诊断——血液学一般检查
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诊断——血液学一般检 查
2020年7月22日星期三
1.血红蛋白测定---
氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保 存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推 荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。
•实 验 一
•原
理
•血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白
被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋 白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳
定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在
特定波长（540nm）和光径（比色杯内径
1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标
准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来
。
•K3Fe(CN)6
•Hb
Hi+ CN-
•实 验 一
•3.于722分光光度计上以转化液 为空白进行比色测定，波长 540nm,光径1.0cm。 •4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量
•实 验 一
•[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：
将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L 、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径 1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准 品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准 曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。则通过待测标本 吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（ Hb=K×A）。
•实 验 一
[报告方式] Hb：__g/L
[参考值] 成年男性： （120～160）g/L 成年女性： （110～150）g/L 新生儿： （170～200）g/L [注意事项] 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、
使用中需妥善。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。
•实 验 一
2.白细胞计数
3.溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破 坏。
4.冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池 （一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温 水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。
5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个
胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。 手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽
量静脉采血。
•实 验 一
2．一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因 RBC残存而干扰计数使结果偏高。
3．白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下 外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏 高，应进行校正。
•实 验 一
[试剂] 白细胞稀释液：冰醋酸 2ml 1%龙胆紫 1ml或结晶紫数滴 蒸馏水加至 100ml [标本来源] EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血
•实 验 一
•[操作]
1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。
2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20µl，轻 拭管尖外余血，准确调节血液液面至20µl处，将血红蛋白吸管插入 白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液 吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。
[原理] 血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细 胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数 池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换 算求出每升血液中的白细胞数量
•实 验 一
•[器材]
1.血细胞计数板，盖玻片 2.血红蛋白吸管（具有10µl
及20µl刻度） 3.1ml吸管，小试管，玻棒 4.光学显微镜
HiCN
•实 验 一
•[器材]
•1.血红蛋白吸管，5ml吸管 •2.大试管 •3.721分光光度计
•[标本来源]
EDTA-K2抗凝全血 或毛细血管采血
[试剂]
血红蛋白转化液（文齐氏液）：
氰化钾（KCN）
0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]
0.20g
无来自百度文库磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g
Triton X—100
大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不
数右）
•实 验 一
6.计算：白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109
式中N表示四个大方格内数得的白细胞总 数。 /4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液 内 WBC数。 ×10：将一个大方格白细胞数换算为1µl 内的白细胞数。 ×106：1L=106µl。 ×20：为血液稀释倍数。
•白细胞计数区
•白 •白
•实 验 一
•白 •白
•计数池构造
•实 验 一
•低倍镜下的计数池大方格结构
•实 验 一
•低倍镜下的白细胞形态（10X10）
•实 验 一
•白细胞计数操作步骤
•实 验 一
[报告方式] 白细胞数（WBC）：__×109/L [参考值] 成人： （4～10）×109/L 新生儿：（15～20）×109/L
1.0ml
蒸馏水
加至1000ml
•上述试剂为淡黄 色溶液，贮存于棕 色瓶中室温保存， 其中非离子表面活 性剂可加速溶血， 缩短转化时间，防 止因血浆蛋白改变 引起的混浊
•实 验 一
[操作]
•1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大 试管中。
•2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl ，轻拭管尖外余血，并准确调节血 柱液面至20µl。加入到准备好的 血红蛋白转化液底部，并用上清液 吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残 余血液，充分混匀，静置5分钟。
校正公式：WBC=A×[100/(100+B)] 其中A:校正前WBC数；B:分类计数100个WBC时遇到
的有核RBC数。
•实 验 一
•实 验 一
[注意事项]
1.采血及计数室充液注意事项:
毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀 或冻疮等均不可穿刺采血。
穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。 EDTA-K2抗凝全血使用前需混匀。 计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。 血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。 毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细
2020年7月22日星期三
1.血红蛋白测定---
氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保 存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推 荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。
•实 验 一
•原
理
•血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白
被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋 白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳
定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在
特定波长（540nm）和光径（比色杯内径
1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标
准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来
。
•K3Fe(CN)6
•Hb
Hi+ CN-
•实 验 一
•3.于722分光光度计上以转化液 为空白进行比色测定，波长 540nm,光径1.0cm。 •4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量
•实 验 一
•[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：
将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L 、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径 1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准 品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准 曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。则通过待测标本 吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（ Hb=K×A）。
•实 验 一
[报告方式] Hb：__g/L
[参考值] 成年男性： （120～160）g/L 成年女性： （110～150）g/L 新生儿： （170～200）g/L [注意事项] 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、
使用中需妥善。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。
•实 验 一
2.白细胞计数
3.溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破 坏。
4.冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池 （一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温 水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。
5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个
胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。 手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽
量静脉采血。
•实 验 一
2．一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因 RBC残存而干扰计数使结果偏高。
3．白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下 外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏 高，应进行校正。
•实 验 一
[试剂] 白细胞稀释液：冰醋酸 2ml 1%龙胆紫 1ml或结晶紫数滴 蒸馏水加至 100ml [标本来源] EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血
•实 验 一
•[操作]
1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。
2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20µl，轻 拭管尖外余血，准确调节血液液面至20µl处，将血红蛋白吸管插入 白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液 吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。
[原理] 血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细 胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数 池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换 算求出每升血液中的白细胞数量
•实 验 一
•[器材]
1.血细胞计数板，盖玻片 2.血红蛋白吸管（具有10µl
及20µl刻度） 3.1ml吸管，小试管，玻棒 4.光学显微镜
HiCN
•实 验 一
•[器材]
•1.血红蛋白吸管，5ml吸管 •2.大试管 •3.721分光光度计
•[标本来源]
EDTA-K2抗凝全血 或毛细血管采血
[试剂]
血红蛋白转化液（文齐氏液）：
氰化钾（KCN）
0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]
0.20g
无来自百度文库磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g
Triton X—100
大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不
数右）
•实 验 一
6.计算：白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109
式中N表示四个大方格内数得的白细胞总 数。 /4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液 内 WBC数。 ×10：将一个大方格白细胞数换算为1µl 内的白细胞数。 ×106：1L=106µl。 ×20：为血液稀释倍数。
•白细胞计数区
•白 •白
•实 验 一
•白 •白
•计数池构造
•实 验 一
•低倍镜下的计数池大方格结构
•实 验 一
•低倍镜下的白细胞形态（10X10）
•实 验 一
•白细胞计数操作步骤
•实 验 一
[报告方式] 白细胞数（WBC）：__×109/L [参考值] 成人： （4～10）×109/L 新生儿：（15～20）×109/L
1.0ml
蒸馏水
加至1000ml
•上述试剂为淡黄 色溶液，贮存于棕 色瓶中室温保存， 其中非离子表面活 性剂可加速溶血， 缩短转化时间，防 止因血浆蛋白改变 引起的混浊
•实 验 一
[操作]
•1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大 试管中。
•2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl ，轻拭管尖外余血，并准确调节血 柱液面至20µl。加入到准备好的 血红蛋白转化液底部，并用上清液 吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残 余血液，充分混匀，静置5分钟。
校正公式：WBC=A×[100/(100+B)] 其中A:校正前WBC数；B:分类计数100个WBC时遇到
的有核RBC数。
•实 验 一
•实 验 一
[注意事项]
1.采血及计数室充液注意事项:
毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀 或冻疮等均不可穿刺采血。
穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。 EDTA-K2抗凝全血使用前需混匀。 计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。 血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。 毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细