水产品的检验

水产品的检验
水产品
的安全现状
水产品质量安全现状
我国是水产品生产大国， 连续多年居世 界首位.水产食品营养丰富、味道鲜 美, 并具有低脂肪、高蛋白、营养平衡性 好的特点, 深受人们的喜爱。
由于水产品易受海、淡水域环境污染的 影响和药物在水产养殖中的大量使用, 因 此水产品安全性倍受国内外的关注。水 产品和人们的生活健康密切相关，所以 需要国家地方和行业制定相关标准来保 障水产品的质量安全。我国正在积极开 展渔业标准化体系建设，已经制定了相 关的标准。
第一法：分光光度法 (1)原理：样品中的组胺用正戊醇提取后，在弱碱性条件下与重氮 盐发生反应生产橙色的偶氮化合物，与标准系列比较定量。
(2)方法说明：适用于水产品等含有组胺的食品。
本方法的检出限为50mg/kg。
(3)样品前处理：秤取一定量绞碎并混匀的样品，加入三氯乙酸溶 液浸泡以提取组胺并沉淀蛋白质，过滤。吸取适量滤液，用氢氧 化钠溶液调制碱性，组胺游离，用正戊醇萃取游离组胺。吸取适 量正戊醇提取液，加盐酸至酸性，组胺成为盐酸盐而易溶于水溶 液，反萃取至盐酸溶液中，合并盐酸提取液并稀释定容。
(4)测定方法：将样品的盐酸提取液偶氮化后测定480nm的吸光度。 标准曲线法定量。
第二法：液相色谱法 （1）原理：水产品(鱼类及其制品、虾类及其制品)、肉类:试样 用5%三氯乙酸提取,正已烷去除脂肪,三氯甲烷-正丁醇(1+1)液液 萃取净化后,丹磺酰氯衍生,C18色谱柱分离,高效液相色谱-紫外检 测器检测,内标法定量。酒类(葡萄酒、啤酒、黄酒等)、调味品 (醋和酱油):试样用丹磺酰氯衍生,C18色谱柱分离,高效液相色谱紫外检测器检测,内标法定量。
4.4.2 标准的衍生:分别移取1mL生物胺标准系列溶液,置于10mL具塞试 管中,依次加入250μL内标使用液(100mg/L),以下操作同试样的衍生步骤。
衍5.测定生方法及标准曲线制作
色谱柱为C18柱(柱长250mm,柱内径4.6mm,柱填料粒径5μm),紫外 检测波长254nm,进样量20μL,柱温35℃,流动相 A为90%乙腈 /10%(含0.1%乙酸的0.01mol/L乙酸铵溶液),流动相 B为10%乙腈 /90%(含0.1%乙酸的0.01mol/L乙酸铵溶液),流速0.8mL/min。将试 样的衍生溶液注入高效液相色谱仪中,测得峰面积,以保留时间定性。 根据标准曲线得到待测液中各目标化合物的浓度。
5．2标准曲线的制作
将20μL系列混合标准工作液的衍生液分别注入高效液相色谱仪,测 得目标化合物的峰面积,以系列混合标准工作液的浓度为横坐标,以 目标化合物的峰面积与内标的峰面积的比值为纵坐标,绘制标准曲 线。
其他测定法：高效液相色谱-紫 外检测法
1)原理：高效液相色谱法由于其具有分析速度快、柱效高、检测灵敏度高、定量 分析 准确等特点, 基本取代了其他方法, 是目前生物胺含量分析测定的主要手段。 衍生方法主要有柱前衍生和柱后衍生, 常用的衍生化试剂有邻苯二甲醛、丹磺酰 氯、偶氮试剂和苯甲酰氯等, 邻苯二甲醛存在衍生物不稳定等不足, 苯甲酰氯不 溶于水, 衍生效果差, 偶氮显色法容易受到基质中杂质的干扰, 影响测定结果。 丹磺酰氯具有较理想的衍生效果和稳定时间。而有些标准中用盐溶液作为流动相, 会对分析柱造成损害。对高效液相色谱法测定水产品(鲭鱼)中组胺含量的试验方 法进行改进,建立一种提取方法简单、衍生物稳定、操作方便的检测方法。
(2)方法说明：适用于鱼和虾等具有有毒生物胺的水产品。 本方法的检出限为50mg/kg。 (3)样品前处理：称取2 g(精确至 0.001 g)已粉碎的样品于 50 mL刻度离心管中,
用移液枪加入10 mL的0.4mol/L 高氯酸溶液,涡旋提取2 min,上离心机于4000 r/min 离心5 min, 将上清液移入25 mL棕色容量瓶中。在下层的残渣中再加入10 mL的0.4 mol/L的高氯酸溶液, 涡旋提取2min,离心后转移上清液于容量瓶中,用 0.4mol/L 高氯酸溶液将其定容至刻度。
