药理学系存档 - 半数致死量的测定
药物半数致死量(有效量)测定课件
给药途径的影响
给药途径对药物的吸收和分布有 直接影响，从而影响其毒性。
不同给药途径可能导致药物在体 内的浓度和作用时间不同，从而
影响LD50值。
例如，口服给药可能导致药物在 胃肠道内的吸收不完全，而注射 给药则可以迅速使药物进入血液
循环，产生不同的毒性效果。
动物种属和品系的影响
不同种属和品系的动物对药物的反应可能存在差异，因为它们的生理特征、代谢方式和敏感 性不同。
数据处理
对实验数据进行整理、统 计和分析，确保数据的准 确性和可靠性。
结果分析
根据实验数据进行分析和 解释，得出准确的结论， 为药物研发和安全性评估 提供科学依据。
报告撰写
按照规定的格式撰写实验 报告，包括实验目的、方 法、结果和结论等，保证 报告的准确性和完整性。
THANKS
感谢观看
药物安全性评价是药物研发过程中的重要环节，而药物半数 致死量(LD50)是评价药物安全性的重要指标之一。通过测定 药物的LD50值，可以了解药物对机体的毒性作用，从而为药 物的安全性评价提供依据。
在药物安全性评价中，除了LD50外，还需要考虑其他毒性指 标，如最大耐受量(MTD)、最小致死量(MLD)等，以全面评 估药物的安全性。
药物半数致死量(有效量)测定课件
contents
目录
• 药物半数致死量(LD50)的概念 • 药物半数致死量(LD50)的测定方法 • 药物半数致死量(LD50)的影响因素 • 药物半数致死量(LD50)的应用 • 药物半数致死量(LD50)测定中的注意事
项
01
药物半数致死量(LD50)的概念
LD50的定义
03
药物半数致死量(LD50)的影响 因素
药物半数致死量(LD50)的测定
一、基本程序
1.立题：科学性、先进性、可行性、实用性 2.建立假说：预期结果 3.设计：实验研究的计划和方案 4.实验准备、预实验及正式实验 5.结果分析处理及撰写论文
二、实验设计的三大要素
1.实验对象：选择要求 2.处理因素：主要因素、标准化、非处理因素 3.观察指标：选择原则（特异性、客观性、重
横标目
药物半数致死量(LD50) 和半数有效量（ED50）的测定
【实验目的】 1. 测定药物LD50 和ED50 的方法 2. 理解其药理学和毒理学意义。
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
LD1和ED99的比值，可靠性更高。பைடு நூலகம்
【实验步骤】
用改进寇氏法测定盐酸普鲁卡因的LD50
1. 40只小鼠，随机分成5组，称重编号 2. 按表剂量分别给药(i.p.普鲁卡因0.1ml/10g) 3. 观察30min内的中毒症状和死亡数 4. 列表，按公式计算LD50
用序贯法测定尼可刹米的LD50
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5 ~ ED95之间的距离，其值越大越安全。
可靠安全系数(certain safety factor)：
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1000 + +
20 2 6
700
-++
2012--药物半数致死量(有效量)测定
【实验方法与步骤】
预试：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax） 死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
➢ 本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
质反应量效关系曲线与 药物安全性的评价
质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标 绘图，形成一条对称的“S”形曲线。
半数有效量（ED50）：50％的实验动物有效时对应的剂量。 半数致死量（LD50）：50％的实验动物死亡时对应的剂量。
药物安全性的评价 治疗指数（TI）= LD50/ED50 安全系数（SF）＝ LD5/ED95 可靠安全系数（CSF）＝ LD1/ED99 三者数值大，说明药物安全性好。
如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度 可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。
Bliss法计算软件界面
Bliss法运算图形结果输出
Bliss法运算数据结果输出
【注意事项】
1. 本实验为定量药物效价测定，要求较高的 精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可 能的精确程度。
2. 为了减少误差，需严格控制除药物剂量外 的所有非处理因素，如最好由一人给药。
实验的观察指标：
ＬＤ50：规定的观察时间内记录动物的死亡 数为指标，记录并统计动物的死亡率。 ＥＤ50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠 的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位， 如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处 于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。
