免疫细胞化学方法步骤

免疫细胞化学方法步骤

将已消毒的盖玻片置于6孔培养板中，按2×104/ml的细胞密度将细胞接种于培养板中进行细胞爬片，培养6小时，待细胞贴壁后，加用培养液稀释的DADS液，使终浓度30mg·L-1，阴性对照组则为常规培养液。3天后进行免疫细胞组织化学染色鉴定。PBS清洗时将玻片置于小培养皿中。步骤如下：

1 、PBS清洗标本3次各1 min。

2 、95%酒精固定15 min。

3 、空气干燥5min。

4 、PBS清洗标本3次各1 min。

5 、过氧化酶阻断剂37℃30 min。

6 、PBS清洗标本3次各1 min。

7、滴加非免疫性动物血清37℃30 min

8、弃去非免疫性动物血清

9、一抗孵育（PBS配，湿盒）4℃过夜或37℃60 min。

阴性对照最好用一抗来源血清，否则用PBS液

10、PBS清洗标本3次各1 min。

12、二抗孵育（湿盒）37℃30 min。

13、PBS清洗标本3次各1 min。

14、C液（链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，湿盒）37℃30 min。

15、PBS清洗标本3次各5 min。

16、DAB显色（避光，镜下观察至棕色）约3~10min。

17、蒸馏水洗2次1 min。

18、苏木素复染0.5~1min。

19、自来水洗10min左右。

20、95%乙醇脱水1～2 s，树胶封片。

注意：

1、冲洗时只须轻轻振荡培养皿（不可用吸管太用力吹，易脱片）；

2、加一抗、二抗后冲洗时第一次须将玻片倾斜；