替米考星纳米乳的制备及其质量评价
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取替米考星纳米乳 5 mL ,用蒸馏水稀释 5 倍 , 用激光粒度分析仪测定其粒径分布 。 1. 6 替米考星纳米乳的稳定性考察 1. 6. 1 外 观 肉眼观察纳米乳的外观 ,若澄清透 明 ,表明稳定性良好 ;若出现浑浊 、絮状沉淀或分层 , 则表明不稳定 。 1. 6. 2 高速离心试验 将纳米乳置于离心管中 ,放
Abstract :【Objective】Tilmico sin Nanoemulsio n was p repared and it s qualit y was evaluated.【Met hod】 The p reparatio n of t he Tilmico sin Nanoemul sio n was optimized by st udying t he p seudoternary p hase dia2 gram. Tween280 ,et hanol ,IPM and distilled water were selected to p repare tilmico sin nanoemul sio n. It s co n2 figuratio n ,p hysical stabilit y and p harmacy in vit ro were evaluated respectively.【Result】The optimal p re2 scriptio n of tilmico sin nanoemul sio n was tilmico sin 5. 5 % ,et hanol 18. 5 % ,t ween280 27. 5 % , IPM 5 % ,dis2 tilled water 43. 5 %. The shape of tilmico sin nanoemul sio n was sp herical under TEM ,wit h t he diameter of abo ut 10 - 25 nm. Tilmico sin nanoemul sio n was stable after high speed cent rif uge and reserving at - 4 ℃, roo m temperat ure and 60 ℃. The M IC of Tilmico sin nanoemul sio n o n Pasteu rel l a、S t re ptococcus a g al acti2 ae 、S t a p h y lococcus 、enterop at hogenic E. col i and S al m onel l a was respectively 1. 95 , 3. 9 , 7. 81 , 3. 9 , 1. 95 μg/ mL .【Co nclusio n】The Tilmico sin nanoemul sio n was a kind of clarit y solutio n wit h very good stabilit y. The antibacterial effect of Tilmico sin Nanoemulsio n o n above bacteria in vit ro was remarkable.
1 材料与方法
1. 1 材 料 1. 1. 1 菌 种 巴氏杆菌 、无乳链球菌 、金黄色葡 萄球菌 、致病性大肠杆菌和沙门氏菌 ,由西北农林科 技大学预防兽医学实验室提供 。 1. 1. 2 主要试剂 吐温280 ,化学纯 ,天津市登峰化 学试剂厂生产 ;聚氧乙烯氢化蓖麻油 ( R H240) ,上海 昌为医药辅料技术有限公司生产 ;乙酸乙酯 、无水乙 醇 、丙二醇和 1 ,32丁二醇均为分析纯 ,西安化学试 剂厂生产 ;肉豆蔻酸异丙酯 ( IPM) ,药用级 ,陕西省 医药公司生产 ;亚甲基蓝和苏丹红 ,北京化学试剂公 司生产 ;替米考星原料药 、替米考星溶液 ,山东齐鲁 制药有限公司生产 ;酒石酸泰乐菌素 ,沈阳中亚兽药 有限公司生产 。 1. 1. 3 主要仪器 J EM1230 型透射电子显微镜 , 日本日立电子公司生产 ; T GL216B 型高速离心机 ,
湖南星科科学仪器有限公司生产 ; S KP02. 420 电热 恒温培养箱 ,黄山市恒丰医疗器械有限公司生产 ; XSZ2HS7 偏光显微镜 ,重庆光学仪器厂生产 ; Zetas2 izer Nano ZS 型激光粒度分析仪 ,英国 Malvern In2 st rument 公司生产 。 1. 2 替米考星纳米乳配方的筛选
Leabharlann Baidu
【结论】替米考星纳米乳为澄清透明的淡黄色液体 ,稳定性良好 ,对巴氏杆菌 、无乳链球菌 、金黄色葡萄球菌 、致病性大
肠杆菌 、沙门氏菌均有较强的抑菌和杀菌作用 。
[ 关键词 ] 替米考星 ;纳米乳 ;质量评价
[ 中图分类号 ] S859. 5 + 3
[ 文献标识码 ] A
[文章编号 ] 167129387 (2009) 0420042205