【实验试剂与器材】
小鼠罩 重量称 注射器（1.0ml）及针头 戊巴比妥钠 苦味酸（标记动物号用）
药物半数致死量(LD50)的测定
实验 药物半数致死量（LD50）的 测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
4. 实验结果的计算与表达 LD50=log－1（C/N）mg/kg
式中： C＝∑（R·logD） R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值； N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
教师：康白
药理学实验
一、实验目的： 二、注意事项：1.分组，组长负责，穿隔离衣，轮流操作； 2.预习指导做到心中有数，注意观察结果；3.节约药品动物， 爱护仪器，不要大声喧哗，结束后清点仪器，打扫卫生；4. 轮流值日，拿送动物。 三、实验设计：（P11）对照、随机、重复的原则。 四、报告的书写：目的、器材、方法、结果、讨论、结论 五、成绩分配：理论80%，实验20%（报告5%、设计5%、 实验测验10%）
LogD
实验结果
R
R·log D
药理学-半数致死量LD50测定
床应用的参考，是新药报批的必要要求。 3 为长期毒性实验选定靶器官提供
依据。
2020/7/28
半数致死量(Lethal Dose 50)
? 定义：某一药物使实验动物总体死亡一半所 需的药物剂量。
? 目的：是药物急性毒性试验的一部分，衡量 某一药物急性毒性的大小，用于计算药物的 治 疗指数，以初步评估药物的安全性。 治疗指数 =LD50/ED50 目前用于临床的药物，其治疗指数的值多 在10 以上。
半数致死量(LD50)的测定
药理教研室
药物毒性试验
? 定义：给予一定剂量的药物后，观察动物的 中毒症状与死亡率。
? 分类： 1 急性（一般72h） 2 亚急性（1-3月） 3 慢性（﹥3月） 4 特殊毒性（如遗传毒性，生殖毒性）
试验。
2020/7/28
药物毒性试验
? 目的： 1 揭示药物的毒性强度、选择性、
2020/7/28
半数致死量(LD50)
? 特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
? 测定药物的 LD50 ? 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
? 改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号 1-25，另一组小鼠编号 26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字 ,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼中，将标签牢
固贴于鼠尾 ,依次放入不锈钢鼠笼中。
药理学-半数致死量(LD50)测定
半数致死量(LD50)
特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
测定药物的LD50 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号1-25，另一组小鼠编号26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼20/7/28
实验结果
解磷定LD50的实验结果
组别
1# 2# 3# 4# 5#
小白鼠 浓度
(只) （mg/ml）
10
1.5％
10
1.2％
10
0.96％
10
0.77％
10
0.61％
剂量 (mg/kg)
300 240 192 154 123
对数剂量
2.48 2.38 2.28 2.18 2.08
动物死亡数 死亡率
(只)
(％)
注：动物死亡数只统计给药后2小时内的死亡数
2020/7/28
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液
药物半数致死量(LD50)的测定
对照原则
例二：家兔失血性休克及其抢救
空白对照组 单纯失血组 失血+抢救组 失血+右旋糖酐组 失血+NaHCO3组 失血+山莨菪碱组
两组比较证明休克 是由于失血引起。 两组比较证明休克 恢复是抢救的结果。
组间比较分析何种 抢救措施更好。
实验设计的三大原则
对照
医学科 学研究
随机 重复
随机分配：实验对象分配到各 组的机会均等。
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
▪掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） ▪熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
3.实验设计
医学科 学研究
实验设计也称为科研构思，是针对 题意为验证假说所形成的基本思路和设 想。要掌握三要素和三原则。
实验对象 处理因素 观察指标
对照原则 随机原则 重复原则
实验设计的三大要素
医学科 学研究
1.实验对象 (相似性、特殊性、标准化、
规格化、 经济性原则)
