第七节 副溶血性弧菌

二、致病性
1、致病因素 ★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病 . ★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不 被破坏。 2、媒介食品 主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等）， 含盐量较高的食物亦可带菌。 3、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。
二、致病性
4、预防措施 （1）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的 厨具、容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品 （2）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋， 放置10min后，再放其他调味剂 （3）严格执行生熟食品分开制度 （4）剩饭菜，在食用前要回锅热透
在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面
光滑，较湿润，边缘不整齐。 在血平板上可见溶血环。
3、生化特性
分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 H 2 S （－）、 V-P （－）、靛基质（吲哚试验）（ + ）、
精氨酸（－）
甲基红（+）、赖氨酸（＋）、溶血＋/-
V.P反应
• 检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲 基甲醇[CH3CH（OH）COCH3]的反应。 通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养 基中，加入强碱可见显有红色。此反应用 于细菌的鉴别
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4、抗原结构结构
O抗原（菌体抗原）：O1~O13
H抗原（鞭毛抗原）： K抗原（荚膜抗原）：K1~K71
13种。
65种。
（ 缺编：K2 、 K14 、K17、 K35、 K62）
血清分型：所有副溶血性弧菌的H 抗原均相同，但是O 抗
原和K 抗原存在差异，以13种O抗原及65种K抗原将其分为 13个群和845个型。
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• 2、尿素酶（Urease，脲酶）试验
• 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的 氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱 导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。 其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色→ 红色（+ 普通变形杆菌） • 黄色（- 大肠杆菌） • 试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体 培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂 布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变 色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养 至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。
• 1、吲哚试验( indol test)
• 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛 基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用， 生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰 吲哚（红色，+ 大肠杆菌）
不产吲哚（无色，- 产气杆菌） • 试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动 试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿 试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为 阳性。 • 应斜面，观察 结果（下部变黄，有动力，不产H2S ） （4）涂片镜检：挑取可疑培养物镜检。 （5）嗜盐性试验：将上述培养物接种无 盐胨水、7%、11%氯化钠胨水。
（6）生化试验：V-P、靛基质、甲基红试
初步鉴定：
挑取纯培养的单个可疑菌落，进行副溶血性弧菌的初步鉴定：
副溶血性弧菌： 氧化酶试验：阳性。 涂片镜检：G-，棒状、弧状、卵圆状 等多形态，无芽胞，有鞭毛。 3％氯化钠三糖铁斜面 ：底层变黄不 变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加 深，有动力。 嗜盐性试验：分别接种于不同氯化钠 浓度的胰胨水中培养，在无氯化钠和10 ％氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长， 在7％氯化钠的胰胨水中生长旺盛。
3、检验程序
（1）样品处理及培养 定量测定：样品用3%氯化钠蛋白胨水 10 倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含 有该培养基的平皿，培养计数。 定性试验 （2）分离培养：首先将样品接种到氯化 钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养 18-24h观察。也可增菌液直接分离。
（3）可以菌落培养：挑取上述可疑菌落
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3、氨基酸脱羧酶的测定
• 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类 和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含 胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。 接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。
接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科
的细菌于37℃培养4天观察。 • 当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳 性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。
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4、三糖铁（TSI）琼脂试验
• 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物， 穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察 结果。
• 培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红
• 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产 生硫化氢（变黑）。 • 只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先 变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化， 加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使 斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被 氧化，所以仍保持黄色。
三、检验方法
1、检验标准：GB/T 4789.7-2008 副溶血性弧菌检验 2、培养基和试剂
培养基：
3％氯化钠碱性蛋白陈水〔APW) 、 硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂 3％氯化钠胰蛋白胨大豆〔TSA）琼脂 3％氯化钠三糖铁（TSI ）琼脂 嗜盐性试验培养基 3％氯化钠甘露醇试验培养基 3％氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基 3％氯化钠MR-VP 培养基 氯化钠结晶紫增菌液 试剂：氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、 V-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。
第 七节、副溶血性弧菌检验
一、生物学特性 1、形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或 稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、 丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛， 长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽 胞、无荚膜。
2、培养特性
本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均 可生长 需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢 嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐 >10%不能生长。 最适温度36℃，pH7.5~7.8 在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌 膜