病毒DNA提取

我要提取一种病毒的DNA，DNA是单链的，外面是病毒的蛋白质外壳包裹。

我的病毒样品是买来的灭活疫苗(vaccine)（干粉状），想用酚/氯仿来抽提DNA，请问病毒干粉要溶解在什么溶液里？

回复

1、病毒干粉可以溶解在PBS、HBSS或者营养液如1640或MEM中。

2、振荡溶解之后，取上清加入等体积的消化缓冲液(0.5M EDTA pH8.0.1M Tris·HCl pH7.4, 10% SDS) , 再加入蛋白酶K (20mg/ml) 至终浓度50ug/ml, 于50℃消化2 h。

3、取出300ul 的消化产物, 加入等体积的酚抽提一次。

4、用等体积的酚∶氯仿∶异戊醇再抽提两次,。

5、加入1/10体积的3M 乙酸钠（pH 5.2）和2倍体积的无水乙醇沉淀

6、70% 乙醇洗涤

7、待沉淀干燥后溶于含RNase A (40ug/ml) TE(pH 8.0) 溶液中。

谢谢您回答我的问题，还想请问，从疫苗(vaccine)干粉中提取DNA，跑琼脂糖凝胶电泳，能看到明显的条带吗？病毒干粉要取多少量来提取？另外，我曾经把疫苗(vaccine)中的病毒干粉溶解在无菌高纯水中，结果水变成了红色，应该是有些疫苗(vaccine)佐剂在影响，请问要如何排除疫苗(vaccine)佐剂影响，红色的物质可能是什么？？

红色的东西应该是保护剂的颜色，保护剂一般是蛋白或其他大分子一类的东西，对DNA提取可能会有一些干扰，如果有条件，可以细胞传代一次最好，不过可能影响也不是很大。疫苗(vaccine)干粉中提取的DNA跑琼脂糖凝胶电泳，能否看到明显的条带，主要与含有的病毒量、提取的DNA量有关。如果后续是扩增基因，微量的可能也就足够了。病毒干粉溶解具体看病毒说明书的推荐，如果没有一般用1-2ml的量来溶解，取多少量来提取DNA，按照说明书一般取300ul左右，如DNAzol。注意提取之前先离心，取上清提取DNA。

血清HBVDNA提取方法

裂解法：

试剂：

TES：10mmol/LTris-HCl,pH8.0,

5mmol/L EDTA,

0.5%SDS

150μg/ml蛋白酶K

100μl血清加TES

方法：

65°C3小时

加等体积酚-氯仿-异戊醇,混匀,12000ｒ/ｍｉｎ离心10分钟,将上清吸入一新管

再用等体积氯仿-异戊醇提取一次,在上清中加入1/10体积的2ｍｏｌ/Ｌ乙酸钠和2倍体积的无水乙醇,-20℃放置30分钟(或过夜),沉淀ＤＮＡ,用70%乙醇洗沉淀1次,12000ｒｐｍ/ｍｉｎ离心10分钟,倾去上清,晾干,加100μｌＴＥ缓冲液溶解沉淀

煮沸法提取血清HBV DNA：

吸200ul 血清放入0.5ml EP管中，沸水煮10分钟，10000rpm离心5min

吸上清，可以直接用于PCR反应

我试过这种方法，简单方便

但不知道适不适合别的病毒DNA

如果你到手是纯化的病毒，只需取1~2ul，加水至约100ul，煮沸10min，离心，取上清1~2ul 即可作模板作PCR，我试过，很好的