时转种相应平板培养 、 鉴 定到种或属 ， 同时进 行药敏试验 ， 耗 时 ３～ ４ ｄ 。本方法较 传统培 养方 法提 高 了阳性 标本 的检 测 率及缩短 了其报告 时 间。全 自动 血培养及 鉴 定 系统是 由电 脑全程监控 ， 将 培养、 检测过程一体化 ， 方便 快捷 ， 同时， 因血
黄 晓燕 ，陈丽 丹 ，王露 霞
广 州 军 区广 州 总 医院 检 验 科 （ 广州 ５ １ ０ ０ １ ０ ） 血 流 感 染 引起 的败 血症 临床 常 见 ， 且发病危 急， 后 果 严 重 。 可 导 致 血 流 感 染 的 细 茵种 类很 多 ， 针 对 不 同细 菌采 用 不
守区组成 ， 保守 区为所有 细菌所共 有， 可 变 区具 有属或 种的 特异性 。以保 守区序列设计 出针对所有细菌的通 用引物 ， 可 变区经 Ｐ Ｃ Ｒ反应产生的特异条 带数 不同 － ３ ］ 。根 据 以上原 理， 利用细菌的 Ｄ Ｎ Ａ为模板进行 Ｐ Ｃ Ｒ， 并将其特异 的电泳结
不足 ， 而且具有特异 性强 、 有 效解 决 Ｐ Ｃ Ｒ污 染 问题 、 自动化
程度 高等特点。较 常规 Ｐ Ｃ Ｒ技术 ， 无论从敏 感性 、 特 异性与 速度上都更具有优 势 。
２ ． ３ 限制酶 片段长度 多态性分析（ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ａ ｇ ｍ ｅ ｎ ｔ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ
加 入 荧光 基 团 ， 利 用 荧光 信 号 进 行 实 时监 控 定 量 ， 不仅 实现 了Ｐ Ｃ Ｒ从 定 性 到 定 量 的 飞 跃 ， 克 服 了 常规 Ｐ Ｃ Ｒ 定 性 检 测 的
１ 常 规 方 法
１ ． １ 常规 培养 方法 目前 ， 全 自动 血培 养仪及 细菌全 自动
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ， Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ ） 限制 性 内切 酶是 一类 能够 识别 特异 性Ｄ Ｎ Ａ序列并对其进 行切 割的酶， 一条 完整的 Ｄ Ｎ Ａ分子经
限制 性 内切 酶 切 割后 分 解 成 不 同 大 小 的 片段 ， 其 电 泳 迁 移 率
培 养瓶本 身为密 闭容 器， 排 除 了检 测 过程 中的人 为干扰 因
ｈ ， 随后 进 行 电 泳分 析 ，全 程耗 时 不超 过 １ ０ ｈ ， 速 度 较 目前 临
床常规 培养方法快 。而且 Ｐ Ｃ Ｒ方法 不受患者在检测前 已使
用抗生素治疗的影响， 所 需 菌 量 亦少 （ 可 少至 ｐ ｇ 级） ， 可 大 大
０ ｆ — ｌ ｆ ｉ ｇ ｈ ｔ ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ， Ｔ Ｏ Ｆ ＭＳ ） 技 术 等 现 代 手 段 相 结 合， 大 大提 高 了检 出率 ， 并 且 缩 短 了 细 菌鉴 定 结 果 的 报 告 时 间 。 本 文 就 以上 几 种 方 法 的优 缺 点进 行 浅析 。
・
７ ９ Βιβλιοθήκη Baidu・
广东医学 ２ ０ １ ３ 年 ３月 第 ３ ４卷第 ５ 期 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｍ ａ ｒ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ． ５
血 流 感 染 实 验 室诊 断 新 技 术
提高标本的阳性检 出率。但 Ｐ Ｃ Ｒ一般是 对单种细 菌进 行有 目的的扩增 ， 在病原 菌未 明的情况下 ， 难 以做到逐一检 测 ， 不 能满足于临床 各种感染性 疾病 的快速诊断 。因此 ， 该技 术在 临床检测病原茵 中的应用受到一 定限制 。 ２ ． ２ 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ技术 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ技 术是 Ｐ Ｃ Ｒ和核 酸杂交以及 荧光电信 号放 大结合 同步 的技术 ， 在反 应体 系中
