菌种的生产 3

第五章菌种的生产

大安成人学校------- 李保瑞

教学目标：1通过学习了解蘑菇的接种设备及灭菌设备，了解蘑菇的菌种类型。掌握母种制备技术

教学重点：重点讲解。蘑菇母种制备技术怎样进行食用菌母种转接

教学难点：母种制备技术怎样进行食用菌母种转接

教学过程：

一、导入新课：菌丝生长的温度范围控制在------------------------------------------。

二、讲授新课：

第一节制种设施及设备

一、接种设施及设备接种室连续式空气消毒洁净器接种箱培养室

蘑菇菌种生产依据菌种的容器、培养基的基质、生产的场所的不同分为两个不同的生产环节：一是以试管为容器，以PDA或PSA为基质，通常在实验室生产的一级种；二是以菌瓶(菌袋)为容器，以木屑、麸皮为基质，通常在菌种生产车间生产的二级种(原种)、三级种(栽培种)。接种环节关系到菌瓶和菌袋的成品率，也直接影响生产的经济效益。蘑菇菌种接种需要哪些设备呢？常用的场所和设备是接种室、接种箱或超净工作台，下面对这三种设备分别做简单介绍。

1、接种箱：又名无菌操作箱，主要用于菌种分离和菌种繁殖的无菌操作。箱体多采用木材框架，四周木板或五合板镶密，正面镶玻璃，形成具有密封性的梯形箱体，便于药物灭菌，防止接种时杂菌侵入。接种箱的左顶部和右底部对角线分别开两个直径4～5厘米的圆形洞口，用10～12层纱布过滤空气，接种时酒精灯能正常燃烧，正面开两个10～12厘米的圆形洞口，装上布袖套，便于双手伸入箱内进行操作。箱顶安装1盏紫外线灭菌灯，箱内可用空间消毒剂熏蒸消毒。

2、接种室：这是菌种厂无菌区的核心部分，也是安装接种设备的专用无菌操作室。标准的接种室要求每间房间不宜过大，一般长4米，宽3米，高2.5米，墙壁四周上部石灰粉刷、油漆至离地面1.5米高度，地面要平整光滑，拉门装置，门窗关闭后能与外界隔离。室内有接种用的超净菌操作台、接菌箱及配套的器具。室内安装2盏30瓦紫外线灭菌灯和照明灯。接种室紧连面积约2米2的缓冲间，两间拉门不在一条直线上，不能同时开门，使空气不能直达接种室。同样安装有1盏紫外线灭菌灯、照明灯和更衣柜。

3、超净工作台：超净工作台又称净化操作台，是一种利用过滤除菌的原理将空气经过工作台内的预过滤器及高效过滤器除尘过滤，洁净后以层流状态(平行流或垂直流)通过操作区，形成高洁净度的局部区域环境。由上部或前面狭缝中喷送出的高速气流所形成的空气幕，保护操作区不受外界空气的影响，呈无菌状态。净化台要求装置在清洁的房间内，并安装紫外线灯。操作方法简单，只要接通电源，按下通风键钮，同时开启紫外线灯约30分钟后关闭紫外线灯即可接种。

