细菌的培养法
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液体培养基接种法 可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊，有的呈沉 淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另外还可以供测定细菌生化特性之用。凡是肉汤、 葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法 常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种， 前者用于测定细菌的动力，后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求
1．学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。 2．进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。 材料
1．菌种和培养基
平板划线接种法
斜面培养基接种法
菌种
葡萄球菌和大肠杆菌
大肠杆菌培养物
的混合菌液
液体培养基接种法 大肠杆菌培养物 枯草杆菌培养物
穿刺接种法 变形杆菌培养物 痢疾杆菌培养物
培养基 *
普通琼脂平板
一、细菌的基本形态
细菌在适宜的生长繁殖条件下所显示的形态可分为三大类：球菌、杆菌和螺形菌。不 同的细菌又可表现出不同的排列方式，在细菌的鉴别上有一定的参考价值。
材料
1．球菌示教片 2．杆菌示教片
葡萄球菌、链球菌和肺炎链球菌 大肠杆菌和炭疽杆菌
3．螺形菌示教片 方法
霍乱弧菌
1．使用显微镜的油镜观察球菌、杆菌和螺形菌的示教片。 2．注意各菌的形状、大小、排列方式等特点（注意：细菌染成什么颜色不是本实验要
3-4 垂直刺入半固体琼脂培养
基的中心，刺达近管底部，但不必及于管底，然后循原路退出。
（ 4）接种完毕，接种针重行灭菌后放至试管架上，塞好棉塞，
37℃培养 18～ 24 小时
后取出观察细菌的生长情况。
可编辑 word, 供参考版！
图 1-5 穿刺接种法
实验二 细菌的形态与结构
各种细菌在一定环境条件下，有相对恒定的形态与结构。了解细菌的形态与结构是 鉴别细菌的重要方法之一。此外，对分析细菌的致病性和免疫发生的机理等方面，也有 一定的意义。 目的要求 观察细菌的基本形态和一些细菌的特殊结构。
旋转琼脂平板 90 度。烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表
面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板
1/5），此为二区。注
意接种环只通过薄膜 1～ 2 次，以获取薄膜处少量的细菌。
旋转琼脂平板 90 度。烧灼接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划 线（约占平板 1/4），此为三区。接种环只通过二区 1～ 2 次以获得少量细菌。
实验一 细菌的培养法
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究它们的 各种生物学特性。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养 基并考虑到其他的培养条件（如温度、湿度、酸碱度、气体等）之外，掌握各种分离培 养和接种的基本技术，也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。 若要研究其中某种细菌，就必须先将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯 培养。分离培养细菌的方法有多种，平板划线法即是其中之一。该法主要是借划线而将 混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个 的细菌集团（即菌落）以达到分离纯种的目的。
图 1-3 斜面培养基接种法
3． 液体培养基接种法
（ 1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
（ 2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及待接种的肉汤管。
（ 3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再伸入肉汤管内，在接近液面管壁处
轻轻研磨，蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中（见图
3-3）。塞好试管棉塞后，摇动液
。再伸进待接种的培养基管，
如图 3-2 进行斜面培养基接种，从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养基表面。
沾有细菌的接种环进出试管时不应触及到试管内壁和试管口。
（ 8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好棉塞，并放至原来的位置上。重新烧灼接种
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环，灭菌后放回试管架上。 接种好的试管放 37℃温箱培养， 18～ 24 小时后观察生长情况。
体，使细菌在液体中均匀分布。
（ 4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉汤管放 时后观察生长情况。
37℃温箱培养， 18～ 24 小
图 1-4 液体培养基接种法
4． 穿刺接种法
（ 1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
（ 2）如斜面培养基接种法，握持菌种管及待接种的半固体琼脂培养基。
（ 3）右手持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌苔，如图
（ 4）以右手拇指和食指捏持转动两管棉塞，以便在接种时易于拔取。
（ 5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。 （ 6）以右手手掌及小指，小指及无名指分别拔取并夹持两管棉塞，将两管管口灭菌。
（ 7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种
管（注意，一要防止取菌过多；二要防止弄破培养基表面）
求，染色方法将在以后实验中实际操作） 。 结果记录
实验结果
葡萄球菌
链球菌
肺炎链球菌
大肠杆菌
炭疽杆菌
霍乱弧菌
细菌形状
细菌排列方式
二、细菌的特殊结构
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旋转琼脂平板 90 度。接种环不必再灭菌， 接三区连续平行划线， 划满平板其余部分， 此为四区。
