青霉属

实验从土壤中筛选得到一产酸性a一淀粉酶的野生菌株，命名为AAI，根据

其菌体形态显微观察的结果鉴定该菌株为青霉属。

菌种的筛选及保藏

2.2.2.1菌种的筛选:

(l)在酸性的和含淀粉的环境中采集土壤样品和水样品。

(2)土壤样品109溶于50mL无菌水中，水样品smL溶于45mL无菌水中。

(3)分别用无菌水稀释1X103，1XI小，l只105，1X106，l只10，，1x108倍。

文产酸性份淀粉酶菌株的筛选及其酶学的性质研究

(4)分别涂布于筛选培养基表面。

(4)30℃培养72h，用灭过菌的牙签挑选单菌落影印2一3皿，同时用签字笔

对各单菌落标号。

(5)影印过的培养皿30℃培养72h，取其中一皿喷洒稀碘液记录有水解圈的单

菌落。

(6)多次划线分离该单菌落得纯种。

2.2.2.2菌种的保藏

划线分离得到的产酸性a一淀粉酶菌株采用斜面穿刺保藏和甘油密封保藏两种

方式，一试三份分别放在三个不同的冰箱中。

2.2.3菌种的形态观察及初步鉴定

AAI划线培养，待培养基表面长出肉眼可见的少量淡绿色抱子粉进行显微观

测，此时可观察到分生抱子头形态。

筛选培养基:KHZpo;0.05%，MgSO;0.03%，FeSO;0.01%，MllSO;0.01%，

CaC120.02%，蛋白陈0.2%，麦芽糖0.1%，可溶性淀粉0.05%，琼脂2%，灭菌

后用HCI调pH为4.0。

种子培养基:KHZPO;0.05%，MgSO;0.03%，FeSO;0.01%，MnSO40.01%，

CaCI:0.02%，蛋白膝0.2%，麦芽糖0.1%，可溶性淀粉0.25%，灭菌后用HCI

调PH为4.0。

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2

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2

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1.1筛选培养基的配制

称取K壬IZpO;0.19、Mgso40.069、FeSO40.029、MnSO;0.029、CaCI:0.049、

琼脂4g、可溶性淀粉0.19、蛋白陈0.49、麦芽糖029，用去离子水定容至200 mL，电炉加热至溶液溶解，用适量去离子水补足蒸发的水分，重新定容到200mL，高压灭菌锅内121℃灭菌20而n，灭菌后稍微冷却，用HCI调pH到4.0，缓缓倒

入已灭过菌的培养皿中，每个平皿约倒0.scm厚度的培养基，冷却凝固后于冰箱

中倒置存放。

2.2.1.2种子培养基的配制

按照配方计算并称量各组分制备种子培养基，灭菌后用HCI调pH到4.0，放

入冰箱储藏。

2.2.1.4培养基配制过程中有无杂菌的检验

将制备好的筛选培养基平皿放入恒温培养箱中，33℃倒置培养3天，观察培

养基表面有无杂菌生长。

将制备好的种子培养基放入气浴恒温震荡器，33℃、180r/min培养3天，观察该培养基中有无杂菌生长。

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在配制筛选培养基时采用先灭菌后调pH的方法，配制后的筛选培养基凝固情况好，碘液与培养基显蓝色，说明其中琼脂、淀粉水解较少;