1)人 2)动物
①合适、经济。
②品种、纯度。
③年龄、性别、体重、健康状况。
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
常见的药物半数致死量(LD50)的测定1. 阿司匹林阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。
需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。
3. 地高辛地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。
在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。
在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。
因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。
同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。
当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯（利他林）哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。
需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
半数致死量_实验报告
一、实验目的1. 了解药物半数致死量（LD50）的定义及其在药理学中的意义。
2. 掌握LD50的测定方法及计算过程。
3. 通过实验，了解药物剂量与毒性反应之间的关系。
二、实验原理半数致死量（LD50）是指在特定条件下，能够引起实验动物一半死亡的药物剂量。
LD50是衡量药物毒性的重要指标，对于新药筛选、临床安全用药及药物不良反应的监测具有重要意义。
本实验采用寇氏法（Karber法）测定药物LD50。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠100只，体重18-22g，雌雄各半。
2. 实验药品：待测药物（如普鲁卡因）。
3. 实验器材：电子秤、注射器、灌胃针（16号）、注射器（0.25、1、2、5ml）、吸管（0.1、0.2、0.5、1、2、10ml）、容量瓶（10、25、50ml）、烧杯（10、25、50ml）、滴管、外科剪、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 实验动物的选择：选用初成年的小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验前对动物进行检疫，确保健康。
2. 剂量设计：根据预实验结果，将待测药物配制成不同浓度的溶液，设定4-5个剂量组，相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数（相邻两组对数剂量的差值）为1:0.6～0.9。
3. 实验分组：将小白鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。
4. 灌胃给药：按照预定剂量，用灌胃针将药物溶液灌胃给予小鼠，观察7天，记录不同剂量组小鼠的死亡情况。
5. 数据处理：计算每组小鼠的死亡率，根据寇氏法计算LD50。
五、实验结果1. 各剂量组小鼠的死亡率如下：剂量组 | 剂量（mg/kg） | 死亡率（%）-------|--------------|-----------1 | 0.06 | 202 | 0.12 | 403 | 0.24 | 604 | 0.48 | 805 | 0.96 | 1002. 根据寇氏法计算LD50：LD50 = 0.48 × 2 × (1 - 0.2) / (0.8 - 0.2) = 0.32 mg/kg六、实验讨论1. 本实验采用寇氏法测定药物LD50，结果表明待测药物的LD50为0.32 mg/kg，说明该药物具有一定的毒性。
机能学实验-药物半数致死量测定要点
2.82
7.18
6
2.76
7.24
7
2.71
7.29
8
2.67
7.33
9
2.63
7.37
10
2.60
7.40
12
2.54
7.46
15
2.47
7.53
18
2.41
7.59
20
2.38
7.62
24
2.32
7.68
25
2.31
7.69
30
2.26
7.74
40
2.17
7.83
50
2.10
7.90
LD50计算
1. 以对数剂量为x，相应的机率单位为y， 建立直线回归方程，求得a、b、r；
2. 根据50％动物死亡时机率单位为5 （ y ），FORECAST对数剂量x （logLic index, TI): LD50 / ED50. 两者平行时 用。
测定原理
量效反应线
机率单位 （Probit unit）
Y 5 x μ σ
死亡率在10％～90％之间的机率单位 简化公式：
Y 5 1.5 log( 0.029 P ) 1.029 P
P为死亡率。
【解】 0.025 kg × 110.8 mg/kg ＝ 2.77 mg 1％溶度是指 1g/100ml = 10mg /ml 2.77 mg需药液0.277ml。
结果汇总