43. 5 %(各组分含量均为质量分数) 。替米考星纳米乳在透射电镜下呈圆形 ,激光粒度分析仪测定其粒径为 10～25
nm 。经高速离心和在 - 4 ℃、室温 、60 ℃条件下留样观察 ,外观均未见发生变化 。替米考星纳米乳对巴氏杆菌 、无乳 链球菌 、金黄色葡萄球菌 、致病性大肠杆菌 、沙门氏菌的最小抑菌浓度分别是 1. 95 ,3. 9 ,7. 81 ,3. 9 和 1. 95 μg/ mL 。
目前 ,国内用纳米乳载体对传统的 、难溶的 、药 效低的药物进行改造的研究很多 ,如孙红武等[7] 制 备的盐酸小檗碱纳米乳 ,中国药科大学赵建等[8] 制 备的胰岛素纳米乳 ,宋梅等[9] 制备的水飞蓟宾纳米 乳 ,沈阳药科大学毛世瑞等[10] 制备的硫酸沙丁胺醇 油包水型口服纳米乳等 ,但目前尚未见关于替米考 星纳米乳研制方面的报道 。为此 ,本试验通过伪三 元相图法优选处方 ,将替米考星制成了一种纳米乳 , 并对其理化性质及体外药效进行了考察 ,以期为替 米考星纳米乳在兽医临床中的应用提供参考 。
(西北农林科技大学 动物医学院 ,陕西 杨凌 712100)
[ 摘 要 ] 【目的】制备替米考星纳米乳 ,并进行质量评价 。【方法】通过伪三元相图法优选处方 ,以吐温280 为
表面活性剂 、无水乙醇为助表面活性剂 、IPM 为油相制备替米考星纳米乳 ,并对其形态特征 、稳定性和体外药效进行
评价 。【结果】替米考星纳米乳的最佳处方是 :替米考星 5. 5 % ,无水乙醇 18. 5 % ,吐温280 27. 5 % , IPM 5 % ,蒸馏水
E2mail :oywq506 @sina. co m
第4期
李向辉等 :替米考星纳米乳的制备及其质量评价
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通过内核油相和表面活性剂烃链两部分的增溶 ,可 大大提高难溶性药物在水中的溶解性 ;其粒径小且 均匀 ,有利于促进药物的吸收 ,并可提高药物的生物 利用度等[3 ] 。
替米考星是一种半合成的大环内酯类畜禽专用 广谱抗生素 ,为泰乐菌素的衍生物 ,具有同泰乐菌素 相似的抗菌谱 ,对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性 菌 、霉形体 、螺旋体等均有抑制作用[4] ,尤其对胸膜 肺炎放线杆菌 、溶血性巴氏杆菌及畜禽霉形体作用 最强[5] 。替米考星的主要靶器官为肺和乳房 ,药物 浓度高 ,因此主要用于畜禽呼吸道感染和奶牛乳房 炎的治疗[6] 。然而替米考星在水中溶解度低 ,市场 上主要制剂是其磷酸盐 ,内服后易被胃酸破坏 ,吸收 不完全 ,生物利用度低 ,体内半衰期短 。提高替米考 星的生物利用度 、靶向性 ,延长其在体内的半衰期 , 增强疗效 ,已成为当前替米考星高效利用研究的重 要课题之一 。
Prep aration and quality evaluation of tilmico sin nanoemulsion
L I Xiang2hui ,OU YAN G Wu2qing , YAN G Xue2feng ,ZHAO Yuan ,ZHAN G Wei
( Colle ge of veteri nary medici ne , N ort hwest A & F Uni versit y , Yan gli n g , S haanx i 712100 , Chi na)
Key words : tilmico sin ; nanoemul sio n ;qualit y evaluatio n
纳米乳是一种由油 、水 、表面活性剂和助表面活 性剂 4 部分组成的胶体分散系统 ,其粒径为 10 ～ 100 nm ,液滴多为球形 ,大小均匀 ,透明或半透明 ,
具有热力学稳定性 ,热压灭菌或高速离心稳定不分 层 ,制备条件温和 ,配方合适就可自发形成[122] 。纳 米乳的优点是物理稳定性好 ,可提高药物的稳定性 ;
44
西北农林科技大学学报 (自然科学版)
第 37 卷
入高速离心机 ,于 10 000 r/ min 离心 20 min ,观察 是否有沉淀 、浑浊 、分层等现象发生 。若外观透明 、 流动性良好 ,则用 100 倍重力加速度离心分离 5 min 后观察 ,若不发生相分离 ,即为稳定纳米乳[15] 。 1. 6. 3 留样观察试验[16] 制备 3 批替米考星纳米 乳 ,封于 5 mL 安瓿瓶中 ,分别置于 - 4 ℃冰箱 、室温 和 60 ℃恒温烘箱 ,分别于 0 ,3 ,6 个月时 ,取样品进 行外观考察和 p H 测定 。 1. 7 替米考星纳米乳的体外抗菌活性测定
利用伪三元相图法制备替米考星纳米乳 。分别 以吐温280 、R H240 为表面活性剂 ,无水乙醇 、丙二 醇 、1 ,32丁二醇为助表面活性剂 , IPM 、乙酸乙酯为 油相 ,使表面活性剂/ 助表面活性剂 ( Km = 3 ∶2) 与 油相分别按照 9 ∶1 ,8 ∶2 ,7 ∶3 ,6 ∶4 ,5 ∶5 ,4 ∶6 , 3 ∶7 ,2 ∶8 和 1 ∶9 的比例 (质量比) 变化 。精密称 取各组分 ,混合搅拌均匀 ,然后边加蒸馏水边搅拌 , 观察体系由澄清变为浑浊或由浑浊变为澄清的现 象 ,记录临界点时各组分的质量分数 ,以表面活性剂 和助表面活性剂作为三元相图的 1 个顶点 ( S) ,油相 和水分别为三元相图的另 2 个顶点 ( O , W) ,在伪三 元相图中绘制曲线 ,确定纳米乳区 ,根据各相图中纳 米乳区的大小 ,确定纳米乳的组分 。筛选出替米考 星含量最高且体系最稳定的配方 ,作为最佳配方 。 1. 3 替米考星纳米乳类型的鉴别[11 ]
