培养基模拟无菌灌装试验(衣鸣)

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培养基模拟灌装试验的基本条件——方法
与正常工艺一致的生产流程
冻干制剂的典型生产流程
配制
灌装
加塞
冻干
工艺一致性要素
从灭菌/除菌开始到完全灌装结束的全过程； 处方混合阶段采用了无菌过程也必须作为验证的一部分； 配制除菌后原液的保存，如取样、保存时间、物料的循环等操作； 容器、设备的CIP和SIP； 灌装操作； 冻干工艺过程模拟。
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培养基模拟灌装试验的基本条件——方法
灌装体积
每只容器的灌装体积不少于总容积的1/3 同样，灌装体积也不宜过大 既要考虑到瓶倒转或旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件的内表面，又要保
证容器内有足够的氧气支持微生物生长。
灌装数量
对产品进行最终灭菌，是降低微生物污染风险的常用办 法。但有大量药品不适用于最终灭菌而只能采用无菌生 产工艺方法。
无菌生产工艺是制药领域中较难的工艺之一，确保产品 全程无菌是该工艺最大的难点。
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工艺环节与风险
作业环节 灭菌
房间设计 环境监测
消毒 更衣 物品转移 无菌技术（灌装） 无菌装配
验证难易度 易 N/A 中等 难 难 难
难
难
人员依赖程度 低 N/A 可变 高 很高 高
很高
很高
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相关风险 低 中等 高 高 很高 高
很高
很高
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抽样检验法的缺陷
抽样检验法不合格品检出率试验
试验目的：在固定批量的产品中混入已知数量的不合格品，然后按照抽样法则进行抽样 检验，以测试检出不合格的概率(%)。
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培养基模拟灌装试验的基本条件——物料
与正常工艺一致的物料 内/外包材
西林瓶/安瓿 胶塞 铝盖
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培养基模拟灌装试验的基本条件——物料
合适的培养基的选择
适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌 较好的澄明度，较小的粘度 易于除菌过滤 常用培养基：3％胰酪胨大豆肉汤培养基（TSB） 厌氧培养基仅在特殊情况下使用
方式2，模拟完整冻干时间
半压塞产品在冻干机腔室内的放置时间同于正常冻干工艺。 缺点：耗时长
方式3，以经稀释的培养基模拟冻干过程
容器内灌装好经稀释的培养基，以半压塞状态装入冻干机 模拟冻干过程（抽真空等），直到容器内的培养基大致达到正常浓度为止。 缺点：耗时长，需开发特殊的冻干程序，营养支持性不均一，影响微生物的存活力。
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为什么要进行培养基模拟灌装试验？
法规要求 生产工艺自身要求
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培养基模拟灌装试验的法规要求
FDA CGMP 无菌工艺药品指南（2004）
应当使用微生物培养基替代产品来验证无菌工艺操作。这种工 艺模拟，又称为培养基模拟分装
EU GMP 附件1 无菌药品的生产（2008）
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培养基模拟灌装试验的基本条件——环境
悬浮粒子
0.5 和 5.0 µm粒径的粒子应该被 监控
Grade A 应该连续监控 Grade B 应该连续或定期监控
Particle Counter 悬浮粒子计数器
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基础知识培训 （包括：重点回顾与工作相关的和关注的资料，针对个人现有知识水平进行拓展） 能按照相应的SOP成功的掌握更衣技术 工作技能培训，包括实际操作示范 每年至少参与一次成功的无菌工艺模拟，完成指定的工作并通过人员监测
回顾基础培训的内容 通过连续三次符合要求的人员监测，证明其已经能按照相应的SOP成功的掌握了更衣技术 工作技能培训，包括实际操作示范 参与一次成功的无菌工艺模拟，并完成指定的工作
不定期再验证—变更及其评估
对产品或生产线的所有变更，均应根据书面的变更控制系统进行评估 。
如果通过评估认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品的无菌保证水平，则需要进行增补 性培养基模拟灌装试验。例如，设施或设备的变化、生产线配置的变动、人员重要变动、 容器-胶塞系统变更。
其它如：环境监控结果异常、无菌检查结果阳性等。
无菌区缓冲室及传递窗的使用 用缓冲室传递物料时的时间控制
专用的运输工具的使用
被传递物料的清洁、消毒
无菌技术和无菌行为
在无菌区内如何对手套进行有效的消毒 无菌的行为和干扰（如：不防碍层流，正确使用镊子，正确运输物料，正确组装和连接无菌部件及人员正确的移动和行为） 缓冲间和传递窗操作示范
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ORABS
“B”级
操作者不能进 入“A”级别区域。
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“A”级
M
M
灭菌
关键点
包材
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培养基模拟灌装试验的基本条件——设备
ISOLATOR
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培养基模拟灌装试验的基本条件——设备
生产线视频
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轧盖
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培养基模拟灌装试验的基本条件——方法
与正常工艺一致的生产流程
冻干制剂培养基模拟灌装试验模式举例
方式1，模拟装载/卸载过程，缩短放置时间（推荐）
容器内灌装好培养基，以半压塞状态装入冻干机 冻干机内部分抽真空（500mbar），在室温放置一定的时间，不得冷冻。 用无菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞 轧盖 缺点：真空度不能过高，不能造成培养基沸腾。 注意：若所使用的不透明容器，应将内容物倒出进行检查。
综合考虑统计学要求和实际生产批量。 FDA CGMP 要求>5000瓶，如果正常生产的批次量低于5000瓶，则培养基模拟灌
装至少应为实际生产线的最大批次量。 CFDA GMP 2010 培养基模拟灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小
的产品，培养基模拟灌装的数量应至少等于产品的批量。
