轮状病毒感染的实验室检查
轮状病毒感染的实验室检查
2011-04-24 20:51:30 作者：佚名来源：本站整理
一、便常规检测：
粪便性状：大便呈水样或稀米汤样，无脓血
便常规镜检：正常或偶见少量WBC
二、病原学检查
1 免疫电镜直接观察病毒颗粒：病毒在电子显微镜下观察呈圆球状，中间的壳体像车轮的辐条一样
一、便常规检测：
粪便性状：大便呈水样或稀米汤样，无脓血
便常规镜检：正常或偶见少量WBC
二、病原学检查
1 免疫电镜直接观察病毒颗粒：病毒在电子显微镜下观察呈圆球状，中间的壳体像车轮的辐条一样呈向外放射状排列，外边的壳体类似车轮的外缘，形态极像车轮。简便、快捷、特异性好、灵敏度高，设备昂贵，无法普及。
2 分离培养技术：灵敏度低、需特殊条件培养。
3 免疫学检测技术—检测病人粪便中轮状病毒抗原：廉价、简便、特异性高，灵敏度高。
4 基因检测技术： RNA电泳法、分子探针技术、PCR技术
5 其他技术：基因芯片技术
猪轮状病毒感染研究进展
猪轮状病毒感染研究进展 丁玉春1魏文栋2 郑缨2 (1、重庆市种猪场,重庆荣昌 402460 2、重庆市畜牧科学院,重庆荣昌 402460 ) 猪轮状病毒感染是由猪轮状病毒（Porcine Rotavirus，PRV)引起的一种传染病，也称胃肠炎。此病多发于仔猪。主要表现为厌食、呕吐、腹泻、脱水等症状。育成猪和成年猪通常为隐性感染[1～2]。 Woode和Bridge1975年首次从猪中分离出轮状病毒，目前本病已广泛分布于五大洲,并引起严重经济损失[3]。以英国为例，1～4周龄仔猪群发病率超过80%，死亡率7%～20%[4]。我国兽医工作者也从仔猪的腹泻粪便中检出RV。 1 病原学 猪轮状病毒（RV）属于呼肠弧病毒科轮状病毒属的A、B、C、E 群[4]。成熟完整的病毒粒子略呈圆形，没有囊膜，具有双层表壳，直径为65～75nm的二十面体对称。电镜观察，病毒的中央为一个电子致密的六角形棱心，直径37～40nm，即芯髓；周围有一电子透明层，壳粒由此向外呈辐射状排列，构成中间层衣壳；外周为一层光滑薄膜构成的外层衣壳，厚约20nm，形成一个轮状结构，RV由此而得名[5]。在感染的粪样和细胞培养物中均存在两种形式的病毒粒子：具有双层表壳的光滑型（S型）双层颗粒，有感染性，直径为75nm；没有外表壳的粗糙型（R型）单壳颗粒，无感染性，直径为65nm。 有关RV的超微结构，学者们的意见尚不一致，Martin等（1975年）认为RV与环状病毒一样，也有32个大的环形壳粒，且其180个三联亚单位按T=9的、方式组成20个三角面体。每个三联亚单位包含3个结构单位，所以一共有540个结构单位。但据Esparza（1978年）报道，RV表面有162个孔，由320个三联亚单位按T=9方式组成20个三角面体。因每个三联亚单位包含三个结构单位，所以一共有960个结构单位。出现上述不同的观察结果，也许是标本制作方法不同的缘故。Stannard氏等（1977年）对乳鼠流行性腹泻轮状病毒和猴RVSA11株进行了细致的电子显微镜观察，发现其内衣壳有180个形态亚单位，排列成晶格状。12个顶各为一个空隙，由5个壳粒围绕，另外80个空隙各由6个壳粒围绕。外衣壳由蜂窝样的晶格组成，且与内衣壳的晶格排列相符[4]。 1.1 分子生物学特性 通过X-射线晶体结构研究发现，完整的病毒粒子具有复杂的结构。最外层核衣壳由
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断 病毒感染的实验诊断（一） ●考点 病毒的生物学性状 病毒的实验室检查方法 常见病毒的感染 [讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问] 【内容讲解】 第一节概述 一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。 仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。 病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。 在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。 [讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问] 一、病毒的基本性状 （一）形态结构 1.大小和形状： 大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。 形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。 [讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问] 2.结构 [讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问] （二）病毒的增殖 病毒必须依赖宿主细胞，
以特殊的自我复制方式进行增殖。 病毒的复制周期： 吸附、穿入、脱壳、生物合成、 组装与成熟、释放6个阶段。 [讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问] 异常增殖： 顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。 缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。 干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种 [讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问] （三）噬菌体 以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。 噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。 噬菌体感染细菌后产生两种后果： 溶菌周期和溶源性周期。
小儿轮状病毒感染症状及护理+(2) (1)