标准溶液配制：亚砷酸盐[AS(H)]标准储备液（00 mg/L,按AS计）：准确 称取三氧化二砷0.013 2 g,加 100g/L氢氧化钾溶液1mL和少量水溶解，转 人100mL容量瓶中，加人适量盐酸调整其酸度近中性， 加水稀释至刻度。 4°C保存，保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准 溶液物质。 25.4.2砷酸盐[As(V)]标准储备液（100mg/L，按AS计）：准 确称取砷酸二氢钾0.024 0 g，水溶解，转入100mL容量瓶中并用水稀释至 刻度。4C保存，保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证 书的 标准溶液物质。
5009.11-2014）
02 2、液相色谱-电感耦合等离子体质谱
法 （GB 5009.11-2014）
03
3、液相-原子荧光法（参考文献：卢 亭,夏慧丽,张今君.液相-原子荧光法测
定水产品中无机砷方法的研究[J].食品
研究与开发,2017,38(13):179-181）
第一法：液相色谱-原子荧光光 谱法
(4)测定方法：色谱柱: Waters C18柱(150 mm×4.6mm, 5μm); 流速:1.0mL/min; 柱温: 35 ℃; 进样量: 20μL; 检测器: 紫外 检测器; 检测波长: 254 nm; 流动相: A: 甲醇, B: 水; 梯度洗 脱。
无机砷
的测定法
无机砷测定法
01 1、液相色谱-原子荧光光谱法（GB
水产品主要安全问题
水组胺 产品
组胺是鱼体中游离组氨酸在组胺酸脱羧酶催化下,发
01 生脱羧反应而形成的一种胺类。通常是由某些特定
鱼种因时间/温度处理不当而形成的。组胺中毒是水 产食品存在的主要安全问题之一,世界各地尤其是沿
海地区组胺中毒事件时有发生。组胺危害是水产品
生产加工过程中较难控制的一类危害，因对其的控 制需贯穿于从原料到成品的水产加工全流程之中。
（2）范围：本标准规定了食品中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、 组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的测定方法。本标准适 用于酒类(葡萄酒、啤酒、黄酒等)、调味品(醋和酱油)、水产品 (鱼类及其制品、虾类及其制品)、肉类中生物胺的测定。
（3）检出限：20mg/kg
试样制备 4.1 试样制备
取水产品及肉类样品的可食部分约500g,充分匀质,均分成两份装入 洁净容器中,密封,于-20℃保存。
合物曾大量用于杀虫剂、杀菌剂、化妆品等领域。
工业废水、废气、含汞化合物中的汞会通过人类活
动进入到外界环境中，且会在食物链中逐渐富集。
目前每年仍有大量的各种形态的汞排放到外界环境
02 中，造成很大的污染环境中的汞污染物经过大气沉
降、水的流动等方式最终进入到地表水中，对水产 品养殖和生存环境造成很大的污染，养殖环境中各 种形态汞化合物很容易被水产品吸收和富集，严重 影响水产品质量，由于其在水产品中残留时间长， 并有可能通过食物链进行传递，进而对人类产生巨 大的危害。因此，对水产品中汞残留进行检测势在 必行。
组胺
的测定法
组胺测定法
01 1、分光光度法（GB/T 5009.45）
02 2、液相色谱法（GB5009.208—2016）
03
3、高效液相色谱-紫外检测法（参考 文献：徐丽,刘琳,王宗奇,孟慧琴,张雪
琰.高效液相色谱-紫外检测法测定水产
品中组胺含量[J].食品安全质量检测学
报,2014,5(12):3790-3794）
净4.3净化化 及萃取
4.3.1 除脂肪:移取上述试样提取液10mL于25mL具塞试管中,加入0.5g 氯化钠涡旋振荡至氯化钠完全溶解后加入10mL正己烷,涡旋振荡5min, 静置分层后弃去上层有机相,下层试样溶液加入10mL正己烷再除脂一 次。
