医学免疫学实验课件实验-溶血实验

多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb)
天然抗原刺激 多种B淋巴细胞克 隆产生的多种抗 体的混合物。
免疫血清的制备流程
一、免疫动物的选择 二、免疫程序 三、动物采血法 四、抗血清的鉴定 五、抗血清的纯化、保存
一、免疫动物的选择
抗原来源与动物种属的关系
种属差异越远，免疫原性越强
2.皮下接种
将小量药液注入皮下组织的方法。 目的 (1)需迅速达到药效、不宜经口服给药时采用； (2)预防接种。 部位：后背及大腿外侧方
2.皮下接种
操作方法 (1)消毒皮肤待干，左手绷紧皮肤，右手持注射 器，食指固定针栓，针头斜面向上和皮肤呈30度到40 度角，迅速刺入针头的三分之二，放开左手固定针栓， 抽吸无回血，即可推注药液。 (2)注射完毕，消毒棉签轻按针刺处，快速拔针。
各种注射的进针深度
材料分配
1.补体参与的溶血反应 （操作，2人/组）
2.免疫血清的制备与鉴定 （操作，6人/组）
完全溶血
不溶血
实验四 免疫血清的制备
【原理】 将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定
时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种 含抗体的血清称为免疫血清（多克隆抗体）。
优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯 度和免疫原性，以及动物应答的能力。此外，尚 需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间 隔、有无佐剂等因素。
将小量药液注入表皮与真皮之间的方法。 目的 (1)用于各种药物过敏试验，以观察局部反应； (2)预防接种。 部位：后背及大腿外侧方
1.皮内接种
操作方法 (1)消毒皮肤待干，左手绷紧皮肤，右手持注射 器，使针头斜面向上，和皮肤呈5度至15度刺入皮内。 (2)待针头斜面进入皮内后，放平注射器，注入 药液0.1ml, 药量要准确，使局部形成一圆形隆起的 皮丘，皮肤变白，毛孔变大。 (3)注射完毕，迅速拔出针头，切勿按揉。
第7天 ห้องสมุดไป่ตู้12天 第15天
皮内
静脉
静脉
全血 20%悬液 20%悬液
2．0 1．0
2．0
材料：
1.动物 家兔、绵羊。 2.试剂 Alsever’s液、生理盐水、佐剂。 3.器材 注射器、碘酒、酒精、毛细滴管。
常用免疫接种技术
1. 皮内接种 2. 皮下接种 3. 腹腔接种 4. 耳缘静脉接种
1.皮内接种
实验内容
实验三 补体参与的溶血反应 实验四 免疫血清的制备
目的要求
1.掌握补体溶血反应原理。 2.熟悉溶血反应操作、结果观察,免疫血清制 备原理,操作过程及应用。 3.了解补体CH50的测定。
实验三 补体参与的溶血反应
【原理】 山羊红细胞抗原与其相应抗体（溶血素）
结合后，通过经典途径激活补体，产生膜攻击作 用，最后导致红细胞溶解，发生溶血反应。
原理:
Ag + Ab
经典激活途径
补体活化
裂解
材料：
1. 2%绵羊红细胞 2. 溶血素 3. 补体：豚鼠血清 4. NS 5. 试管、吸管、水浴箱等。
方法：
1.取试管四支，编号，按下表加入各物。 2.37℃水浴30min，判定结果。
0.25 0.5 0.5 0.75
结果：
1.管内液体透明呈红色为溶血。 2.管内液体浑浊呈浅红色为不溶血。 3.根据所学知识分析各管结果出现的原因
动物个体的选择
适龄、健康、体重符合要求
抗原的性质
二、免疫程序
免疫原的剂量 免疫间隔时间 免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
三、动物采血法
颈动脉采血法 家兔、绵羊、山羊 心脏采血法 家兔、豚鼠、大鼠、鸡 静脉采血法 家兔、山羊、绵羊
四、抗血清的鉴定
抗体特异性的鉴定 双向免疫扩散法 抗体效价的鉴定 凝集试验 、双向免疫扩散试验 抗体亲合力的鉴定 抗体纯度的鉴定
五、抗血清的纯化、保存
纯化目的是除去这些不相关成分，防止抗 血清中其他杂抗体干扰试验结果。 2℃～8℃保存：短期保存 冰冻保存：保存5年 真空干燥保存：保存5～10年
例：兔抗羊红细胞抗血清 （溶血素）的制备
日期（天） 第1天 第3天
途径
皮内 皮内
抗原
全血 全血
剂量(ml) 0．5 1．0
第5天 皮内 全血 1．5