敏 方法过 渡 到 与 聚合 酶 链 反 应 （ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，
ｐ ｃ ａ） 技 术及 其 扩 展 试 验 、 基 因芯 片、 飞 行 时 间质 谱 （ ｔ ｉ ｍ ｅ一
种 方 法 。该 方 法 从 标 本 采 集 到 完 成 Ｐ Ｃ Ｒ 扩 增 仅 需 ６—８
法检 测 ， 其 应 用有 一 定 的 限 制 。
也不 同。在细菌的快速鉴 定 中利用 Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ技 术， 对 不 同细 菌 Ｐ Ｃ Ｒ扩增后 的产物进行切割 ， 可产 生不 同数 目的条 带，由此
鉴 别 不 同菌 种 。 该 方 法检 测 时 间 不超 过 ２ ４ ｈ ， 且 单 份 标 本 可
素， 减少污染结果。但是 此方法受采血 前患者皮肤 消毒等检 验前 处理质 量控制 、 临床应 用过抗 生素、 采血量 及细 菌数量 等诸 多因素的影 响， 易出现假 阴性 或假 阳性的 结果 ， 使 实验 室误报 而导致 临床误诊 ， 耽误 患者的治疗。另外生长缓慢或 不能在培 养基上 生长的细 菌及 一些苛 养茵则 不可采 用此 方
果 建 立成 图谱 以 筛选 各 种 病 原 茵 ， 是 现 时 临床 实验 室 常 用 的
一
同的抗 生素进 行 治疗 ， 是 败血 症 能否治愈 的关键 。如何 实 现 血流感染致病 菌的快速 有效检测及 其 药敏 结 果的准确 回 报， 是 长期 困扰 临床 的问题 。随着分子生物 学技 术 的广泛应 用， 对各种致病 菌的检测也从常规的单纯分 离培养鉴 定及 药
手 工培养及 细菌鉴定 方法 的基 础上。采 集 患者 血液 置于血 培养瓶后立 即装载至全 自动血培养仪 ， 实时观察 细菌生长曲
线， 于培养 ７ ２ ｈ时发 出阴性预报告 ， 直 至第 ５天发 出阴性最 终报告 。若有细 菌生长 ， 即行 革兰染色， 发 出阳性预报 告， 同 时转种相应平板培养 、 鉴 定到种或属 ， 同时进 行药敏试验 ， 耗 时 ３～ ４ ｄ 。本方法较 传统培 养方 法提 高 了阳性 标本 的检 测 率及缩短 了其报告 时 间。全 自动 血培养及 鉴 定 系统是 由电 脑全程监控 ， 将 培养、 检测过程一体化 ， 方便 快捷 ， 同时， 因血
黄 晓燕 ，陈丽 丹 ，王露 霞
广 州 军 区广 州 总 医院 检 验 科 （ 广州 ５ １ ０ ０ １ ０ ） 血 流 感 染 引起 的败 血症 临床 常 见 ， 且发病危 急， 后 果 严 重 。 可 导 致 血 流 感 染 的 细 茵种 类很 多 ， 针 对 不 同细 菌采 用 不
守区组成 ， 保守 区为所有 细菌所共 有， 可 变 区具 有属或 种的 特异性 。以保 守区序列设计 出针对所有细菌的通 用引物 ， 可 变区经 Ｐ Ｃ Ｒ反应产生的特异条 带数 不同 － ３ ］ 。根 据 以上原 理， 利用细菌的 Ｄ Ｎ Ａ为模板进行 Ｐ Ｃ Ｒ， 并将其特异 的电泳结
不足 ， 而且具有特异 性强 、 有 效解 决 Ｐ Ｃ Ｒ污 染 问题 、 自动化
程度 高等特点。较 常规 Ｐ Ｃ Ｒ技术 ， 无论从敏 感性 、 特 异性与 速度上都更具有优 势 。
２ ． ３ 限制酶 片段长度 多态性分析（ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ａ ｇ ｍ ｅ ｎ ｔ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ
加 入 荧光 基 团 ， 利 用 荧光 信 号 进 行 实 时监 控 定 量 ， 不仅 实现 了Ｐ Ｃ Ｒ从 定 性 到 定 量 的 飞 跃 ， 克 服 了 常规 Ｐ Ｃ Ｒ 定 性 检 测 的
１ 常 规 方 法
１ ． １ 常规 培养 方法 目前 ， 全 自动 血培 养仪及 细菌全 自动
