实验一 鸡胚接种

胚胎的排泄器官，内含有尿囊液， 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，
初为透明液体，是单纯生理盐溶液， 初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿 囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12 12囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13 天后，尿囊液开始变得混浊。 天后，尿囊液开始变得混浊。
6. 羊膜与羊膜腔 泡于其中 7. 卵黄 8. 卵白
实验一
病毒培养的宿主系统： 病毒培养的宿主系统： 本动物 实验动物：家兔、小 实验动物：家兔、 白鼠、大白鼠、豚鼠、 白鼠、大白鼠、豚鼠、 鸡胚 体外培养的器官、 体外培养的器官、组 织细胞
鸡胚接种
一、实验目的
了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用 了解鸡胚的基本结构与功能， 的鸡胚接种方法。 的鸡胚接种方法。
三、鸡胚的结构与功能
1. 卵壳 上有细孔，进行气体交换 上有细孔， 2. 壳膜 使气体分子和液体分子在内 外两方面进行交换。 外两方面进行交换。
3. 气室 呼吸和调节压力 4. 绒毛尿囊膜 起胚胎呼吸器官的 功能， 功能，氧气的交换是在膜的血管内 通过卵壳孔而进行的。 通过卵壳孔而进行的。
5. 尿囊腔
五、孵育
1. 孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 孵卵箱内的温度应保持在37.5 37.52. 相对湿度：50%-60% 相对湿度：50%3. 必须保证具有充 分的新鲜空气流 通，特别是在孵 天以后。 化5-6天以后。 4. 从孵育后第3天 从孵育后第3 开始， 开始，每天翻卵 一次。 一次。
十一、 十一、试验报告作业
1. 常用的鸡胚接种方法有哪些? 常用的鸡胚接种方法有哪些? 2. 简要说明鸡胚的结构及各部分结构的功能。 简要说明鸡胚的结构及各部分结构的功能。 3. 用鸡胚来进行病毒的培养要注意哪些问题? 用鸡胚来进行病毒的培养要注意哪些问题? 4. 如何区分无精卵、死胚、活胚？ 如何区分无精卵、死胚、活胚？ 5. 用于病毒培养的系统主要有哪些？ 用于病毒培养的系统主要有哪些？
5. 用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，Hale Waihona Puke Baidu用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气， 造成气室内负压， 造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿 囊膜下陷而形成人工气室， 囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴 于壳膜上的生理盐水迅速渗入。 于壳膜上的生理盐水迅速渗入。 6. 用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊 1ml注射器滴 注射器滴2 膜上。 膜上。
方法二： 方法二： 1. 2. 同方法一 将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。 3. 将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长 径的1/2处用碘酊和酒精消毒。 1/2处用碘酊和酒精消毒 径的1/2处用碘酊和酒精消毒。 4. 用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm，注 用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm 1.5cm， 入病毒液0.1 0.5ml。 0.1入病毒液0.1-0.5ml。 5. 用熔化的石蜡封孔， 用熔化的石蜡封孔， 置孵卵箱内继续孵育， 置孵卵箱内继续孵育， 24h内死亡者废弃 内死亡者废弃。 24h内死亡者废弃。
4. 用注射器吸取病毒悬液，沿气室 用注射器吸取病毒悬液， 端所穿小孔垂直刺入3cm 3cm， 端所穿小孔垂直刺入3cm，注入 0.1-0.5ml病毒液 病毒液。 0.1-0.5ml病毒液。 5. 用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内 用熔化的石蜡封孔， 继续孵育，每天翻卵1 继续孵育，每天翻卵1-2次，24h 内死亡者废弃。 内死亡者废弃。
十、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃ 收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以 4℃冰箱半小时以 上，冻死胚胎，防止出血。 冻死胚胎，防止出血。 根据接种途径的不同， 根据接种途径的不同，收获相应的材料 1. 绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜 2. 尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml） 收获尿囊液（ 8ml） 3. 卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体 4. 羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml） 收获羊水（0.5-1ml）
（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘V和疱疹V的分离和增殖。 主要用于痘V和疱疹V的分离和增殖。 方法一： 方法一： 1. 取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒。 10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒。 日龄鸡胚 2. 在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口 在气室端的卵壳上开一1.5 1.5cm的口 1.5× 3. 用灭菌眼科镊子撕去一 小片内壳膜 4. 滴入接种物 5. 用胶布或透明胶纸封闭 切口
七、接种前处理 1. 用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅 用检卵灯再次检查鸡胚活力， 笔画出气室和胚胎的位置， 笔画出气室和胚胎的位置，并在将 要接种的部位做好记号。 要接种的部位做好记号。 2. 对鸡胚进行消毒
八、接种途径
1. 绒毛尿囊膜接种 2. 尿囊腔接种 3. 卵黄囊接种 4. 静脉接种 5. 羊膜腔接种 6. 脑内接种 7. 眼球接种 蓝舌病毒 正粘病毒和副粘病毒 狂犬病毒
