Q24焦磷酸测序操作流程

1、开机前检查：

(1) 检查过滤探针：确保过滤探针不发生堵塞，否则更换。

(2) 检查废液桶：必要时清除废液。

(3) 检查卡夹（Cartridge）：确保Cartridge已经在上次使用过后检查过未发生堵塞，并且已经晾干，否则更换。

(4) 检查真空系统：确保真空系统的压力正常。

2、开机程序：

打开机器电源→等待约1分钟进入主界面→插入带有程序的U盘

3、标本检测程序

将PCR产物加入到预先准备好的 2ul Beads及 40ul Binding Buffer混合液中→放置在平板振荡仪上1400rpm混合5-10分钟→准备测序引物与Annealing Buffer混合液25ul →根据实验设计分配到对应的24孔板孔位上→准备work station上的各种缓冲液→将PCR产物混合液转移到work station上→在work station上进行DNA链的分离→将24孔板放置在80度上温浴2min后在室温放置5分钟→根据pre run information加入相应体积的酶、底物和dNTP至试剂仓（Cartridge）中→将试剂仓放进Q24设备中→将24孔板放进Q24设备中→从屏幕上选择需要运行的程度→再次确认后设备开始运行→结束后数据自动保存在U盘上→将U盘上数据拷贝回电脑上进行分析

4、关机程序

4.1 关闭真空工作站

打开真空开关，将真空抽滤工具放置在高纯水中清洗约10秒→将真空抽滤工具以垂直90度竖值约10秒→关闭真空抽滤工具的开关→放置在Park位置上→关闭真空泵电源→清洗work station上的各缓冲液槽后晾干

4.2 关闭PyroMark Q24

选择屏幕上的Shutdown选项→确认后等待屏幕上显示“It is now safe to turn off the instrument”→关闭仪器电源→丢弃测序24孔板，取出仪器内的试剂仓→用高纯水清洗试剂仓，确认无堵塞后室温晾干或37度烘干