肾活检病理组织染色

一、常规染色技术（HE 染色）

苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。

（一）需要试剂

①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。

（二）具体染色步骤

1.切片常规脱蜡入水。

2.苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。

3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。

4.氨水返蓝数秒。

5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。

6.1% 伊红染数秒，水洗。

7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。

染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。（三）注意事项

1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。

2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。

3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

二、特殊染色技术

（一）过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色）

PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。

1.需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。

2.具体染色步骤

（1）切片常规脱蜡入水。

（2）入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗。

（3）入schiff 氏液染10 ～30 min，水洗。

（4）苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。

（5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。

（6）氨水返蓝数秒。

（7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。

（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3.染色结果PAS 阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。

4.注意事项

（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。

（2）Schiff 氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深，时间过短标本基底膜着色淡。

（3）入1% 盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本退色。

（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

（二）六胺银- 马松染色（PAM-Masson 染色）

PAM-Masson 染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为精确。

1.需要试剂

① 1% 过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水；⑤ Masson 液；⑥ 1% 亮绿液。

2.具体染色步骤

（1）切片常规脱蜡入水。

（2）入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗5 min。

（3）入六胺银液72℃染30 ～50 min，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。

（4）加2% 氯化金数滴于组织，5% 硫代硫酸钠洗。

（5）苏木素染细胞核1 ～2 min，1% 盐酸乙醇分化，氨水返蓝。

（6）入Masson 液约10 min，1% 醋酸洗。

（7）入1% 亮绿5 ～8 min，1% 醋酸洗。

（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3.染色结果基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。

4.注意事项

（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。

（2）染色时间与室温和切片厚度有关，室温低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。（3）2% 氯化金分化时间要短，时间长容易使银染退色。

（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

（三）马松染色（Masson 染色）

Masson 染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾间质纤维化程度。

1.需要试剂①苏木素染液；②氨水；③ Masson 液；④ 1% 亮绿液。

2.具体染色步骤

（1）切片常规脱蜡入水。

（2）媒染剂（10% 重铬酸钾、10% 三氯醋酸等量混合）染10 ～30 min，水洗。

（3）苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。

（4）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。

（5）入Masson 液约10 min，水洗，1% 醋酸洗。

（6）入2.5% 磷钨酸约30 s，水洗，1% 醋酸洗。

（7）入2% 橘黄G 约2 min，水洗，1% 醋酸洗。

（8）入1% 亮绿5 ～8 min，1% 醋酸洗。

（9）入100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3.染色结果细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。

4.注意事项

（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。

（2）入Masson 液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。（3）入1% 亮绿染色时间需要镜下控制，时间长容易覆盖Masson 液红色。

（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

（四）刚果红染色

在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。

1．需要试剂①高锰酸钾—硫酸液；②苏木素染液；③氨水；④碱性刚果红液。2．具体染色步骤

（1）切片常规脱蜡入水。

（2）高锰酸钾- 硫酸混合处理3 min，水洗。

（3）5% 草酸处理3 min，水洗。

（4）苏木素染核2 min，水洗，蓝化。

（5）碱性刚果红液染10 ～30 min。

（6）入100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3．染色结果细胞核蓝色，淀粉样物质呈砖红色（图3-12）。

4．注意事项

（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。

（2）碱性刚果红液染色时间应该镜下控制，染色液现配现用着色好。

（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。