胶乳凝集试

胶乳凝集试验

——类风湿因子的检测

【实验目的】

1.学习凝集反应的类型及原理

2.掌握胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的方法

【实验原理】

1.凝集反应是一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。根据凝集反应发生的条件分为玻片法和试管法，也可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，它是以聚苯乙烯胶乳微粒作为惰性载体。

2. 胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的原理：类风湿因子主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,可与IgG的Fc段结合。胶乳凝集试验是将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。胶乳凝集试剂是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。RF胶乳超过20U/ml即出现肉眼可见的凝集颗粒。如出现大颗粒凝集的为阳性反应，保持均匀乳液状为阴性反应。根

据阳性阴性反应即可知血清中是否有类风湿因子。检测类风湿因子对类风湿性关节炎(RA)的诊断、分型和疗效观察有着重要的意义。

【实验材料】

1.待测血清

2.类风湿因子(RF)测定试剂盒(胶乳凝集法)：

胶乳液成份：类风湿因子胶乳、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液；

阳性对照成份：羊抗人IgG 抗血清、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液；

阴性对照成份：牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液。

3.微量加样器，反应板

【实验方法】

1. 标记：取四个反应板孔，标记1号为待测，2号为阳性对照，3号为阴性对照，4号为空白对照。

2. 加样：取待测血清，加入4个孔中，每孔加20μl。1号加50μl 胶乳液,2号加阳性对照成份50μl，3号加阴性对照成份50μl 。

3. 搅匀：轻轻晃动，充分混和。2-3分钟后观察结果。

【实验结果】

正常参考范围：成人＜20IU/ml

目测法：与阳性和阴性对照比较，

凝集出现可判断样本中RF＞20IU/ml阳性；

无凝集出现可判断样本中RF＜20IU/ml阴性。

【注意事项】

1.加试剂和阴性、阳性对照，保证滴液大小一致。

2.若阴阳性对照结果出现异常，则试剂不可使用。

3.试剂盒贮存2-10摄氏度，受热会导致试剂阳性率偏高，切勿冷

冻。

4.阴阳性对照经检HbsAg,HCV,HIV为阴性，但仍须如病人样品一样小心处理。

【参考文献】

1、吕绳凯等：上海医院检验杂志4（2）：97.1989

2、Galiving，.P.et al；b.Assays 4：73-95（1983）