高速逆流色谱技术原理及应用领域

液滴逆流色谱 (DCCC)
旋转腔室逆流色谱 (RLCCC)
逆流色谱的分类
CCC
HSES 恒定的引力场
HDES 可变的引力场
离心力 引力 离心力 同步行星式运动 CPC DCCC RLCCC HSCCC
高速逆流色谱(HSCCC)的原理
流体静力学 平衡(HSES) 流体动力学 平衡(HDES)
• 20世纪70年代，逆流色谱(CCC)。首先 出现液滴逆流色谱(DCCC)
溶剂 泵
进样器
进样器
溶剂 约300根管柱 上行法 收集器
泵 收集器 约300根管柱 下行法
优点：DCCC仪器轻巧简便，能避免乳化或泡沫的产生。 缺点：流动相流速低，每小时只有十几毫升；分离过程 长，一般需要几十小时才能完成一次几个组分的分离．
高速逆流色谱的技术原理及应用领域
上海同田生物技术有限公司公司位于上海 张江科技园，占地约 30 亩，建筑面积约 20000 平方米，总投资人民币 6000 万元，其前身是成 立于 1999 年 2 月位于深圳市清华大学研究院的 深圳市同田生化技术有限公司。
公司致力于高速逆流色谱仪（ HSCCC ）、 高纯度天然产物有效成分单体、天然药物原料 / 中间体的研究开发、生产和销售。
银杏内酯 A
银杏内酯 C
• 部分对照品获得国家质量监督检 验检疫总局颁发的标准物质证书
• 天然植物<银杏,大豆>单体 提取物-上海市高新技术成 果转化项目
• <石杉碱甲>-上海市高 新技术成果转化项目
• 同田对照品质量目前已得到美国，德国， 瑞士，英国，新加坡等多家标准品经销 商及科研院校的认可，公司与国内外多 家科研单位保持长期稳固的合作。
作为多分离柱高速逆流色谱仪国家新型 专利的拥有者、高速逆流色谱领域的领导者， 我们与通用电气医疗生物科学中国有限公司 （ GE Healthcare Bio-sciences co.,ltd . ） 建立 了长期的合作伙伴关系 .
TBE300A＋ÄKTA Prime
在高速逆流色谱技术领域，公司所研制并批 量生产拥有自主知识产权的新型多分离柱高速逆 流色谱仪，性能稳定可靠，有分析型、半制备型、 制备型等7种不同产品：
• 不存在样品的不可逆吸附，理论回收率为100％
• 极大地避免了样品的变性问题
• 操作简单，无需太多样品前处理等。
• 20世纪50年代，逆流分溶法(CCD) • 由Craig发明的非连续性分溶装置 (设备庞大复杂、易碎、溶剂体系容易乳化、溶 剂耗量大、分离时间太长) • 20世纪60年代被液相色谱代替
Fra Baidu bibliotek 德国
泰国
• 国内最大最早的专业对照品标准品研发及 生产企业之一 • 拥有长达8年的对照品研发及生产经验
•配备有完整的对照品研发中心,检测中心和 生产中心(对照品高速逆流色谱生产线)
• 同田对照品纯度达99%以上,均通过严格的质 量检测,包括HPLC,NMR,MS,UV等方法的鉴定.
银杏内酯 B
HSCCC的工作流程简易图
HSCCC分离条件
溶剂 条件 样品 分离 效果 转速
温度
流速
HSCCC的溶剂条件选择
• HSCCC采用液-液分配原理，增加了 固定相选择环节，因此它的溶剂条件 选择方法与其他色谱技术不同。
溶剂条件的筛选方法
1、文献报道的溶剂条件 经典体系1：氯仿-甲醇-水：4-3-2 经典体系2：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水：1-1-1-1 2、TLC方法初步筛选 初步判断样品在上、下相中的分配情况 3、HPLC方法分析分配系数 分析目标组分在两相中的分配系数K值 4、利用分析型HSCCC 时间短、溶剂消耗少等优点
转速：800rpm
13次/秒混合分离
混合区：在靠近离心轴心大约有四 分之一的区域，两相的激烈混合 静置区：两溶剂相分成两层 较重的溶剂相在外部较轻的溶剂相 在内部
高速逆流色谱中样品分离原理
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在分离柱运动一个周期时（经过《分离区》、《混合区》、《分离区》）的两相分配过程
高速逆流色谱 High Speed Counter-Current Chromatography
一、逆流色谱(CCC)原理及分类
二、高速逆流色谱(HSCCC)的原理 三、高速逆流色谱的应用实例
逆流色谱的原理
• 液－液分配色谱：利用样品中各组分在两相溶 剂间分配比的差异，进行分离。它是不用固态 载体的全液态的液-液分配色谱技术. • 优点：
分离管内侧 ——————————————————————————————————————— ………………………………ooooo……ooooo②……oooo……………………………………… ………………………………………ooo…………oooo………………③……………………… ………………………………oooo①oo……ooooooo……oooo…①…………………………… ①②③④ ooooooooooooooooooooooooo……③……oooo…………ooooooooooooooooooooooooooooooo ooooooooooooooooooooooooo…oo……ooo④oo……ooo…ooooooooooooo④oooooooooooooo oooooooooooooooooooooooooo………oooo……oooo………oooooooooooooooooo②ooooooooo ——————————————————————————————————————— 分离管外侧 ①③组分，由于在轻相中的分配系数过大不易被流动相洗脱下来 ②④组分，根据在重相的分配系数大小按顺序洗脱出来分离区 ………………――――轻相 oooooooooooo――――重相 ①②③④——样品（4组分）
逆流色谱的基本体系示意图
固定相的保留原理
如上图所示，螺旋柱中注满差不多相等体积的两相溶 剂（见右侧试管），在螺旋柱的匀速转动下两相溶剂受 到“阿基米德螺旋力”的作用，竞争性地朝首端移动。 不久，两相在螺旋管地首端建立一种流体动力平衡，按 一定比例共存，而这种情况发生在每一圈螺旋柱内。并 且任何一相的超量都会被推向螺旋管的尾端一侧。