4.3.2 萃取:移取5mL上述除脂肪后的试样溶液于10mL具塞离心管中, 用5mol/L氢氧化钠溶液(几滴)调节pH至12.0左右。加入5mL的正丁醇/ 三氯甲烷(1+1)混合溶液,涡旋振荡5min,5000r/min离心5min,转移上层 有机相于另一个10mL具塞离心管中,下层样液再萃取一次,合并萃取液, 用正丁醇/三氯甲烷(1+1)稀释至刻度。取5mL萃取液加入200μL盐酸 (1mol/L),混匀后40℃水浴下氮气吹干,加入1mL盐酸(0.1mol/L)涡旋振 荡,使残留物完全溶解,待衍生。
其他测定法：高效液相色谱-紫 外检测法
样品衍生：量取1 mL样品溶液于5 mL离心管中, 依次加入2 moL/L 氢氧化钠溶液100μL、饱和碳酸氢钠溶液300μL和10 mg/mL丹磺 酰氯溶液2 mL, 盖紧盖子, 在40℃下避光反应40min, 每5min 振 荡1次。反应完毕后, 加入浓氨水100μL 终止衍生化反应, 放置 30 min。用甲醇将其定容至刻度5 mL, 混合均匀, 过0.45μm的有 机滤膜, 待测。
(3)样品前处理： 称取约1.0g水产动物湿样（准确至0.001g)，置于50mL塑料离心管
中，加人20mL0.15mol/L 硝酸溶液，放置过夜。于90C恒温箱中热 浸提2.5h，每0.5h振摇1mm。提取完毕，取出冷却至室温， 8000 r/min离心15 min。取5 mL上清液置于离心管中，加人5 mL正己烷， 振摇1 min后，8000 r/min离心15min，弃去上层正己烷。按此过 程重复一次。吸取下层清液，经0.45μm有机滤膜过滤C18小柱净 化后进样。按同一操作方法作空白试验。
(1)原理：食品中无机砷经稀硝酸提取后，以液相色谱进行分离， 分离后的目标化合物在酸性环境下与KBH4 反应，生成气态砷化合 物，以原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。
(2)精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值 不得超过算术平均值的20%。检出限：0.03mg/kg
水无机砷 产品
砷元素广泛存在于自然界,砷与其化合物被运用在农
02 药、除草剂、杀虫剂中,对环境造成的污染越来越严
重。ຫໍສະໝຸດ Baidu些以各种形态进入海洋生态系统中的砷化合
物很容易进入水生生物组织中并在其中富集起来， 给水产品造成重大污染。因此,对水产品中砷的检测 十分重要。
水产品主要安全问题
水甲基汞 产品
01
汞（hg）及其化合物是环境中广泛存在的一类持久 性污染物，对人类健康造成很大的威胁，汞及其化
衍4.4 衍生生 及标准曲线制作
4.4.1 试样的衍生:在上述待衍生的试样溶液中依次加入1mL饱和碳酸氢 钠溶液、100μL氢氧化钠溶液(1mol/L)、1mL衍生试剂,涡旋混匀1min后 置于60 ℃恒温水浴中衍生15min,取出,分加入100μL谷氨酸钠溶液,振荡 混匀,60℃恒温反应15min。取出,冷却至室温,于每个离心管中加入1mL 水,涡旋混合1min,40℃水浴下氮吹除去丙酮(约1mL),加入0.5g氯化钠涡 旋振荡至氯化钠完全溶解后加入5mL乙醚,涡旋振荡2min,静置分层后,吸 出上层有机相(乙醚层),再萃取一次,合并乙醚萃取液,40℃水浴下氮气吹 干。加入1mL乙腈涡旋振荡使残留物完溶解,0.22μm 滤膜针头滤器过滤 于进样小瓶,待测定。
测定方法 （4)测定方法：原子荧光检测参考条件：负高压：320 V;砷灯总电流：90
mA;主电流/辅助电流：55/35;原子化方式：火焰原子化；原子化器 温度： 中温。载液：0%盐酸溶液，流速4mL/min;还原剂：30g/L硼氢化钾溶液， 流速4mL/min;载气流速： 400 mL/min;辅助气流速：400 mL/min。
4.2提取
准确称取已经绞碎或匀浆后的水产品、肉类10g(精确至0.01g),置 于100mL具塞锥形瓶中,加入500μL内标使用液 (1.0mg/mL)与样品 充分混匀,加入20mL5%三氯乙酸溶液和振荡提取30min,转移至 50mL具塞离心管中,5000r/min离心10min,转移上清液至50mL容量 瓶中,残渣用20mL5%三氯乙酸溶液再提取一次,合并上清液,用5% 三氯乙酸稀释至刻度,待净化。