斜面低温保藏法

三、接合
（一）定义
接合：供体菌（“雄”）通过其性菌毛与受体菌（“雌”）相
接触，前者传递不同长度的单链DNA给后者，并在后者细胞中进
行双链化或进一步与核染色体发生交换、整合，从而使后者获得 供体菌的遗传性状的现象。
接合子：通过接合而获得新性状的受体细胞。
（二）E．coli的四种接合型菌株
（三）几种杂交的结果：
（三）转化的条件 能进行转化的受体细胞必须处于感受态，同时有外源DNA片段存在， 才能实现其转化。 （四）转化过程 （（五）与转染区别） 链霉素敏感型基因strs
抗链霉素基因str r
二、转导 完全缺陷噬菌体： 转导噬菌体/转导颗粒 部分缺陷噬菌体： 转导子：获得新遗传性状的受体细胞
（一）普遍转导 1 完全普遍转导
1.F+ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ与F-的杂交
杂交的结果：供体菌和受体菌均成为F+细胞 没有供体菌染色体DNA的转移 2. Hfr 与F- 的杂交 杂交后的受体细胞仍然是F部分供体菌DNA染色体转移到受体菌中 3. F′与F-杂交 受体细胞也就变成了F′
部分宿主细胞的DNA随F′因子进入受体菌细胞
（四）原生质体融合 是将遗传性状不同的两种菌融合为一个新细胞 的过程 主要包括原生质体的制备、原生质体的融合、原 生质体再生和融合子的选择等步骤。
遗传： 变异：
遗传型/基因型：
表型：指某一生物体所具有的一切外表特征及内在
特性的总和，是遗传型在合适环境下的具体体现。
饰变：指微生物的某些改变是指不涉及遗传物质结 构改变，而只发生在转录、转译水平上的表型变化。
一、三个经典实验证实核酸是遗传变异的物质基础 （一）经典转化实验：
2、细菌培养试验 热死S菌 肺炎双球菌 活R菌 热死S菌+活R菌
2 流产转导
（二）局限转导
1. 低频转导 （LFT）
■部分缺陷噬菌体的形成
■当部分缺陷噬菌体感染宿主细胞并整合在宿主的核基因组上时，
可使宿主细胞成为一个局限转导子（而不是一个溶源菌， 对λ
噬菌体不具有免疫性）。
2. 高频转导 （HFT）
当双重溶源菌被紫外线等诱导时，其中的正常λ噬菌体的基因 可补偿λdgal所缺失的部分基因功能，因而两种噬菌体就同时 获得复制的机会。
微生物技术应用
背景知识六：菌种保藏技术
微生物会发生变化吗？
分离得到的微生物可以直接用于生产吗？ 怎样保存微生物？
知识节点一 遗传变异的物质基础 知识节点二 原核微生物的基因重组 知识节点三 真核微生物的基因重组 知识节点四 微生物育种技术 知识节点五 菌种保藏技术
知识节点一 遗传变异的物质基础
知识节点四 微生物育种
微生物菌种选育途径：自然选育、定向选育、诱变育种、杂交
育种 一、利用自发突变进行的育种 （一）自发突变原因 1.环境因素对微生物的诱变作用 各种短波辐射和高温等 2.DNA复制 3.微生物自身产诱变物质
（二）自发突变与育种
1.自然选育
在日常生产过程中，不经过人工处理，利用菌种的自发 突变，从而选育出优良菌种的过程 2.定向育种 是指在某一特定条件下，用某一特定因素长期处理某微 生物的群体，同时不断地对它们进行移种传代，以积累自 发突变，并最终获得优良菌株的过程
G → X（黄嘌呤）
C → U（尿嘧啶）
（3）移码突变
（二）诱变育种

诱变育种的基本过程如图：
1.诱变育种的基本过程——操作方法
不生长 长出R菌 长出大量R菌+10-6S菌
（二）噬菌体感染实验
（三）植物病毒的重建实验 TMV重建实验示意图(箭头表示遗传信息的去向)
二、遗传物质在细胞内的存在部位和方式 (一)细胞水平 1 核染色体 2 质粒 （1）致育因子（F因子）又称致育因子或性因子 （2）抗性因子（R因子） 又称R质粒 （3）产细菌素因子 （ 4）诱癌质粒（Ti质粒）
因此由双重溶源菌所产生的裂解物中，含有等量的λ和λdgal
粒子，这就称HFT（高频转导）裂解物
（三）普遍性转导和局限性转导的比较 比较项目 转导的发生 噬菌体形成 形成机制 内含DNA 转导性状 转导过程 转导子 普遍性转导 自然发生 错误的包装 包裹选择模型 只含宿主染色体DNA 供体的任何性状 通过双交换使转导DNA替换了受 体DNA同源区 不能使受体菌溶源化 转导特性稳定 局限性转导 人工诱导如UV等 前噬菌体反常切除 杂种形成模型 同时含有噬菌体DNA和宿主 DNA 多为前噬菌体邻近两端的 DNA片段 转导DNA插入，使受体菌为 部分二倍体 为缺陷溶源菌 转导特性不稳定
转导
接合
噬菌体作媒介
细菌之间的接触
相同：基因转移导致遗传重组
一、转化 （一）定义 转化或转化作用： 转化因子：具有转化活性的外来DNA片段
转化子：转化后出现了供体性状的受体细胞
（二）转化微生物的种类
肺炎链球菌、嗜血杆菌属、芽孢杆菌属、奈瑟氏球菌
属）、根瘤菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属和黄单胞菌属
二、诱变育种
指用人工的方法处理均匀而分散的微生物细胞群，促
使它们发生突变，再从中筛选出符合要求的突变菌株， 供生产和科学实验用 （一）诱发突变原因——诱变剂 1.物理因素的诱变 （1）紫外线 （2）x射线和r射线 （3）热和激光等
2.化学因素的诱变 （1）碱基结构类似物 5-溴尿嘧啶（5-BU）、5-氨基尿嘧啶（5-AU）、8-氮鸟嘌呤 （8-NG）、2-氨基嘌呤（2-AP）和6-氯嘌呤（6-CP） （2）与核酸上碱基起化学反应的诱变剂 结果使A → H（次黄嘌呤）
（5）巨大质粒（mega质粒）
（6）降解性质粒 (二)分子水平
核酸（DNA、RNA）
知识节点二 原核微生物的基因重组
基因重组：将两个不同性状个体细胞内的遗传基因移到一个个体细
胞内，经过遗传分子间的重新组合，形成新的遗传性个体的过程。
获取外源DNA的方式 原核微生物 转化 裸露的DNA
基因重组的方式
知识节点三 真核微生物的基因重组
一、有性杂交
一般指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并
产生新遗传型后代的一种育种技术
二、准性生殖
是一种类似于有性生殖，但比有性生殖更为原始的一
种生殖方式，它可使同种物两个不同菌株的体细胞发生融 合，并不经过减数分裂就能导致基因重组的生殖过程
准性生殖和有性生殖的比较