组别 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡率 机率单位
(mg/kg)
X
Y
1 110.8 2.0445 10
2 147.7 2.1694 10
然后每个区内动物随机分组。这样就能保证 每个剂量药物组内动物体重均衡。 • 23，23，23，23，24，24，24，24，24，25， 25，25，25，25，25，25，26，26，27，27， 28，28，29，30，30，31，32，32，33，33
药物的半数致死量
（2）计算LD50的95%平均可信限的公式：
式中∑P2为各组死亡率平方和，n为各组动物数。
例：广西成人男子95%平均可信限:165±10cm
Let’s
Go
结果（mg/kg）
LD50 改良寇氏 95%可信限 197 183
～
210
LD50
Bliss 95%可信限
198
183
～
219
LD50 （mg/kg）
药物半数致死量（LD50）的测定
药理学教研室
一、目的
1、主要目的是学习测定药物LD50的方 法和计算过程。 2、通过学习，知道测定LD50的意义。
LD50 （mg/kg）
A B
ED50 （mg/kg） 0.01
5
TI
0.1
10
改良寇氏法— 四条件
剂量组≥4 相邻剂量组等比（r）
A B
ED50 （mg/kg） 0.01
5
TI
0.1
10
D2/D1=D3/D2=D4/D3=D5/D4=r
（4）、确定各组剂量
D1=145mg/Kg
D2=163mg/Kg
D3=184mg/Kg
D4=208mg/Kg
D5=235mg/Kg
、
如果腹腔注射普鲁卡因0.1ml/10g，需要
配制的浓度是？？
浓度=剂量/溶积 =235mg/Kg / 0.1ml/10g =0.235g/1000g /0.1ml/10g =2.35g/100ml
Pm=100%,Pn=0 n相同
实验对象： 小白鼠、体重18~22g, 雌雄各半
器械与药品： 小鼠笼、注射器、天平、计算器、普鲁卡因
药理实验半数致死量
第二节 半数致死量的测定方法
本例取第一点（1.49, 4.5）， 取第二点（1.88, 5.5）代入公式得：
s x2 x1 1.88 1.49 0.39 y2 y1 5.5 4.5
根据下面的公式求半数致死量对数值的标准误
s s lg LD50 N / 2
N´为概率单位4至6范围内（即死亡率为15.87% 至84.13%范围内）各组试验动物数。
第二节 半数致死量的测定方法
组别
1 2 3 4 5 6
剂量 ml/m3
40.000 47.156 55.592 65.538 77.262 91.085
动物数
30 30 30 30 30 30
死亡数
0 3 15 20 27 30
死亡率
0.000 0.100 0.500 0.667 0.900 1.000
d 2
k 1
( pi1
i 1
pi )
k
lg LD50 xk d( pi 0.5) i 1
x 其中： k — 为最大对数剂量 d — 相邻两组对数剂量之差，即相邻剂量比值的对数
如果p1不为0且小于20%，pk不等于1且大于80%时
k
lg LD50 xk d[( pi (3 p1 pk ) / 4] i 1
【例】 为了研究铵碘消毒剂对建鲤毒力的影响，随 机捞取210尾规格基本一致的鲤鱼，放入缸内，每缸 30尾，1组对照，6组处理。以等对数间距设置6个剂 量水平（单位： mL / ）m3分别为：40.000、47.156、 55.592、65.538、77.262、91.085，量取药液并加入缸 内，搅拌均匀，96 h后所得资料见下表。试求铵碘对 建鲤的半数致死量。
当毒物剂量较小时，动物具耐受性，随着毒 物剂量的增加，动物开始死亡，这时毒物的剂量 为最小致死量（minimum lethal dose：mLD）。
半数致死量的测定
半数致死量的测定实验一半数致死量的测定半数致死量（ LD 50 ）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此 LD 50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的 LD 50 值不相同。
测定 LD 50 的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。
由于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。
[ 目的 ] 用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的 LD 50 和 95 ％可信限。
[ 方法 ] 寇氏法（ K ?rbar氏法）[ 条件 ]1 剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。
2 各组动物数应相等。
3 “反应”应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（ P n ）应为 0% ，最大剂量组的死亡率（ P m ）应为 100% ；如果 P n <20% 或 P m >80% 需用校正公式计算；如 P n >20% 或 P m <80% 则不能用此法计算。