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ， Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ ） 限制 性 内切 酶是 一类 能够 识别 特异 性Ｄ Ｎ Ａ序列并对其进 行切 割的酶， 一条 完整的 Ｄ Ｎ Ａ分子经
限制 性 内切 酶 切 割后 分 解 成 不 同 大 小 的 片段 ， 其 电 泳 迁 移 率
培 养瓶本 身为密 闭容 器， 排 除 了检 测 过程 中的人 为干扰 因
ｈ ， 随后 进 行 电 泳分 析 ，全 程耗 时 不超 过 １ ０ ｈ ， 速 度 较 目前 临
床常规 培养方法快 。而且 Ｐ Ｃ Ｒ方法 不受患者在检测前 已使
用抗生素治疗的影响， 所 需 菌 量 亦少 （ 可 少至 ｐ ｇ 级） ， 可 大 大
０ ｆ — ｌ ｆ ｉ ｇ ｈ ｔ ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ， Ｔ Ｏ Ｆ ＭＳ ） 技 术 等 现 代 手 段 相 结 合， 大 大提 高 了检 出率 ， 并 且 缩 短 了 细 菌鉴 定 结 果 的 报 告 时 间 。 本 文 就 以上 几 种 方 法 的优 缺 点进 行 浅析 。
・
７ ９ Βιβλιοθήκη Baidu・
广东医学 ２ ０ １ ３ 年 ３月 第 ３ ４卷第 ５ 期 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｍ ａ ｒ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ． ５
血 流 感 染 实 验 室诊 断 新 技 术
提高标本的阳性检 出率。但 Ｐ Ｃ Ｒ一般是 对单种细 菌进 行有 目的的扩增 ， 在病原 菌未 明的情况下 ， 难 以做到逐一检 测 ， 不 能满足于临床 各种感染性 疾病 的快速诊断 。因此 ， 该技 术在 临床检测病原茵 中的应用受到一 定限制 。 ２ ． ２ 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ技术 荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ技 术是 Ｐ Ｃ Ｒ和核 酸杂交以及 荧光电信 号放 大结合 同步 的技术 ， 在反 应体 系中
敏 方法过 渡 到 与 聚合 酶 链 反 应 （ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，
ｐ ｃ ａ） 技 术及 其 扩 展 试 验 、 基 因芯 片、 飞 行 时 间质 谱 （ ｔ ｉ ｍ ｅ一
种 方 法 。该 方 法 从 标 本 采 集 到 完 成 Ｐ Ｃ Ｒ 扩 增 仅 需 ６—８
法检 测 ， 其 应 用有 一 定 的 限 制 。
也不 同。在细菌的快速鉴 定 中利用 Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ技 术， 对 不 同细 菌 Ｐ Ｃ Ｒ扩增后 的产物进行切割 ， 可产 生不 同数 目的条 带，由此
鉴 别 不 同菌 种 。 该 方 法检 测 时 间 不超 过 ２ ４ ｈ ， 且 单 份 标 本 可
素， 减少污染结果。但是 此方法受采血 前患者皮肤 消毒等检 验前 处理质 量控制 、 临床应 用过抗 生素、 采血量 及细 菌数量 等诸 多因素的影 响， 易出现假 阴性 或假 阳性的 结果 ， 使 实验 室误报 而导致 临床误诊 ， 耽误 患者的治疗。另外生长缓慢或 不能在培 养基上 生长的细 菌及 一些苛 养茵则 不可采 用此 方
果 建 立成 图谱 以 筛选 各 种 病 原 茵 ， 是 现 时 临床 实验 室 常 用 的
一
同的抗 生素进 行 治疗 ， 是 败血 症 能否治愈 的关键 。如何 实 现 血流感染致病 菌的快速 有效检测及 其 药敏 结 果的准确 回 报， 是 长期 困扰 临床 的问题 。随着分子生物 学技 术 的广泛应 用， 对各种致病 菌的检测也从常规的单纯分 离培养鉴 定及 药