轮状病毒腹泻患儿的护理研究进展 目的：“探讨轮状病毒腹泻患儿的护理研究进展”。方法：通过文献检索的方法，总结和归纳轮状病毒腹泻患儿护理的研究进展。结果：通过对患儿的观察护理，在纠正水、电解质紊乱治疗基础上，施加临床观察、静脉补液、对症护理、感染控制、皮肤护理、饮食护理、健康教育等护理干预措施。结论：良好的护理可以有效的改善患儿的临床症状，预防并发症，缩短治疗所需要的时间，提高总体治疗效果。 关键词：轮状病毒，临床表现，并发症，护理。 临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，病程一般为7天，发热持续3天，呕吐2～3天，腹泻5天，严重出现脱水症状。常见并发症有：胃肠出血、酸中毒，心肌损害，过敏性紫癜、Reye综合征、脑炎、溶血性尿毒症综合征、DIC等。主要集中在呼吸系统、心血管系统和中枢神经系统，少数后果严重并可造成死亡。现对轮状病毒腹泻患儿的护理进展综述如下。 1.轮状病毒腹泻的特点 1.1 引起小儿腹泻的病原菌 引起小儿腹泻的病原菌有以下几类：内源性肠道条件致病菌、外源性肠道病原菌、轮状病毒 1.2 轮状病毒的发病率调查 杨慧波等调查57例腹泻患儿结果表明，6个月至12个月内婴儿，轮状病毒性肠炎发病率最高为86%。10月-12月为高发期[1]，每年全球大约有90万婴幼儿死于轮状病毒感染[2]。 1.3 轮状病毒的流行季节 中国RV腹泻以秋冬季为流行高峰,主要流行时间从10月～次年2月. 1.4 轮状病毒感染后症状 轮状病毒感染从无症状、轻微发病到严重发病，严重时发生致命性胃肠炎、脱水及电解质平衡失调。轮状病毒胃肠炎的症状包括发烧、呕吐、腹痛以及无血色水样腹泻，症状可持续3～9天。感染途径为粪－口途径[3]。 人体感染轮状病毒后，病毒在3－5日后才最活跃，因此患者初发症状未必是腹泻，可
感染性疾病实验室诊断技术及其研究进展_龙海燕
DOI ：10.7507/1002-0179.20150280作者简介：龙海燕（1989－），女，重庆人，在读硕士，E m a i l ：longhaiyan1989@https://www.360docs.net/doc/b95007010.html, 通讯作者：冯萍，Email: fengp_62@https://www.360docs.net/doc/b95007010.html, 网络出版时间：2015-05-14 15:16网络出版地址：https://www.360docs.net/doc/b95007010.html,/kcms/detail/51.1356.R.20150514.1516.022.html 感染性疾病实验室诊断技术及其研究进展 龙海燕，冯萍 四川大学华西医院感染性疾病中心（成都 610041） 【摘要】 目前全球感染性疾病现状严峻，应用于感染性疾病诊断的实验室技术种类繁多，为了解感染性疾病实验室诊断技术及其最新进展，帮助临床工作者早期、快速、准确地诊断感染性疾病，降低感染性疾病暴发的危险性，及时启动感染性疾病的正确治疗等，现从病原学检测、免疫学技术、分子生物学技术、生物传感器、流式细胞术这几个方面对感染性疾病诊断技术进行综述。 【关键词】 感染性疾病；免疫学；分子生物学；生物传感器；流式细胞术 目前全球感染性疾病现状严峻，很多经典疾病卷土重来或出现了新特点，如新变异型克-雅病、重症急性呼吸综合征（SARS ）、新型冠状病毒感染、H7N9禽流感等。以前从未认识到的感染性疾病正在持续不断出现，包括人类免疫缺陷病毒（HIV ）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重或广谱耐药的结核分枝杆菌、霍乱弧菌和登革热病毒所致疾病等[1]。从不断新发和再发的感染性疾病中可以看出，感染性疾病仍然给人类的生存带来了巨大的挑战，因此对感染性疾病的诊断技术提出了更高的要求。本文就现有的感染性疾病实验室诊断技术和最新研究进展进行综述，为临床工作者对感染性疾病的诊治 提供参考。 1 病原学检测 传统的病原微生 物实验室诊断技术以分离、培养、染色、生物化学鉴定为主，目前仍是许多病原体检测的“金标准”。传统人工病原学检测方法操作复杂、检测周期长（2～5 d ），干扰因素多，敏感性与特异性也有限。为了缩短传统细菌“鉴定”时间，微生物鉴定自动化技术也应运而生，如V i tek 系统、Mi c roScan 系统、Phoenix 系统、Mini API 系统等。自动化微生物鉴定系统是根据微生物代谢特点，如细菌分解底物后反应液中pH 值的变化，色原性或荧光原性底物的酶解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌，鉴定时间约15～24 h 。Crowley 等[2]采用Vitek2自动化微生物鉴定系统和 Vitek2革兰染色阴性鉴定识别卡对707例G ?菌株进行鉴定，准确率98%，10 h 内可以出结果。此类鉴定系统大大缩短了检测时间，降低了劳动强度，为疾病的确诊争取了宝贵时间。 2 免疫学检测 免疫学技术是通过检测病原微生物的抗原或抗体来进行快速鉴定的技术。该方法简化了病原微生物的鉴定步骤，因此广泛应用于临床。感染性疾病传统的免疫学技术包括凝集反应、沉淀反应、中和反应等，如临床上常用的肥达反应、免疫固定电泳、抗链球菌溶血素O 试验等。近二十几年来，免疫学分析方法 发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，灵敏度和特异度显著提高。目前常用的标志物有放射性同位素、酶、荧光素、电子致密物、化学发光物质、DNA 等。 放射免疫沉淀实验是敏感性很高的免疫标记技术，精确度高且易标准化和自动化，但由于放射性同位素有一定的危害性，其临床应用受到一定限制。酶联免疫吸附试验（ELISA ）是目前免疫酶技术中应用最广泛的，由此发展出了阵列-ELISA （array-ELISA ），同时具备简便、高通量、快捷等特点[3]。时间 分辨荧光免疫分析及上转换发光免疫分析技术拥有灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染、多标记等优点[4-6]。胶体金免疫层析技术操作简单、成本低、结果判读直观快速，虽然只能定性，但可用于基层单位，可进行现场诊断或大规模检测等[7]。免疫-聚合酶链反应（PCR ）是1992年Sano 等[8]建立的一种检测微量蛋白的免疫标记技术。它是用一段已知的DNA 分子来标记特定的检测抗体作为探针，然后用此探针与待检抗原结合反应，再通过 PCR 方法扩增吸附在抗原抗体复合物上的这段标记 ?综述?
第五节 病毒病的实验室诊断方法.