注意各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 （ 5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放（这样可避免培养过程中凝结水 自皿盖滴下，冲散菌落） ，送进 37℃温箱培养。
（ 6）培养 18～24 小时后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其
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大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
1
2
3
4
图 1-2 四区划线接种法
2． 斜面培养基接种法
wk.baidu.com
（ 1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。
（ 2）点燃酒精灯。
（ 3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌种与待接种的培养基管，使菌种管位 于左侧，斜面部均应向上，勿成水平，以免凝结水浸润培养基表面，甚至沾湿棉塞。
火焰 10cm 范围之内（视此范围为无菌环境） ；灭菌后的接种环不能再碰及他物。
（ 3）取菌种
左手持装有葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指
拔取试管棉塞，将试管管口迅速通过火焰
2～ 3 次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的混合菌液，然后退出菌种 管。将菌种管管口再次通过火焰 2～ 3 次灭菌，塞好棉塞，放至原来的位置。
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图 1-1，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属环端，再直接 烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火 焰，如此 2～ 3 次。
图 1-1 接种环的灭菌操作 然后将接种环移开火焰，待其冷却。注意，接种环不能距离火焰过远，一般应在距
（ 4）分离划线接种细菌（见图 3-1）
左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近）
，尽量使之直立以免空气中
的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄
膜（约占平板面的 1/10），视为一区。划线时使接种环与平板面成
30～ 40 度角，以腕力
在平板表面行轻而快地来回滑动动作。切记，接种环不应嵌进培养基内，避免将琼脂表 面戳破。
当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状。 一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分 为三种。
斜面培养基接种法 常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。 琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基 均可用此法接种。
琼脂斜面培养基
普通肉汤培养基
半固体琼脂培养基
* 各培养基的组成及配置方法参见书后附录。 2．接种环、接种针、酒精灯、记号笔、试管架等 方法 1． 平板划线接种法 （ 1）标记 在培养皿底玻璃上，用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、班级、日期 等。 （ 2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环并放置火焰中烧灼灭菌，如
穿刺接种法 常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种， 前者用于测定细菌的动力，后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求
1．学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。 2．进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。 材料
1．菌种和培养基
平板划线接种法
斜面培养基接种法
菌种
葡萄球菌和大肠杆菌
大肠杆菌培养物
的混合菌液
液体培养基接种法 大肠杆菌培养物 枯草杆菌培养物
穿刺接种法 变形杆菌培养物 痢疾杆菌培养物
培养基 *
普通琼脂平板
一、细菌的基本形态
细菌在适宜的生长繁殖条件下所显示的形态可分为三大类：球菌、杆菌和螺形菌。不 同的细菌又可表现出不同的排列方式，在细菌的鉴别上有一定的参考价值。
材料
1．球菌示教片 2．杆菌示教片
葡萄球菌、链球菌和肺炎链球菌 大肠杆菌和炭疽杆菌
3．螺形菌示教片 方法
霍乱弧菌
1．使用显微镜的油镜观察球菌、杆菌和螺形菌的示教片。 2．注意各菌的形状、大小、排列方式等特点（注意：细菌染成什么颜色不是本实验要
3-4 垂直刺入半固体琼脂培养
基的中心，刺达近管底部，但不必及于管底，然后循原路退出。
（ 4）接种完毕，接种针重行灭菌后放至试管架上，塞好棉塞，
37℃培养 18～ 24 小时
后取出观察细菌的生长情况。
可编辑 word, 供参考版！
图 1-5 穿刺接种法
实验二 细菌的形态与结构
各种细菌在一定环境条件下，有相对恒定的形态与结构。了解细菌的形态与结构是 鉴别细菌的重要方法之一。此外，对分析细菌的致病性和免疫发生的机理等方面，也有 一定的意义。 目的要求 观察细菌的基本形态和一些细菌的特殊结构。
旋转琼脂平板 90 度。烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表
面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板
1/5），此为二区。注
意接种环只通过薄膜 1～ 2 次，以获取薄膜处少量的细菌。
旋转琼脂平板 90 度。烧灼接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划 线（约占平板 1/4），此为三区。接种环只通过二区 1～ 2 次以获得少量细菌。
实验一 细菌的培养法
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究它们的 各种生物学特性。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养 基并考虑到其他的培养条件（如温度、湿度、酸碱度、气体等）之外，掌握各种分离培 养和接种的基本技术，也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。 若要研究其中某种细菌，就必须先将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯 培养。分离培养细菌的方法有多种，平板划线法即是其中之一。该法主要是借划线而将 混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个 的细菌集团（即菌落）以达到分离纯种的目的。