[ 步骤 ]1 预备实验（ 1 ）摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（ D m ）和一个动物也不死亡的最大剂量（ D n ）。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察 2~3 只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出 P m =100% 和 P n =0% 的剂量，此两量分别为上下限。
（ 2 ）确定组数，组距及各组剂量①组数：一般 5 ～ 8 组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定 5 组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
②组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“ d ”来表示。
D 不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多，各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。
组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。
半数致死量的测定
［结果］
［讨论］
［结论］
注意事项：
1、根据每次实验动物体重进行计算。 2、配制药液时要精确，尽量减少人为 因素对实验结果的影响。 3、给药后注意不要喧哗，刺激动物， 以免动物消耗过大死亡。
5组
6组 8组
5-6组
7-8组 9-10组
7-8组
9组 10组
9组
10组 -
-
-
14倍左右 6-7组 7组
8-9组
10组
-
-
-
-
查表n=6(分6组）
K＝0.85
三、配制等比稀释药液 1、一号药液浓度＝Dm/给药量 =0.01g/10g/0.2ml/10g=5% 2、每组药液量＝每组动物总数X小鼠平 均体重X给药量 ＝ 0.2ml/10g＊30g＊10＝6ml 3、一号药液需要量 ＝每组药液量／（1－K） ＝6ml／（1－0.85）＝40ml
药理学实验课
药理教研室
半数致死量（LD50）测定 [Bliss法]
[目的] 1.掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤 2.掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。 [原理] 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹 腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数 致死量。
[材料]
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 药物：25%尼克刹米、生理盐水 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼0.65
0.7
0.75
0.8
0.85
0.88
0.9
最高 和最 低致 死量 相差 的倍 数 (Dm/ Dn)
2倍左右 3倍左右 -
3-4组
4组
3-4组 4-5组
4组 5组
5-6组 6-8组
6-7组 9组
药理实验_半数致死量
如果 Pn<20% 或 Pm>80% 需用校正公式计算；
如 Pn>20% 或 Pm<80% 则不能用此法计算。
第二节 半数致死量的测定方法
【例】 为了研究铵碘消毒剂对建鲤毒力的影响， 随机捞取210尾规格基本一致的鲤鱼，放入缸内，每 缸30尾，1组对照，6组处理。以等对数间距设置6个 3 剂量水平（单位： ）分别为：40.000、47.156、 mL /m 55.592、65.538、77.262、91.085，量取药液并加入缸 内，搅拌均匀，96 h后所得资料见下表。试求铵碘对 建鲤的半数致死量。
1 l g( 1 . 7 6 8 80 . 1 1 3 1 )
即铵碘消毒剂对建鲤 L D 5 0 的95%置信区间为：
45 . 258 mL m ～ 76 . 190 mL m
3
3
第二节 半数致死量的测定方法
二、目测概率单位法 目测概率单位法是一种较为简单的计算方法， 其基本原理是将剂量改变成对数剂量，再将死亡 率（%）转换成“概率单位”，则剂量反应曲线 呈直线化，根据前述回归分析画出直线，再求 出 LD 50 。
其中：
— 为最大对数剂量 d — 相邻两组对数剂量之差，即相邻剂量比值的对数
xk
如果p1不为0且小于20%，pk不等于1且大于80% k 时
lg LD d [( p ( 3 p p ) / 4 ] 5 0x k i 1 k
i 1
第二节 半数致死量的测定方法
2. 求 lg LD50 的反对数得 LD 50 3. 求 lg LD50 的标准误
= 1.7688
第二节 半数致死量的测定方法
（2）求 lg LD50 的反对数得 L D 5 0
ld50半数致死量(小鼠)
2
3
4
5
【注意】
1、预试验要摸准药物引起0和100%死亡率剂量的所在范围。
2、正式试验时各剂量按等比级数分组，应避免最大剂量组的死亡小于80%，最小剂量组死亡率大于20%，否则改用其他方法计算。
3、室温：20℃为宜。
4、认真观察中毒症状情况。
LD50=lg-1[Xm-i（∑P-0.5）] (公式1)