第二章病毒 第五节病毒病的实验室诊断方法 畜禽病毒性传染病是危害最严重的一类疫病，给畜牧业带来的经济损失最大。除少数如绵羊痘等可根据临床症状、流行病学、病变作出诊断外，大多数病毒性传染病的确诊，必须在临床诊断的基础上进行实验室诊断，以确定病毒的存在或检出特异性抗体。病毒病的实验室诊断和细菌病的实验室诊断一样，都需要在正确采集病料的基础上进行，常用的诊断方法有：包涵体检查、病毒的分离培养、病毒的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。 一、病料的采集、保存和运送 病毒病病料采集的原则、方法以及保存运送的方法与细菌病病料的采集、保存和运送方法基本是一致的，不同的是病毒材料的保存除可冷冻外，还可放在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存，液体病料采集后可直接加入一定量的青、链霉素或其他抗生素以防细菌和霉菌的污染。 二、包涵体检查 有些病毒能在易感细胞中形成包涵体。将被检材料直接制成涂片、组织切片或冰冻切片，经特殊染色后，用普通光学显微镜检查。这种方法对能形成包涵体的病毒性传染病，具有重要的诊断意义。但包涵体的形成有个过程，出现率也不是100%，所以，在包涵体检查时应注意。（能出现包涵体的重要畜禽病毒见表2-3） 表2-3 能产生包涵体的畜禽常见病毒 病毒名称感染范围包涵体类型及部位 痘病毒类 狂犬病病毒 伪狂犬病病毒 副流感病毒III型 马鼻肺炎病毒 鸡新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒人、马、牛、羊、猪、鸡等 狼、马、牛、猪、人、猫、羊、 禽等 犬、猫、猪、牛、羊等 牛、马、人 马属动物 鸡 鸡 嗜酸性，胞浆内，见于皮肤的棘层细胞中 嗜酸性，胞浆内，见于神经原内及视网膜的神经节 层的细胞中 嗜酸性，核内，见于脑、脊椎旁神经节的神经原中 嗜酸性，胞浆及胞核内均有，见于支气管炎、肺泡 上皮细胞及肺的间隔细胞中 嗜酸性，核内，见于支气管及肺泡上皮细胞、肺间 隔细胞、肝细胞、淋巴结的网状细胞等 嗜酸性，胞浆内，见于支气管上皮细胞中 嗜酸性，核内，见于上呼吸道的上皮细胞中 三、病毒的分离培养 将采集的病料接种动物、禽胚或组织细胞，可进行病毒的分离培养。供接种或培养的病料应作除菌处理。除菌方法有滤器除菌、高速离心除菌和用抗生素处理三种。如用口蹄疫的水疱皮病料进行病毒分离培养时，将送检的水疱皮置平皿内，以灭菌的pH7.6磷酸盐缓冲液洗涤数次，并用灭菌滤纸吸干、称重，剪碎、研磨制成1∶5悬液，为防止细菌污染，每毫升加青霉素1000IU，链霉素1000μg，置2～4℃冰箱内4～6h，然后用8000～10000r/min速度离心沉淀30min，
感染性疾病检查
感染性疾病检查 感染性疾病是由病原微生物（细菌、病毒、真菌、支原体、立克次体、螺旋体）和寄生虫（原虫或蠕虫）感染人体后产生的疾病。实验室检查对感染性疾病的诊断具有特殊的意义。病原学检查包括病原体直接检出和病原体分离培养，可直接确定诊断。而免疫学检查抗原或抗体亦可提供重要依据。荧光定量PCR 检测快速、特异、灵敏，被用于感染性疾病的早期快速诊断。 第一节感染性疾病一般检测 一、白细胞常规检查 白细胞总数显著增多常见于化脓性感染（尤其是革兰阳性球菌），如流行性脑脊髓膜炎、败血症和猩红热等；某些病毒感染（如传染性单核细胞增多症）。革兰阴性杆菌感染时白细胞升高不明显甚至减低，如布鲁菌病、伤寒及副伤寒等。病毒咸染时白细胞通常减少或正常，如流行性感冒、登革热和病毒性肝炎等。蠕虫感染时嗜酸粒细胞通常增多，如钩虫、血吸虫、肺吸虫等。 二、血清C反应蛋白检验测定 【参考区间】成人和儿童：0~8. 0mg/L. 【临床意义】C反应蛋白（CRP) 是一种能与肺炎链球菌C多糖体反应的急性时相反应蛋白，由肝细胞合成，是一种经典的、灵敏的、急性时相蛋白，此反应不受放射治疗、化学治疗、皮质激素治疗影响。 （1) CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死、手术创伤、器官移植排斥、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，峰值可达500mg/L.病变好转时，又迅速降至正常。其升高幅度与疾病的程度呈正相关。 （2) 细菌和非细菌感染（病毒、支原体等）的鉴别诊断：细菌感染发生炎症后6~8小时CRP即可明显上升，CRP升高与感染的程度呈正相关。非细菌感染（病毒、支原体等）大多正常。 （3) 鉴别风湿活动期和稳定期：风湿活动期CRP含量可高达200mg/L.病情好转逐渐下降到正常，稳定期不升高。 （4) 鉴别器质性与功能性疾病：前者升高，后者不升高。 （5) CRP测定有助于孕妇并发感染的观察，对羊膜破裂早产并伴有绒毛膜炎的孕妇，CRP测定具有准确和早期预报作用。 （6) 恶性肿瘤患者CRP大都升高，如CRP与 AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。 三、降钙素原测定 【参考区间】健康人群小于100ng/L. 【临床意义】降钙素原（PCT) 是一种糖蛋白，是降钙素（CT) 的前肽，在正常
轮状病毒