5. 用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育， 用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育， 每天翻卵并检卵一次，24h内死亡 每天翻卵并检卵一次，24h内死亡 者废弃。 者废弃。
九、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响 NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
尿囊腔接种9 10日龄鸡胚 尿囊腔接种9-10日龄鸡胚 强毒株在接种后30 60h死亡，弱毒株3 强毒株在接种后30-60h死亡，弱毒株3-6d 30死亡 死亡。以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血， 死亡。以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血， 以头部、足趾、翅膀出血最为明显。 以头部、足趾、翅膀出血最为明显。
7. 用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于 用透明胶纸封住卵窗， 卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封， 卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气 室中央的小孔用石蜡密封。 室中央的小孔用石蜡密封。 8. 胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗 胚横卧于卵箱中，不许翻动， 向上。 向上。
（三） 尿囊腔接种 主要用于正粘V和副粘V 如流感V 主要用于正粘V和副粘V，如流感V、新城疫 V的分离和增殖。 的分离和增殖。 1. 选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位 选用10 11日龄的鸡胚 10- 日龄的鸡胚， 2. 在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒 3. 用钢锥穿一小孔 4. 将注射器沿小孔插入 0.5-1.0cm， 0.5-1.0cm，注入 0.10.1-0.2ml 接种物
方法二：（做人工气室） 方法二：（做人工气室） ：（做人工气室 1. 在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位， 在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位， 用电烙器在卵壳上烙一个直径约3 4mm的烤 用电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的烤 焦圈。 焦圈。 2. 用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳， 用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳， 造成卵窗。 造成卵窗。 3. 在气室端中央钻一个小孔。 在气室端中央钻一个小孔。 4. 用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下 用针尖挑破卵窗中心的壳膜， 的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。 的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。
二、原理
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低， 鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低， 病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途 病毒易于增殖， 径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。 感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
二、材料
1. 鸡胚 10日龄 10日龄 2. 病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 鸡新城疫病毒（NDV） 3. 照蛋灯 4. 打孔器 5. 石蜡 6. 注射器 7. 蛋座 8. 酒精棉球、碘酊棉球 酒精棉球、
其中盛有羊水，胎体浸 其中盛有羊水，
在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
6、
四、受精卵的选择
1. 最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体 最好是来自SPF鸡群， SPF鸡群 的影响 2. 受精卵的壳最好是白色的 3. 受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要 受精卵必须新鲜，保存在5 20℃不要 超过10 超过10天，保存一个月的受精卵，孵 10天 保存一个月的受精卵， 化率将近于零。 化率将近于零。
（一）卵黄囊接种法
主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热 衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。 衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。 方法一： 方法一：
1. 取6-8日龄鸡胚，用检卵灯 日龄鸡胚， 照视画出气室和胚胎位置后， 照视画出气室和胚胎位置后， 垂直放置在卵座上( 垂直放置在卵座上(大头向 上) 2. 用碘酊和酒精消毒气室端 3. 用钢锥在气室中央锥一小孔。 用钢锥在气室中央锥一小孔。
六、 检卵
自孵育后的第4 自孵育后的第4天开 始检卵，每天一次。 始检卵，每天一次。 孵育4 孵育4-5日后即可于 检卵灯上检查鸡胚受精 与否及发育情况。 与否及发育情况。 未受精卵：只见模糊的卵黄阴影， 未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见 血管和鸡胚痕迹。 血管和鸡胚痕迹。 活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影， 活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较 大鸡胚还可见到胚动，但孵育14 15天 14、 大鸡胚还可见到胚动，但孵育14、15天 以后胎动不明显，甚至无胎动。 以后胎动不明显，甚至无胎动。 死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。 死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。