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培养基模拟灌装试验的基本条件——人员
进入无菌区从事与生产活动相关的操作人员和辅助人员须进行资格确认
首次认证 年度再认证 其他再认证
基础知识培训 通过连续三次符合要求的人员监测，证明其已经能按照相应的SOP成功的掌握了更衣技术 通过以上两项，具备进入无菌区资格 工作技能培训，包括实际操作示范 参与一次成功的无菌工艺模拟，完成指定的工作并通过人员监测
以下行为错在哪里？
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培养基模拟灌装试验的基本条件——设备
设计合理、功能完整的工艺设备也是必要的 传统无菌操作模式
10000级
100级
灭菌
M
包材
M
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培养基模拟灌装试验的基本条件——设备
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培养基模拟灌装试验的基本条件——人员
无菌服是人与产品或环境之间的屏障，必须保持无菌服的完整性。
当我们戴着面罩谈话、打喷嚏 或咳嗽时，会发生什么？
当戴着口罩时，呼吸是向上 运动的。
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培养基模拟灌装试验的基本条件——人员
活性微粒和非活性微粒
基础微生物知识
细菌内毒素 污染的来源和传播途径
工厂特有的微生物类型
环境控制程序的目的（物料的清洁、消毒和灭菌）
清洁、消毒、灭菌的目的和如何正确更衣以减少污染
污染控制的基本原则
防止无菌设备、容器、胶塞、中间物料、中间体、药物活性成分（API）和成品受到污染 生病、有暴露伤口时要报告
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为什么要进行培养基模拟灌装试验
培养基模拟灌装的意义：
通过对生产工艺的无菌操作模拟，用培养基这种挑战 性的产品来评价整个工艺系统（人员、设备、物料、 程序和环境等）在某一个时间点的表现，以证明现有 工艺系统的无菌保证水平能够保证产品的无菌性。
通过了培养基模拟灌装试验并不意味着工艺系统就始 终处在相同的无菌保证水平。
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无菌生产概况
轧盖机
转移瓶塞
洗瓶机
干热隧道
冻干机 灌装机
配液系统
隔离系统
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来自生产工艺的要求……
无菌保证的影响因素
内源性的影响因素
培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应连续进行3次合 格的试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后， 应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应按 生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。
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来Fra Baidu bibliotek生产工艺的要求……
工艺特点
培养基模拟灌装试验
2016年5月22日 衣鸣
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学习目标
通过对本课程的学习，学员应：
了解为什么要进行培养基模拟灌装试验。 掌握培养基模拟灌装试验的基本条件。 学习培养基模拟灌装试验设计与执行。 明确培养基模拟灌装试验的关键点。
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批量：60,000支 方法：USP无菌检测方法
已知不合格品比例
1％ (600) 5％ (3000) 15％ (9000) 30％ (18000)
抽样20支进行检测 不合格品检出概率
18.2% 64.2% 96.1% 99.9%
抽样40支进行检测 不合格品检出概率
33.1% 87.2% 99.8% ≈100.0%
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培养基模拟灌装试验的基本条件——环境
与正常工艺一致的环境 正常的清洁与灭菌程序，正常的环境监控方法
与正常生产一致的环境监控应该被正常执行 当环境结果不合格，但培养基模拟灌装试验通过时应分析说明环境对无菌
工艺带来的潜在风险。 应包括悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、人员监控和表面微生物监控等项目。
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培养基模拟灌装试验的基本条件——方法
初始验证
至少重复3次，以确保结果的重现性和有效性。
定期再验证
定期进行，评估无菌工艺的受控情况。
应综合考虑每一班次及班次变化过程中有代表性的活动及干预。
对人员的资格再确认应纳入到定期再验证中。
无菌工艺验证应包括一个使用营养培养基工艺模拟试验（培养 基分装）。
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培养基模拟灌装试验的法规要求
2010版GMP附录一无菌药品： 第四十七条 无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌装试验。
应根据产品的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度和灭 菌的适用性选择培养基。应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包 括所有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中可能出现 的各种干预和最差条件。
防止破坏层流
环境监测程序
手和前臂的正确清洗和干燥程序
专用鞋和鞋套的使用
正确更衣需要的物品
更衣培训
进入更衣室和退出更衣室的操作规程 培训人更衣示范
受训人正确的更衣示范
对受训人的更衣操作进行评价，必要时进行额外的练习
人员监测程序
物料进入和退出无菌区缓冲室的跨级区运输
使用更衣间时对更衣的要求和对手套的消毒
PMS-Lasair III 5100L
系统和设备 物料和中间体的质量 环境 工艺过程
外源性的影响因素
人员
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工艺过程 系统和设备 人员 物料 环境
5%
10%
40%
40%
5%
10
培养基模拟灌装试验的基本条件
人员 设备 物料 方法 环境
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培养基模拟灌装试验的基本条件——人员
一切工作培训都科是目 由人来完基成本的的培，训所内容以训练有素的人员是必不可少的
人员卫生要求（包括洗澡、剪指甲、洗手）
干净工作服的穿着要求
无菌相人关员行基为础培训知识包括不卸但能去佩彩戴妆不首、饰假限（指除甲于光、滑假以的睫指毛环下外）要求：
正确佩戴头套