A群轮状病毒 轮状病毒（RV）属于呼肠病毒科、轮状病毒属。1975年由国际病毒分类委员会（ICTV）正式命名。根据病毒的基因结构和抗原性将其分为A---G 7个群，其中A 群轮状病毒的感染最常见，主要引起婴幼儿腹泻。B群轮状病毒仅在成人中暴发流行。D—G群只引起动物腹泻。在我国，0～2岁以内的婴幼儿人数约为4000万人（含新生儿），每年大约有1000万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎，占婴幼儿人数的1/4。轮状病毒有明显的季节性，秋冬交接时期多发，故又称“秋季腹泻”。主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。 1、传播方式 主要经粪—口传播，亦可通过水源传播或呼吸道传播。新生儿轮状病毒感染主要来源于孕产妇感染、产道感染及医院内感染。医院里可通过护理人员造成轮状病毒感染的传播。 2、潜伏期 A群轮状病毒腹泻潜伏期一般在3天左右。 3、临床表现 主要引起婴幼儿腹泻。病情进一步发展可导致脱水及酸中毒，严重时危及生命。先发热，伴呕吐和腹痛，随即频繁腹泻，每日十数次．粪便特点：白色米汤样便或黄绿色蛋花样稀水便，有恶臭，不含血，无或少量黏液。婴幼儿腹泻病程一般为7天。当婴幼儿免疫力低下时，急性胃肠炎可变为慢性，患儿粪便中长期排出病毒，而成为本病的传染源。A群轮状病毒感染还可致新生儿坏死性小肠炎、婴幼儿肠套叠、肺炎、脑炎、脑膜炎等。 感染A群轮状病毒会有这样的经过：第一次感染通常会产生症状，但是再次感染时通常无症状，因为免疫系统提供了部分的保护机制。所以，感染症状发生比例最高的是两岁以下的儿童。虽然新生儿感染的机会很常见，但是通常都是症状较轻，症状最重的会发生在出生六个月到两岁的小孩，以及发生在有免疫缺陷的小孩身上。由于从童年获得的免疫力，大部分的成人对于轮状病毒并不易感；成人发生的肠胃炎通常是因为其他病因而非轮状病毒，但是成人的无症状感染会成为传染源。
第四章实验室检查习题知识分享
第四章实验室检查习题 一．选择题 【A1型】 *1．严重细菌感染时不应出现 A白细胞总数增高B中性粒细胞增高C核左移 D酸性粒细胞增高E中性细胞出现中毒颗粒 2．可能导致中性粒细胞减少的疾病是 A急性病毒感染B急性溶血C急性中毒D急性失血E心肌梗死 **3．中性粒细胞核左移是指 A分叶核在2叶以上的细胞＞0.03 B分叶核在3叶以上的细胞＞0.03 C分叶核在4叶以上的细胞＞0.03 D分叶核在5叶以上的细胞＞0.03 E杆状核粒细胞≥0.05 4．嗜酸性粒细胞增多不应出现于 A支气管哮喘B急性支气管炎C钩虫病D皮肤湿疹E药物过敏 5．对缺铁性贫血认识正确的是 A红细胞↓=血红蛋白↓B红细胞↓＜血红蛋白↓C红细胞↓＞血红蛋白↓ D为大红细胞性贫血E以上都不对 6．下列哪种细菌感染WBC计数减低 A肺炎球菌B链球菌C葡萄球菌D大肠杆菌E伤寒杆菌 7．促使血沉增快的物质是 A清蛋白B胆固醇C血小板D纤维蛋白原E凝血酶原 **8．血沉增快不应出现于 A严重脱水B严重贫血C结核病D风湿病E恶性肿瘤 **9．出血时间延长不应出现于 A血小板减少症B过敏性紫癜C再生障碍性贫血D血小板无力症E血管异常 **10．可致血小板增高的病因是 A急性失血与溶血B再生障碍性贫血C白血病D放射病E淋巴瘤 11．镜下血尿是指尿沉渣红细胞数 A平均＞1个/HP B平均＞2个/HP C平均＞3个/HP D平均＞4个/HP E平均＞5个/HP 12．蛋白尿时蛋白定量试验为 A＞5mg/24h B＞15mg/24h C＞50mg/24h D＞150mg/24h E＞250mg/24h 13．下列疾病可出现蛋白尿，除了 A急性肝炎B急性肾小球肾炎C肾病综合征D妊娠中毒症E慢性肾炎 **14．尿常规检查不正常的是 A尿量1500ml/24h B尿比重波动于1.010±0.003/24h C外观清晰透明 D尿色微黄E尿沉渣见少量扁平上皮细胞
抗生素相关性腹泻的发病机制
文章编号：!""#$%&’(（)""*）"’$"%&’$")【综述】抗生素相关性腹泻的发病机制 周雪艳 （浙江省台州医院，浙江临海%!&"""） 抗生素相关性腹泻（+,-./.0-.1$23301.2-455.266742，++8）是由于因抗生素治疗而引起的一种常见副作用，约有%"9! #"9的病人在抗生素治疗期间或治疗停止后的)个月发生过腹泻［!］。几乎所有的抗生素都能引起腹泻，特别是抗厌氧菌类药物，氨苄西林，氨苄西林$克拉维酸，头孢菌素类和克林霉素等是引起腹泻的常见药物。++8发生的频率及其严重性，除与使用的抗生素种类有关外，与肠道感染的病原体和宿主的免疫抵抗力亦有关［)］。 !++8的机制 人体正常情况下每克粪便含有!"!!个细菌，种类达#""种之多，称为正常菌群。这些微生物的生态平衡对稳定肠道的正常功能，有效地排出外源性微生物的侵袭至关重要。由于抗生素的大量或不适当的使用，扰乱了肠道的生态平衡而引起腹泻。 !:!大肠糖类代谢的异常肠内正常微生物不仅能合成多种维生素，而且还参与碳水化合物的代谢。正常人每天约有&"克糖类到达肠腔，虽然大肠本身不能吸收糖类，但大肠中的细菌能够分解糖类。广谱抗生素使用后不仅可以使肠道内正常菌群减少，而且还导致细菌对糖类代谢降低致使吸收不良，肠腔中的有机酸、阳离子和糖类的聚集而导致渗透性腹泻和大肠功能的紊乱。轻症仅有腹泻，肠黏膜的变化不明显，称为++8；重症腹泻伴有全身症状，肠道出现特征性病理改变，如灶性肠假膜形成，称为抗生素相关性假膜性结肠炎（;34<$ 50=4=/62,0<310>.-.3）［*，’，&］。 !:)胆汁酸代谢的异常在小肠中未被吸收完全的初级胆酸可以在大肠内被细菌分解去羟基后变成次级胆酸。双羟基胆酸如初级胆酸的鹅氧胆酸及次级胆酸的脱氧胆酸为强烈的大肠分泌刺激物。由于大量抗生素的应用，使具有去羟基作用的细菌数量减少，特别是具有&"$去羟基功能的细菌数量很低时（!"%!!"#?@A／克湿便），致使鹅脱氧胆酸的浓度增加，常继发分泌性腹泻［*，#］。 !:%抗生素的直接作用某些抗生素如红霉素是胃动素受体的激动剂，而胃动素为胃肠肽，可以刺激胃窦和十二指肠收缩，引起肠蠕动改变，导致腹泻、肠痉挛和呕吐。 )++8的常见病原体 ):!艰难梭菌的感染艰难梭菌（!"#$%&’(’)*+(’,,’-".）由于对氧甚为敏感，很难分离培养而得名。因该菌能引起人的假膜性结肠炎，是造成++8发生的肠道主要病原体，也是目前医院感染的重要致病菌。正常的肠道菌群能有效地抑制艰难梭菌的繁殖，而抗生素能改变肠道菌群和氨基酸的量，导致肠道感染艰难梭菌。