二、灭菌设备

（1）高压蒸汽灭菌设备有手提式、卧式和直立式三类灭菌锅，这种灭菌锅能耐较高的蒸汽压力，具有灭菌时间短、效果好、能源消耗少等优点。

①手提式高压灭菌锅容积18升，蒸汽压力1.47×105帕（1.5千克力/厘米2），可用各种热源。主要用于母种灭菌。

②卧式中热灭菌器GYZ1型灭菌器，灭菌室内径60厘米×100厘米，座脚高低可调，功率为12千瓦，可自动控制温度。

③直立式大型灭菌锅上海嘉定县制造的大型烧煤灭菌锅，可装750克玻璃瓶800个，每次烧煤30千克。灭菌锅上方要安装自动起调器，用于起调锅盖、菌种框。

（2）常压蒸汽灭菌设备常压蒸汽灭菌设备一般是由生产单位自行设计的柜式灭菌灶。主要用于栽培种的灭菌。为提高常压灭菌效果，对柜式灭菌灶的设计有一定要求。

①小型柜式灭菌灶用灰砖和水泥砌成，其主要结构为加热用的炉灶和容纳灭菌物品的灭菌柜。灭菌柜的设计有以不要求：①柜顶应砌成国拱形，并留有4～5个排气孔，孔径在l～2厘米。灭菌时，锅内产生水蒸气，穿过灭菌柜，从排气孔逸出，能使蒸汽在灭菌柜内均匀流动。如果没有排气孔，灭菌柜内蒸汽难以上升到顶部，而由侧门或柜壁裂缝逸出，死角大，灭菌不彻底。圆拱顶还有利于凝集在拱顶的水蒸气沿内壁淌下，不致棉塞受潮。②消毒灶的锅面直径要与灭菌柜体积保持一定比例，不能超过1：25（米：立方米〕，以便维持一定蒸汽压力。③灭菌柜内应装有活动隔板，可分层放置灭菌物品；要有一定间隙，使蒸汽能均匀流通。④灭菌柜的侧门宜高不宜低，门的面积不能过大，密闭性能要好，使灭菌柜内温度恒定在102一105℃。⑤灭菌柜的容量以能放置500一1000瓶菌种为宜，不宜过大，否则，锅内产生蒸汽难以达到灭菌温度的要求。⑥灭菌柜外壁的一侧要留加水孔，在烟道的一侧另设水锅，以便利用余热烧水，并可将热水从加水孔注入灶锅内。

②大型灭菌柜用砖、水泥、钢筋建成，包括灭菌灶、蓄水锅、进火口、吸风机和烟囱几部分。为便于操作，炉灶应设在地面以下。

灭菌灶底部安放直径1米的铁锅，灶呈方形，边长2米，边砌24厘米厚的砖墙，外抹水泥。灶台至顶部的距离为90厘米，灶顶用10厘米的拱形钢筋水泥覆盖。在灶的一侧开一高35厘米、宽65厘米的门作为进料口，灶顶留一小孔扦入120℃温度计。这样规格的灭菌灶容量大，一次可以灭1500瓶培养料，每次耗煤150千克左右。

③简易灭菌桶由1个去盖的铁桶（汽油桶、漆桶）、三角支架、煤球炉（炉直径50厘米）组成。在铁桶壁上距桶口5厘米处钻一小孔，插入一支温度计，加橡胶垫圈固定。桶内底部放一蒸架，高10厘米。距桶底2厘米处安装1个放水笼头。桶口用二层耐高温的聚丙烯薄膜扎紧。每次灭菌200瓶，耗煤30千克左右。

第二节菌种

（一）蘑菇品种介绍

（二）蘑菇菌种类型气生型帖生型半气生型

第三节菌种培养与存放

一菌种分离技术：组织分离孢子分离

二母种制备技术：

在食用菌生产中，母种的培养是至关重要的一环。母种质量的优劣，直接影响到食用菌产量的高低和栽培的成败。近日，采访了省农科院食用菌服务站农技师刘素梅，她介绍了食用菌母种的制作要点：

制作培养基

先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后在马铃薯煮汁中加琼脂20克和蔗糖20克煮溶，后补足水至1000毫升，调节pH值在5.5～6。调好pH值后进行分装，一般将培养基装至试管的1/4处，而后加盖棉塞，再用牛皮纸将试管每10支捆成一捆。分装时，注意培养基不可沾在近试管口的壁上，以免日后生霉菌。分装后要立即进行高压灭菌，不可过夜。

高压灭菌

将用牛皮纸捆好的试管（棉塞朝上）竖直放入高压锅内进行灭菌。在0.11兆帕压力下维持30分钟，即可达到灭菌目的。灭菌时，放汽要充分，否则影响灭菌效果。开锅取出试管后趁热摆放，使培养基成斜面。试管的斜面以距棉塞3厘米为宜，斜面摆成后，不宜再摆动。

一级菌种扩管

扩管要在无菌条件下进行，先将扩管工具、培养基及菌种放到扩管箱内，然后按每立方米用高锰酸钾5克、40%的甲醛溶液10毫升的量进行熏蒸消毒30分钟。扩管方法：先将扩管铲在酒精灯火焰上灼烧消毒，然后拔掉母种管上的棉塞，铲一块米粒大的母种，在酒精灯火焰无菌区内迅速送入菌种试管内。扩管后的母种培育10~15天即可投入生产。

1：培养基配方

制备平菇母种常用哪些培养基配方?

配方(1)：土豆200克、葡萄糖20克、琼脂18～20克(冬季18克，夏季20克)、水1000毫升(此即PDA培养基)。

配方(2)：土豆200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(3)：土豆200克、葡萄糖20克、蛋白胨10克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(4)：土豆200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、维生素B110毫升、琼脂20克、水1000毫升。

配方(5)：土豆200克、葡萄糖20克、蛋白胨5克、硫酸镁3克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(6)：葡萄糖lO克、磷酸二氢钾1克、氯化钠0.2克、酵母汁100毫克、硫酸镁0.2克、碳酸钙2克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(7)：土豆100克、鲜菇100克(煮汁)、葡萄糖20克、蛋白胨5克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(8)：麦芽糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、碳酸钙1克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(9)：土豆200克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、酵母浸出液2克、硫酸镁2克、琼脂20克、水1000毫升。

配方(10)：麦芽糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁1克、