Xm：最大剂量组剂量对数值
i：相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数(相邻两组对数剂量的差值)
P：各组动物死亡率，用小数表示（如果死亡率为80%应写成0.80）
∑P：各组动物死亡率之总和
n：每组动物数
Sx50= i×(公式2)
Sx50：logLD50的标准误
第一部分药理学实验
实验十三药物半数致死量（LD50））的测定
【目的】
掌握LD50测定方法及计算过程。
【原理】将一定浓度和一定体积的药物，按一定比例灌胃给予小鼠，观察7日，记录不同剂量小鼠的死亡情况，计算半数致死量，以确定药物急性毒性。
【器材】鼠笼、烧杯、1ml注射器等。
【药品】普鲁卡因溶液（5个剂量）
【动物】小鼠
【方法】
1.预试验模实验剂量范围，找出引起0～100%的估计致死量。
2.正式试验
（1）取小鼠50只，体重20±2g，♀♂各半，随机分为5组，10只/组。
（2）剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6～0.9，设4～5个剂量组。
（3）给药普鲁卡因溶液，ip。5个剂量组。
（4）统计按改良寇氏法公式进行计算。
X50=logLD50
LD50的95%可信限=log-1（X50±1.96Sx50）(公式3)
药物半数致死量测定
士的宁半数致死量（LD50）测定操作版【目的】1．掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤；2．掌握按改良寇氏法计算LD50的方法。
【原理】半数致死量是衡量药物毒性大小的重要标志，LD50表示能使全部实验动物半数死亡的剂量，是以动物死亡或存活作为质反应指标。
LD50与毒性呈负相关。
当剂量取对数值时，曲线呈近似两端对称的S型，对称点位于LD50。
LD50处斜率最大，灵敏度最高；曲线两端平坦，在1%或100% 附近灵敏度最差，剂量不易确定。
对称点附近量效关系呈直线关系，即该段范围内效应百分率／比与对数剂量呈正比关系。
（见右图）测定LD50的方法有多种，但以改良的寇氏法计算简便，结果较准确，比较常用。
对于毒性低的药物测不到LD50，则按最高可用的浓缩浓度、以最大给药容积给药，即最大给药量，如能导致实验动物死亡，可检测其最小致死量和最大耐图质反应量效关系曲线受量，否则即以最大给药量反映其安全性。
【材料】动物：小鼠，雌雄兼用，18～22g。
药品：士的宁溶液（0.125mg／mL）。
器材：鼠笼，JY4001电子秤，1.0mL注射器，试管，试管架。
【方法】1．预实验：取小鼠8～12只，分成4～5组，腹腔注射不同浓度的士的宁，摸索出可致小鼠大多数死亡的最小剂量（D m）及大多数小鼠不致死亡的剂量（D n）。
即找出引起0％到100％死亡率剂量的所在范围。
（参考剂量：D m为0.125mg／mL，0.1mL／10g）2．正式实验：以预实验所获得的D m和D n确定正式实验组数及组间剂量比（分5个剂量组，按1：0.8组间等比）。
每组取10只小鼠，雌雄各半，随机分为5组。
药液按等比稀释，腹腔注射，给药容量都为0.1mL ／10g。
给药后观察30分钟。
（正式实验观察7～14天，并设阴性对照组）3．汇总实验结果，计算士的宁LD50及其95％可信限。
【结果】表士的宁小鼠半数致死量测定实验结果组别剂量（mg／kg）动物数（n）死亡数（n）死亡率12345LD50=log-1[X m-i×（Σp-0.5）]LD50的95％可信限=log-1（X50±1.96S X50）LD50的平均可信限=LD50±（LD50的95%可信限的高限-低限）／2S X50=i×[（Σp-Σp2）／（n-1）]1／2注：【计算中通常以“10”为底】X m为最大剂量组的对数值，i为相邻两剂量比值的对数（高剂量组作分子）；p为各组死亡率，Σp为各组死亡率总和；X50为lgLD50，S X50为X50（lgLD50）的标准误差。
药物半数致死量的测定
药物半数致死量的测定普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定【实验目的】了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应(ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】(一)预备实验1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
药物半数致死量_LD50的测定
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
【实验材料】 • 实验动物：小白鼠，体重18～２２g，实验 前禁食12h,不禁水。 • 实验器材：电子秤、注射器。 • 实验药品：盐酸普＝lg-1 [Xm－i(Σp－0.5)]
不含0%及100%死亡率的LD50＝lg-1 [Xm－i(Σp－ 0.5)]+i/4（1-Pm-Pn） 改良寇氏法公式要求： Dm组，死亡率≥80% Dn组，死亡率≤20%，等比式数为0.7～0.85 结果允许轻微倒置，当不能相差太大。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物毒性大小的指 标?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
• Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分
组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，
是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，
故现多采用计算机程序计算。
• 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评
定必须采用的方法。
• 时间关系，选择孙瑞元的点斜计算法。
表1 盐酸普鲁卡因LD50测定结果记录表 组 别
1 2 3 4
剂量（mg/ml） Log D D X
124 145 171 200
动物数(只) 死亡数（只） N F
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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正式实验
1．分组编号:取小鼠50只，随机（如何做？）分成5组，每组10只，♀♂各 半。 2．计算给药：由腹腔注射给药。（四分法） 3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列下表：
结果记录表
组别
1 2 3 4 5
剂量 （mg/10g）
动物数 （只）
10 10 10 10 10
死亡数 （只）
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=240mg/kg， Dn=98.3mg/kg，算出r=0.8。
C母
D 等容注射量
C1=240mg/kg / 20ml/kg=12mg/ml（百分浓度？）
1号液
2号液
3号液
4号液
5号液
4ml
1号
4ml
2号
4ml
3号
4ml
4号
4ml
5号
【实验步骤】
15. 动物急性毒性试验资料及文献资料。
16. 动物长期毒性试验资料及文献资料。 17. 致突变试验资料及文献资料。 18. 致癌试验资料及文献资料Leabharlann 19. 生殖毒性试验资料及文献资料。
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:
盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生全身
性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制，初期表现
死亡率 （ %）
小鼠的腹腔注射方法
抓好后将小鼠保持头低位
4.实验观察30min后进行数据统计 5.计算LD50及其95%可信限 采用改良寇氏法计算各参数步骤：
【注意事项】
给药剂量准确
小鼠腹腔注射
分组（5组），给药从中间剂量给药
【思考题】
1. LD50和ED50定义？ 2.治疗指数的意义?
【实验材料】
实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各 半，实验前禁食12h,不禁水。
实验器材：电子秤、注射器、小鼠笼。 实验药品：盐酸普鲁卡因
（Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，Dn）。
半数致死量(LD50)（ Lethal Dose， 50%）的测定
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验
长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验：1～7d
半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起
试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表
示。
测定LD50意义
TI=LD50/ED50
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
新药审批办法规定：
三、药理资料 13. 与功能主治有关的主要药效学试验资料及文献资料。 14. 一般药理研究的试验资料及文献资料。
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
2．确定组数、计算各组剂量：
组数（n）：5组
1 D n 1 m r Dn 按公比求各组剂量：D1，D2，…,Dn，其中D1= Dm=最大剂量、
按公式求公比r:
D2= D1·r ,…，Dn= Dn-1·r, Dn 最小剂量 3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.2ml/10g， 按下列公式计算浓度：
为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经错乱、惊厥、昏
迷、呼吸抑制等。
患者可因呼吸衰竭而死亡。
LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法 等。
实验部分
【实验目的】
1.掌握采用改良寇氏法测定LD50的方法、计算过 程。
2.了解LD50、ED50及治疗指数的意义。