艰难梭菌的致病菌株能产生)种毒素：一种是肠毒素，即毒素+；另一种是细胞毒素，即毒素B。毒素+通过改变细胞内的肌动蛋白而直接作用于结肠细胞，黏膜固有层上皮细胞，巨噬细胞，神经免疫细胞释放的细胞因子也有助于结肠黏膜损伤及毒素+介导的炎症反应。毒素B可使肠细胞发生明显的细胞凋亡，出现细胞内染色质浓缩。艰难梭菌与索氏梭菌有交叉抗原，能被其毒素中和，直接损伤肠壁细胞，造成假膜性结肠炎，临床表现为腹痛，腹泻，并伴有全身中毒性症状。与艰难梭菌相关的临床疾病还包括无症状感染，无结肠炎的腹泻，并发或非并发结肠炎的非假膜性结肠炎［%，*］。 【收稿日期】)""*$")$)#):)非艰难梭菌的感染产气荚膜梭菌（!"#$%&’(’)*/.&0 ,&’*1.2$$）广泛分布于自然界以及人和动物的肠中。医院内的非食物中毒的产气荚膜梭菌肠道感染多见于经抗生素治疗的老年患者。B066.4>>0等报道!!例++8患者的粪便中检测到产气荚膜梭菌及其毒素，其中有!"例患者在腹泻发生的前%周接受过抗生素治疗［#］。 金黄色葡萄球菌可以引起抗生素相关性假膜性结肠炎，C180,2>5曾报道!"例抗生素治疗后的腹泻患者，在粪便中检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（C;D+），但未能检测出艰难梭菌及其毒素［*］。其中E例患者接受过杆菌肽和万古霉素治疗后，有F例患者粪便中的C;D+被清除，腹泻也随之缓解。 念珠菌可以引起++8，典型症状有腹痛，肠痉挛和直肠刺激症状，其主要机制是抑制乳糖酶而导致对乳糖的不耐受性。据报道，)*例艰难梭菌阴性的++8患者，有&例患者的粪便中念珠菌的增殖量大于!"#?@A／=>，当中断抗生素治疗后，念珠菌的量下降到!"*?@A／G，后经制霉素治疗好转并痊愈［*，#］。 %++8的诊断 正确的诊断出引起++8的原因并及时采取治疗措施非常重要，首要的是鉴别艰难梭菌感染还是非艰难梭菌的感染。艰难梭菌感染引起的++8也称之为艰难梭菌相关性腹泻（?:5.H H.1.>4$23301.2-455.266742，?8+8），常见临床表现为血中白细胞数增加，低白蛋白血症，大便中有白细胞，组织学检查可发现结肠内有假膜等特征。虽然腹部3线照片、?I和内窥镜检查对诊断艰难梭菌的感染有帮助，但无特异性且不敏感［F］。 单独粪便培养不足以诊断?8+8，因为巧合的携带或该艰难梭菌没有致病性而出现假阳性结果。一直以来组织培养实验仍然是诊断?8+8的“金标准”，但一般实验室不具备组织培养的条件，而且不能在)*!*F7报告结果。目前许多实验室采用酶联免疫吸附法测定毒素+或毒素B，有很好的特异性，但敏感性不如组织培养，粪便中的毒素+或毒素B的浓度必须在!""!!"""J G时，此试验才呈阳性反应，因此有!"9!)"9的假阴性。不同的实验室K L+检测的敏感性有很大的差异，因此K L+阴性并不能排出?8+8的可能性。80,$ ,?0,,06等报道，从!%%例腹泻病人收集)""份粪便标本，采用快速免疫法测定细胞毒素，结果表明，艰难梭菌的感染%#人，占)&9，同时与培养法比较，特异性为E E9，敏感性为E F9［F!!"］。 由于粪便中的酶对毒素有很强的破坏性，采取的粪便标本须及时送达实验室并立即检测，必要时置于冰冻保存，但能降低毒素的效价。 患者有严重腹泻并伴有念珠菌的存在，当粪便中的念珠菌数量!!"#?@A／=>时，可以诊断为念珠菌相关性腹泻。 患者有严重腹泻，但艰难梭菌毒素试验为阴性，又无念珠菌的过度增长时，应考虑其他细菌的感染，如金黄色葡萄球菌，产气荚膜梭菌，沙门菌和克雷伯菌等。 结肠镜检对艰难梭菌阴性的严重++8病人有帮助，有些典型病变如假膜性结肠炎，节段性出血性结肠炎和其他溃疡性结肠炎等可以在镜下发现。 下表是艰难梭菌感染与非艰难梭菌感染引起++8的主要特征性差异［!］。 ’ & %?7.,434M0<6,2>0HC.160410>0G N，8414=/46)""*，O0>:!’P0:’万方数据
第四节 细菌病的实验室诊断方法
第一篇微生物的基本知识 第一章细菌 第四节细菌病的实验室诊断方法 细菌是自然界广泛存在的一种微生物，细菌性传染病占动物传染病的50%左右，细菌病的发生给畜牧业带来了极大的经济损失。因此在动物生产过程中，必须做好细菌病的防治工作。对于发病的群体，及时而准确地做出诊断是十分重要的。 畜禽细菌性传染病，除少数如破伤风等可根据流行病学、临床症状作出诊断外，多数还需要借助病理变化初步诊断，确诊则需在临床诊断的基础上进行实验室诊断，确定细菌的存在或检出特异性抗体。细菌病的实验室诊断需要在正确采集病料的基础上进行，常用的诊断方法有：细菌的形态检查、细菌的分离培养、细菌的生化试验、细菌的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。 一、病料的采集、保存及运送 （一）病料的采集 1．采集病料的原则 （1）无菌采病料原则病料的采集要求进行无菌操作，所用器械、容器及其他物品均需事先灭菌。同时在采集病料时也要防止病原菌污染环境及造成人的感染。因此在尸体剖检前，首先将尸体在适当消毒液中浸泡消毒，打开胸腹腔后，应先取病料以备细菌学检验，然后再进行病理学检查。最后将剖检的尸体焚烧，或浸入消毒液中过夜，次日取出作深埋处理。剖检场地应选择易于消毒的地面或台面，如水泥地面等，剖检后操作者、用具及场地都要进行消毒或灭菌处理。 （2）适时采病料原则病料一般采集于濒死或刚刚死亡的动物，若是死亡的动物，则应在动物死亡后立即采集，夏天不宜迟于6～8h，冬天不迟于24h。取得病料后，应立即送检。如不能立刻进行检验，应立即存放于冰箱中。若需要采血清测抗体，最好采发病初期和恢复期两个时期的血清。 （3）病料含病原多的原则病料必须采自含病原菌最多的病变组织或脏器。 （4）采病料适量的原则采集的病料不宜过少，以免在送检过程中细菌因干燥而死亡。病料的量至少是检测量的四倍。 