标本中未知细菌的分离和鉴定

原理： 有些细菌产生尿素酶 结果： 分解尿素 不分解尿素 培基变红 培基不变色 分解尿素 产氨
Urea slant
实验结果
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物 2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水 方法
生理盐水 血清
玻片凝集试验
营养 原理： 底物 底物 底物 指示剂
呈红色 不氧化 呈黄色
只分解葡萄糖
上层氧化 产酸（葡萄糖少，产酸量少） 下层缺氧
分解葡萄糖＋乳糖
产生H2S＋铁盐
产酸（乳糖多，产酸多）
FeS 培养基成黑色
上下层均为黄色
Double suger iron slant
4. 尿素培养基
组成：基础培基＋尿素＋酚红
底物 指示剂
紫黑/紫红
分解乳糖细菌
不分解乳糖细菌
菌落无色、半透明（粉色）
EMB agar
2. 靛基质试验（吲哚试验）
组成：蛋白胨水＋色氨酸
原理： 某些细菌有色氨酸酶 试剂 玫瑰吲哚（红色） 分解 色氨酸 吲哚（无色）＋柯氏
结果：液面形成玫瑰红色
吲哚试验
3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验
组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红
克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定
生化反应
玻片凝 集试验
设Fra Baidu bibliotek性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
设计性实验
1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等
3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基
其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等
4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等
肠道杆菌生化反应的结果
葡萄糖
⊕
乳糖
⊕
动力
±
H2S
－
尿素
－
艾希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌 乙型副伤寒 甲型副伤寒 伤寒杆菌 痢疾杆菌
⊕
⊕ ⊕ ⊕ ＋ ＋
＋
± － － － －
－
＋ ＋ ＋ ＋ －
－
＋ ＋ ± ＋ －
－
＋ － － － －
非致病菌
致病菌
实验十
标本中未知细菌的分离和鉴定
实验目的和要求
1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方 法 2、掌握药物敏感试验 3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤 4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应
实验内容
一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定
二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定
一、标本中未知病原性球菌
脓拭子
分离培养 （血平板）
革兰染色
革兰染色
触酶实验
甘露醇实验
咽拭子
分离培养 （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 （石炭酸复红单染）
尿液
离心沉淀 1500转，10分钟
分离培养 （EMB平板）
革兰染色
革兰染色
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-靛基质-尿素半 固体琼脂培养基
观察结果
观察结果
观察结果
完成靛基质试验
肛门拭子1/2
SS平板
克氏双糖铁斜 面培养基
动力-半固体培养基 生化反应管
观察结果
五管糖发酵试验
玻片凝集试验
培养基原理
1. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）
组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝
底物 原理： 指示剂、抑菌剂
细菌
结果：
分解
乳糖
产酸：伊红＋美蓝
菌落变黑，有金属光泽
的分离鉴定程序
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本 观察菌落性状、溶血性、色素 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 涂片染色镜检
（凝固酶、耐热核酸酶）
血琼脂平板
血液 脑脊液
肉汤增 菌培养
二、标本中未知肠道感染细菌
的分离鉴定程序
脓血便、肛拭子 标本 SS平板,中国兰,EMB平板 选择/鉴别培基