图 1-3 斜面培养基接种法
3． 液体培养基接种法
（ 1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
（ 2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及待接种的肉汤管。
（ 3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再伸入肉汤管内，在接近液面管壁处
轻轻研磨，蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中（见图
3-3）。塞好试管棉塞后，摇动液
。再伸进待接种的培养基管，
如图 3-2 进行斜面培养基接种，从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养基表面。
沾有细菌的接种环进出试管时不应触及到试管内壁和试管口。
（ 8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好棉塞，并放至原来的位置上。重新烧灼接种
可编辑 word, 供参考版！
环，灭菌后放回试管架上。 接种好的试管放 37℃温箱培养， 18～ 24 小时后观察生长情况。
体，使细菌在液体中均匀分布。
（ 4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉汤管放 时后观察生长情况。
37℃温箱培养， 18～ 24 小
图 1-4 液体培养基接种法
4． 穿刺接种法
（ 1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。
（ 2）如斜面培养基接种法，握持菌种管及待接种的半固体琼脂培养基。
（ 3）右手持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌苔，如图
（ 4）以右手拇指和食指捏持转动两管棉塞，以便在接种时易于拔取。
（ 5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。 （ 6）以右手手掌及小指，小指及无名指分别拔取并夹持两管棉塞，将两管管口灭菌。
（ 7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种
管（注意，一要防止取菌过多；二要防止弄破培养基表面）
求，染色方法将在以后实验中实际操作） 。 结果记录
实验结果
葡萄球菌
链球菌
肺炎链球菌
大肠杆菌
炭疽杆菌
霍乱弧菌
细菌形状
细菌排列方式
二、细菌的特殊结构
可编辑 word, 供参考版！
旋转琼脂平板 90 度。接种环不必再灭菌， 接三区连续平行划线， 划满平板其余部分， 此为四区。
注意各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 （ 5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放（这样可避免培养过程中凝结水 自皿盖滴下，冲散菌落） ，送进 37℃温箱培养。
（ 6）培养 18～24 小时后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其
可编辑 word, 供参考版！
大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
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图 1-2 四区划线接种法
2． 斜面培养基接种法
wk.baidu.com
（ 1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。
（ 2）点燃酒精灯。
（ 3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌种与待接种的培养基管，使菌种管位 于左侧，斜面部均应向上，勿成水平，以免凝结水浸润培养基表面，甚至沾湿棉塞。
火焰 10cm 范围之内（视此范围为无菌环境） ；灭菌后的接种环不能再碰及他物。
（ 3）取菌种
左手持装有葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指
拔取试管棉塞，将试管管口迅速通过火焰
2～ 3 次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的混合菌液，然后退出菌种 管。将菌种管管口再次通过火焰 2～ 3 次灭菌，塞好棉塞，放至原来的位置。
可编辑 word, 供参考版！
图 1-1，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属环端，再直接 烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火 焰，如此 2～ 3 次。
图 1-1 接种环的灭菌操作 然后将接种环移开火焰，待其冷却。注意，接种环不能距离火焰过远，一般应在距
（ 4）分离划线接种细菌（见图 3-1）
左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近）
，尽量使之直立以免空气中
的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄
膜（约占平板面的 1/10），视为一区。划线时使接种环与平板面成
30～ 40 度角，以腕力
在平板表面行轻而快地来回滑动动作。切记，接种环不应嵌进培养基内，避免将琼脂表 面戳破。
当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状。 一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分 为三种。
斜面培养基接种法 常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。 琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基 均可用此法接种。
琼脂斜面培养基
普通肉汤培养基
半固体琼脂培养基
* 各培养基的组成及配置方法参见书后附录。 2．接种环、接种针、酒精灯、记号笔、试管架等 方法 1． 平板划线接种法 （ 1）标记 在培养皿底玻璃上，用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、班级、日期 等。 （ 2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环并放置火焰中烧灼灭菌，如