2．采集病料的方法 （1）液体材料的采集方法破溃的脓汁、胸腹水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入无菌试管内，塞好胶塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。若需分离血清，则采血后（一定不要加抗凝剂），放在灭菌的试管中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。方便时可直接无菌操作取液体涂片或接种适宜的培养基。 （2）实质脏器的采集方法应在解剖尸体后立即采集。若剖检过程中被检器官被污染或剖开胸腹后时间过久，应先用烧红的铁片烧烙表面，或用酒精火焰灭菌后，在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌试管或平皿内。如剖检现场有细菌分离培养条件，直接以烧红的铁片烧烙脏器表面，然后用灭菌的接种环自烧烙的部位插入组织中，缓缓转动接种环，取少量组织或液体接种到适宜的培养基。 （3）肠道及其内容物的采集方法肠道只需选择病变最明显的部分，将其中内容
EB病毒感染的实验室指标
EB病毒感染的实验室指标 2016-03-08 EBNA二聚体带状模型 EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）属于4型疱疹病毒，类似其他疱疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染（或称活动性感染）和潜伏感染两种状态，EBV感染人淋巴细胞和上皮细胞，初次感染后病毒可长期在人上呼吸道上皮细胞或淋巴组织中潜伏，潜伏感染和终生携带是EBV感染的重要特征。人群对EBV普遍易感，大多数人初次感染发生在儿童或青少年时期并可终生携带，在中国，8岁以上人群90％以上血清学阳性。 传染性单核细胞增多症（infectious mononucleosis，IM）是典型的EBV初次感染表现；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遗传缺陷（如X连锁淋巴组织增生）或潜伏感染的反复激活的情况下，EBV感染可能导致不良预后，如发展成为慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）和EBV相关的噬血性淋巴组织增生（EBV-HLH）。另外EBV还与儿童及成人的淋巴瘤等多种肿瘤发病有关。因而及时准确的实验室诊断有助于临床对EBV 感染的时相、机体状况和发生不良转归的风险进行评估，这对于儿童EBV感染性疾病的诊断及预后至关重要。 EBV-DNA阳性是EBV存在的直接证据。由于潜伏感染的存在，正常人外周血单个核细胞中也常有低载量的EBV-DNA检出（通常低于200拷贝数／m1）。在活动感染发生时EBV 在人淋巴细胞中大量增殖（IM患者一般可达103～105拷贝数／m1）并释放到血浆或淋巴液中。随着感染的控制，EBV感染进入潜伏状态，血浆或淋巴液中的病毒颗粒迅速消失，而外周血淋巴细胞中的EBV仍将以潜伏状态保持较高滴度数月～1年。对于复发性感染外周血EBV-DNA载量会更高，CAEBV可达105～106拷贝数／ml甚至更高，EBV-HLH一般在104～106拷贝数／ml之间。由于不同感染状态下病毒的状态和分布不同，EBV-DNA测定结果的解释因标本来源的不同而有不同。 1．全血：淋巴细胞是EBV感染的靶细胞，淋巴细胞中潜伏期EBV的存在和活动感染后长达数月的持续阳性使得该检测结果不能反映现症感染，也不适合急性感染如IM的诊断。因此外周血单个核细胞EBV-DNA定量测定更适合复发感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相关EBV感染的诊断和检测。本方法的一个缺陷在于单个核细胞分离步骤繁琐，自动化程度低，定量结果受单个核细胞的分离效率影响较大。为解决这一问题，有研究者使用吸附法抽提全血DNA进行定量，现有大量商品化的抽提系统可供使用，抽提步骤自动化程度大大提高，且定量结果与分离单个核细胞的测定结果具有良好的相关性。 2．血浆或血清：血浆中的EBV-DNA来自活动感染期由感染淋巴细胞中释放的病毒颗粒，感染被控制后血液中游离的病毒颗粒和EBV-DNA又被免疫系统迅速廓清。因此血浆或血清中的EBV-DNA只有活动期感染时为阳性，恢复期和潜伏感染为阴性，这使得血浆EBV-DNA成为一个很好反映活动感染的指标，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活动感染患者的血浆中均可检出，而潜伏感染者多为阴性。
第二十五章 病毒感染的实验室诊断与防治原则
第二十三章病毒感染的实验室诊断与防治原则 第一节实验室诊断 病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。临床医师根据流行病学资料，疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。 一、检材的采集与送检 病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本的，要求： （一）尽早采取 在发病初期（急性期）采取，较易检出病毒，越迟阳性率越低。 （二）部位适宜 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰；肠道感染采取粪便；脑内感染采取脑脊液；皮肤感染采取病灶组织；有病毒血症时采取血液。 （三）冷藏速送 病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。若距离实验室较远，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。 