利福平中间产品检验操作规程

1.目的：

规范利福平中间产品检验操作，保证利福平中间产品的质量。

2.范围：

适用于本公司合成车间生产的利福平中间产品的检验。

3.责任：

质量管理科、中心化验室主任、检验员对本规程的实施负责。

4.检验依据：

《中国药典》2015版二部。

5.取样依据：

按中间产品取样标准操作规程取样。

6.内容:

6.1 环合反应液

◆测定方法

取反应液，用毛细管点于薄层板上（7.5×2.5cm，取硅胶H15g，加含5%磷酸氢二钠与0.2%羧甲基纤维素钠的溶液40ml，研磨均匀后铺板，经105℃活化1小时，放入干燥箱内备用），以氯仿－甲醇（9：1）为展开剂，展开至溶剂前沿到达约6.5cm处时，取出薄层板，晾干。

◆判定

若斑点为蓝色斑点且无明显红斑点，为反应完全。

6.2 缩合反应液

◆测定方法

取反应液，用毛细管点于薄层板上（7.5×2.5cm，取硅胶H15g，加含5%磷酸氢二钠与0.2%羧甲基纤维素钠的溶液40ml，研磨均匀后铺板，经105℃活化1小时，放入干燥箱内备用），以氯仿－甲醇（9：1）为展开剂，展开至溶剂前沿到达约6.5cm处时，取出薄层板，晾干。

◆判定

无蓝色斑点和3－F斑点，为反应完全。

6.3 利福平粗品

◆外观

目视为暗红色的结晶性粉末。

◆干燥失重

●仪器与设备

快速水份测定仪

●操作方法

取本品，在快速水份测定仪上按快速水份测定仪标准操作规程操作。

●结果判定

测得干燥失重不超过30.0%，则判定为符合规定；否则，判定为不符合规定。

6.4 利福平精品

◆外观

目视为暗红色的结晶性粉末。

◆干燥失重

●仪器与设备

快速水份测定仪

●操作方法

取本品，在快速水份测定仪上按快速水份测定仪标准操作规程操作。

●结果判定

测得干燥失重不超过30.0%，则判定为符合规定；否则，判定为不符合规定。

◆酸度

●仪器：酸度计。

●操作方法：

➢供试品溶液的制备：称取本品约100mg，置25ml烧杯中，加新沸放冷除去二氧化碳的纯化水10ml，制成每1ml中含10mg的悬浮液。

➢测定方法：照《中国药典》2010年版二部附录ⅥH测定。

➢取PH4.00、PH6.86两种标准缓冲液做仪器校正。

➢测定供试品溶液的PH值。

➢标准规定：PH值应为4.0～6.5.

◆有关物质

●试剂：磷酸二氢钾、枸橼酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水。

●仪器：高效液相色谱仪。

●操作方法

➢供试品溶液制备：取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，用5ml乙腈溶解后，再用乙腈-水（1:1）稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 中约含1mg的溶液，作为供试品溶液（临用新制或于2～8℃条件下6小时内使用）。

➢对照溶液制备：精密称取利福平对照品约10mg，置100ml量瓶中，用5ml乙腈溶解后，用乙腈-水（1:1）稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用乙腈-水（1:1）稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含10ug的溶液，作为对照溶液；

➢灵敏度溶液：精密量取利福平对照溶液5ml，置100ml容量瓶中，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含0.5ug 的溶液。

➢杂质对照溶液

杂质对照品溶液（1）：

精密称取醌式利福平对照品约10mg置100ml容量瓶中，加5ml乙腈溶解后，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml容量瓶中，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 中含醌式利福平对照品10ug的溶液。

杂质对照品溶液（ 2）:

精密称取N-氧化利福平对照品约10mg 置100ml容量瓶中，加5ml 乙腈溶解后，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，

置50ml 容量瓶中，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 中含N-氧化利福平对照品10ug 的溶液。

➢ 测定方法：照含量测定下的色谱条件，分别取对照溶液、灵敏度溶液、杂质对照品(1)(2)(3)溶液和供试品溶液各10ul ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。

●

计算公式：

醌式利福平含量（%）= ×100%

N-氧化利福平含量（%）= ×100%

3-甲酰利福霉素SV 含量（%）= ×100%

最大单个杂质=

其他各杂质总含量（%）=

式中 W S1 为醌式利福平对照品的重量，g ；

W S2 为N-氧化利福平对照品的重量，g ；

杂质对照品溶液(3) ：

精密称取3-甲酰利福霉素SV 对照品 约10mg 置100ml 容量瓶中，加5ml 容量瓶中，用乙睛-水（1:1）溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml 中3-甲酰利福霉素SV 对照品10ug 溶液。

W S1×A T1×(1/100)×(5/50)×P 1

W T ×A S1×(1/50)×(1－干燥失重%)

W S2×A T2×(1/100)×(5/50)×P 2

W T ×A S2×(1/50)×(1－干燥失重%)

W S3×A T3×(1/100)×(5/50)×P 3

W T ×A S3×(1/50)×(1－干燥失重%)

W S3 为3-甲酰利福霉素SV对照品的重量，g；

W T 为供试品的重量，g；

A S1 为杂质对照品溶液中醌式利福平的峰面积；

A S2 为杂质对照品溶液中N-氧化利福平的峰面积；

A S3 为杂质对照品溶液中3-甲酰利福霉素SV的峰面积；

A T1 为供试品溶液中醌式利福平的峰面积；

A T2 为供试品溶液中N-氧化利福平的峰面积；

A T3 为供试品溶液中3-甲酰利福霉素SV的峰面积；

P1 为醌式利福平对照品的纯度，%；

P2 为N-氧化利福平对照品的纯度，%；

P1 为3-甲酰利福霉素SV对照品的纯度，%；

●标准规定：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，醌式利福平、N-氧化利福平、3-甲酰利福霉素SV按外标法以峰面积计算，分别不得过1.5%、0.5%、0.5%，任何各单个杂质不得过1.0%，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（3.0%）。

◆含量测定

●试剂：磷酸二氢钾、枸橼酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水。

●仪器：高效液相色谱仪。

●测定方法：照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。

●色谱条件：

➢流动相：甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氢钾溶液-1.0mol/L枸橼酸溶液（30：30：36：4）；

➢色谱柱： C8 5u（250mm×4.6mm）

➢填充剂：辛基硅烷键合硅胶