抗体APC荧光素标记操作流程记录学习资料

抗体A P C荧光素标记操作流程记录

1.目的

规范单克隆抗体标记荧光APC (快速标记法）标准操作程序

2.适用范围

适用于本公司抗体标记荧光APC (快速标记法）操作

3.术语和定义

别藻蓝蛋白（allophycocyanin ，APC ）由藻蓝胆素与蛋白质结合而成，APC具有荧光性，伴随着非常高的光吸收和高量子效率。

4.职责和权限

实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。

5.实验试剂.

5.1溶液配制

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5.2其他试剂

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6.操作流程

6.1抗体活化

将抗体用0.01mol/L PBS稀释为1mg/mL，加入 mL 活化液(体积比为抗体溶液：反应活化液=10:1），旋涡振荡器混匀后，室温避光反应10min。

6.2与APC反应形成共轭物

将抗体混合液（步骤6.1）加入mg APC荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时，反应开始时间：至结束时间：；（或2-8度条件下避光过夜）。

6.3荧光淬灭

向共轭物（步骤6.2）中加入mL 淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。淬灭开始时间：至结束时间：。

6.4层析

将共轭物（步骤6.3）层析柱分离，进一步去除游离的荧光素或抗体。

6.5保存

收集得到的标记抗体（步骤6.4），上机测试后根据效价，用Storage Buffer 按比例稀释后，4℃避光保存，有效期一年。

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