检测特异性抗体需要采取急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后2～3周采取。血清标本放4℃-20℃保存，试验前血清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物质及补体。无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。 表23-1 病毒检材采集与检验结果的关系 采取标本的时期检查病毒及其成分测定抗体 潜伏期及前驱 期 刚发病或急性期 恢复期及康复期 较难查见 最多查见 很难查见 未增多 未增多或增多不明显 明显增多（常超过4倍）表23-2 供病毒分离的检材 临床表现常见病毒帮助诊断有用的检材 呼吸道感染腺病毒 巨细胞病毒 流感病毒 咽试、肛拭 咽试或含漱液、尿液 咽拭或含漱液
婴幼儿轮状病毒感染42例临床及治疗分析
婴幼儿轮状病毒感染42例临床及治疗分析 发表时间：2011-06-24T16:28:18.887Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第4期供稿作者：陈爱梅 [导读] 小儿感染性腹泻是儿科常见病、多发病，而寒冷季节的婴幼儿腹泻80%由病毒感染引起 陈爱梅 【中图分类号】R665【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)04-0161-01 小儿感染性腹泻是儿科常见病、多发病，而寒冷季节的婴幼儿腹泻80%由病毒感染引起，其主要病原为轮状病毒，是造成儿童营养障碍、生长发育障碍的主要原因之一。值得引起注意。现将我院2008年8月-2010年8月经粪便轮状病毒抗原检测为阳性的42例报告下。 1临床资料 1.1一般资料:本组患儿共42例，其中男36例女6例，36例生活在农村。年龄3-6月10例，7月-1岁22例，1-2岁10例。发病时间秋季发病为34例，冬季为8例。 1.2临床表现:①入院诊断：本组病例以腹泻为主诉入院，起病急，常伴发热及上呼吸道感染症状，无明显感染中毒症状。大便轮状病毒抗原检测为阳性。②本组病例入院时32例病初1-2天发生呕吐，随后出现腹泻，2例2-3天好转，30例3-5天好转。③全部病例腹泻次数约10次/天以下18例，10次/天以上24例。粪便性状多样化，为蛋花汤样便，水样便，黄绿色便带少量粘液，无腥臭味，常并发脱水。④其它症状如惊厥等。 1.3实验室检查： 1.3.1外周血象：38例外周血象检查情况见表1。 表1 38例外周血象检查情况 1.3.2粪便镜检:除6例初次粪便镜检脓细胞3-4个外，以后连续复查均无脓细胞。36例初检阴性或脂肪球。粪便轮状病毒抗原检测为阳性42例。 1.3.3粪便培养:粪便细菌培养42例均为阴性。 2治疗及转归 2.1抗病毒药物的应用:本组42例均予不同程度地使用“病毒唑、炎琥宁、更昔洛韦及西咪替丁”等经验型治疗。其中更昔洛韦+西咪替丁显效明显26例，其余病例予以炎琥宁、病毒唑及西咪替丁治疗共16例（高敏10例，中24例，低敏2例）。观察平均止泻时间、粪便性状及次数恢复正常、全身症状消失，结果如下见表3。 表3治疗结果（χ±s.d） 2.2对症及支持治疗：本组42例均给予纠酸，补液，维持水、电解质、酸碱平衡治疗。对少数年幼的病情重和体质差或有贫血、营养不良、佝偻病，给予输血或血浆。 3讨论 轮状病毒感染潜伏期1-3天，多发生在6-24个月婴幼儿，4岁以上者少见。这可能与以下因素有关：①婴幼儿抵抗力低引起致病所需病毒量比成人少。②婴幼儿胃酸及各种酶的活力均较低，肠粘膜免疫的防御反应及口服耐受机制均不完善。 自轮状病毒口服疫苗普遍推广以来，轮状病毒感染腹泻大大减少。本组38例小儿来自农村，营养不良21例，贫血19例，提示卫生条件及体质与轮状病毒感染密切相关。本病是秋冬季节婴幼儿腹泻最常见的病原，曾被称为秋季腹泻。轮状病毒感染在其病程中，粪便性状为黄色水样或蛋花汤样便，带少量粘液，无腥臭味，大便次数多、量多、水分多为特点，由于病毒直接作用于肠道神经系统，产生类似于霍乱毒素引起的腹泻。本组18例水样便，与霍乱难以鉴别。 轮状病毒感染的发生机制为轮状病毒侵入肠道后在小肠绒毛顶端的柱状上皮细胞上复制，使细胞发生空泡变性和坏死，其微绒毛肿胀、不规则和变短，受累的肠粘膜上皮细胞脱落，遗留不规则的裸露病变，致使小肠粘膜回收水分和电解质的能力受损，肠液在肠内大量积累而引起的腹泻，具小肠绒毛柜状上皮细胞感染病毒后造成上皮细胞的双糖酶含量减少，进一步引起双糖吸收不良，导致协调转运的钠、氯等离子吸收障碍，肠道内呈高渗状态而出现水样泻等表现，常伴发热和上呼吸道感染症状。其中1例高热40℃，有惊厥；有2例表现为血清心肌酶谱异常，提示心肌受累。尤其可见轮状病毒感染可侵犯多个脏器。 外周血象一般认为无特异性诊断价值，白细胞总数多为正常，部分可中度升高。本组38例查末梢血象，白细胞(5.0-8.0) ×103/L共24例，中性粒细胞50-60%24例，表明轮状病毒感染对白细胞无明显影响。 粪便轮状病毒抗原检测是确诊婴幼儿轮状病毒感染的重要方法。由于近年来口服轮状病毒活疫苗的推广，此病逐渐减少。凡发病具有本病特点，如：发病年龄小，大便次数多，量多，水分多，自然病程约3-8天，应及时作轮状病毒抗原检测。本组42例均为阳性结果。 目前尚无理想的抗病毒药物。根据轮状病毒性肠炎急性期呈低激活状态与细胞免疫的变化和临床症状恢复一致，提示轮状病毒感染过程中细胞免疫参与的重要作用，故改善机体的细胞免疫功能对于抗轮状病毒效果显著。西咪替丁是一种免疫调节剂，在人体内可明显提高T
病原微生物第8章 细菌的感染的检查方法和防治原则习题与答案
第8章细菌的感染的检查方法和防治原则 一、选择题 【A型题】 1．不属于血清学反应的试验是： A．协同凝集试验B．对流免疫电泳C．血凝抑制试验 D．血凝试验 E．Elek平板毒力试验 2．从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原菌？A．增菌培养基B．营养培养基C．选择鉴别培养基D．基础培养基E．特殊培养基3．分离培养细菌一般需多少时间？ A．4~8 小时B．8~12 小时C．12~16 小时D．16~20 小时E．20-24 小时 4．下列哪种细菌需 4~8 周培养才能长出可见菌落？ A．大肠杆菌B．葡萄球菌 C．破伤风梭菌D．白喉杆菌 E．结核杆菌 5．关于直接涂片镜检的叙述，下列哪项是正确的？ A．适用于所有细菌感染疾病的初步检查 B．方法简便易行，但均不能快速鉴定细菌 C．只适用于形态和染色性上具有特征的病原菌 D．其结果必须结合临床表现方有诊断价值 E．以上都不是 6、利用细菌生化反应鉴定细菌是根据： A．细菌酶活性差异B．细菌毒素活性差异C．细菌酶含量的差异 D．细菌毒素种类的差异E．细菌分解代谢产物的差异 7．白百破三联疫苗是指： A．白喉杆菌死疫苗、百日咳杆菌死菌苗、破伤风类毒素 B．白喉杆菌活疫苗、百日咳杆菌活菌苗、破伤风类毒素 C．白喉杆菌死疫苗、百日咳杆菌活菌苗、破伤风类毒素 D．白喉杆菌活疫苗、百日咳杆菌死菌苗、破伤风类毒素 E．白喉杆菌类毒素、百日咳杆菌死菌苗、破伤风类毒素 8．白百破三联疫苗与其三种单一疫苗比较，其优点是： A．可减少接种次数和剂量B．可减少接种次数，但增加剂量 C．可减少接种次数，而增强免疫效果D．可减少接种次数，但降低免疫效果 E．以上都不是 9．用马血清制备的抗毒素的缺点是： A．制备较困难B．纯度不高C．产量低D．可产生超敏反应E．不易保存 10．丙种球蛋白的优点是： A．来源广B．易制备C．易保存D．含多种微生物的抗体E．免疫效果好 11．采集细菌培养标本正确的作法是： A．采集有正常菌群的标本时需用洁净容器B．采局部病变标本前应先用消毒剂消毒局部C．必须在使用杭生素之前采集D．不能即时送检时均应置冰箱保存E．以上都不是12．关于血清学反应，正确的叙述是： A．用已知抗原侧抗体称血清学鉴定 B．用颗粒性抗原与抗体反应的试验称沉淀反应 C．用抗体致敏栽体（乳胶或红细胞等）与相应抗原反应称反向间接凝集试验 D．用于鉴定炭疽芽胞杆菌的絮状试验称 Ascoli 试验 E．抗 O试验是一种沉淀反应 13．关于ＰＣＲ技术，下列哪种叙述是错误的？ A．是一种有细胞的分子克隆技术B．是一种 DNA扩增技术 C．具有快速、灵敏和特异性强等特点D．可用于病毒 DNA片段的枪侧 E．也可用于细菌等微生物DNA片段的检侧 14．测定细菌对药物敏感性的方法，下列哪种是错误的？
细菌实验室检查项目
细菌室常规检测项目： 一形态学检查（Morphological Examination） （一）各种染色 1革兰染色（Gram stain）：将细菌分为革兰阳性菌如葡萄球菌属，链球菌属等；革兰阴性菌如大肠埃希菌沙门菌，志贺菌等。 2抗酸染色(Acid-fast stain)：通过染色将细菌分为两大类：抗酸性细菌和非抗酸性细菌，抗酸性细菌种类较少，如结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌等。正常：未见。抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示： ++++ 每个视野>10根 +++ 每个视野发现1～10根 ++ 100个视野发现10～99根 + 300个视野发现3～9根 ±300个视野发现1～2根 3异染颗粒染色（Metachromatic granula stain）：用于检查棒状杆菌。 4墨汁染色（Indian ink negative staining）：用背景着色，而细菌本身不着色的染色方法，用于脑脊液中查找新生隐球菌。正常：未见。 5鞭毛染色（Flagella stain）：鞭毛的数目和位置随细菌种类而不同，可分为周毛菌、单毛菌、双毛菌和丛毛菌，是细菌分类和鉴定的重要依据。如霍乱弧菌是单鞭毛菌。 6荚膜染色（Capsules stain）：荚膜是细菌壁外一层粘液性多聚物，赋予致病菌的侵袭力。染色将荚膜染成与菌体不同颜色，可作为细菌鉴定的依据。如肺炎链球菌。 （二）涂片检测(smear) 1便球杆比检查( stool cocus/bacillus)：即革兰阳性球菌与革兰阴性杆菌之比。 正常值：便球杆比：1:3 临床意义：健康人肠道内寄居着大量厌氧菌和小部分需氧菌。除人乳喂养的婴儿肠道内以革兰阳性球菌为主外，其余人均以革兰阴性杆菌占绝对优势。在肠道发生致病菌如沙门、志贺、弧菌感染时往往由于使用抗生素而是革兰阴性杆菌受到抑制，此时球菌/杆菌比值有可能变大。若比值显著增大，常提示肠道菌群紊乱或发生二重感染。 2标本真菌涂片（fungi）：经革兰染色如发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌丝，可初步报告为：找到真菌孢子和菌丝。 正常值：未见真菌。 3痰涂片检查（sputum smear）： 临床意义：目的确定标本是否适合做细菌培养，初步判定是否有致病菌存在。首先应确定标本是否为来自下呼吸道的痰，其标准为革兰染色WBC>25/LPF(低倍视野),上皮细胞<10/LPF。有些细菌可做初步判断： 1) 肺炎链球菌：革兰染色为阳性球菌，成双或短链状排列 2) 结核分枝杆菌：抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示： ++++ 每个视野>10根 +++ 每个视野发现1～10根 ++ 100个视野发现10～99根 + 300个视野发现3～9根 ±300个视野发现1～2根 3) 真菌：经革兰染色如发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌丝，可初步报告为：找到真菌孢子和菌丝。