参考文献[ 14 ] ,用透射电镜检测纳米乳的形态 , 取替米考星纳米乳适量 ,用蒸馏水稀释 1 倍后 ,滴在 覆有支持膜的铜网上 ,静置 10 min 后用滤纸片吸 干 ,再滴加 20 mg/ mL 磷钨酸溶液 (p H 为 7. 4) 于铜 网上负染 3 min ,自然挥干 ,在电镜下观察纳米乳液 滴的形态 。 1. 5 替米考星纳米乳的粒径分析
3 [ 收稿日期 ] 2008206210 [ 基金项目 ] 国家科技支撑计划项目 (2006BAD04A11) [ 作者简介 ] 李向辉 (1983 - ) ,男 ,河南洛阳人 ,在读硕士 ,主要从事新兽药开发研究 。E2mail : huiskys @163. co m [ 通信作者 ] 欧阳五庆 (1960 - ) ,男 ,陕西凤翔人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事新兽药开发 、细胞生物学和泌乳生理研究 。
采用离心法[12213] 对纳米乳的类型进行鉴别 。将 制备的纳米乳于 4 000 r/ min 离心 20 min ,观察是 否分层 ,如仍维持透明可判定为纳米乳 。纳米乳类 型的鉴别采用染色法 ,根据红色的油溶性染料苏丹 红 Ⅲ和蓝色的水溶性染料亚甲兰在纳米乳中扩散 的快慢来判断 ,如果蓝色的扩散速度大于红色 ,则纳 米乳为 O/ W 型 ;反之则为 W/ O 型 ,若二者速度相 同则为双连续型 。 1. 4 替米考星纳米乳的形态观察
第 37 卷 第 4 期 2009 年 4 月
西北农林科技大学学报 (自然科学版) Jo urnal of Nort hwest A &F U niversity (Nat . Sci. Ed. )
Vol. 37 No . 4 Ap r. 2009
替米考星纳米乳的制备及其质量评价 3
李向辉 ,欧阳五庆 ,杨雪峰 ,赵 元 ,张 伟
Abstract :【Objective】Tilmico sin Nanoemulsio n was p repared and it s qualit y was evaluated.【Met hod】 The p reparatio n of t he Tilmico sin Nanoemul sio n was optimized by st udying t he p seudoternary p hase dia2 gram. Tween280 ,et hanol ,IPM and distilled water were selected to p repare tilmico sin nanoemul sio n. It s co n2 figuratio n ,p hysical stabilit y and p harmacy in vit ro were evaluated respectively.【Result】The optimal p re2 scriptio n of tilmico sin nanoemul sio n was tilmico sin 5. 5 % ,et hanol 18. 5 % ,t ween280 27. 5 % , IPM 5 % ,dis2 tilled water 43. 5 %. The shape of tilmico sin nanoemul sio n was sp herical under TEM ,wit h t he diameter of abo ut 10 - 25 nm. Tilmico sin nanoemul sio n was stable after high speed cent rif uge and reserving at - 4 ℃, roo m temperat ure and 60 ℃. The M IC of Tilmico sin nanoemul sio n o n Pasteu rel l a、S t re ptococcus a g al acti2 ae 、S t a p h y lococcus 、enterop at hogenic E. col i and S al m onel l a was respectively 1. 95 , 3. 9 , 7. 81 , 3. 9 , 1. 95 μg/ mL .【Co nclusio n】The Tilmico sin nanoemul sio n was a kind of clarit y solutio n wit h very good stabilit y. The antibacterial effect of Tilmico sin Nanoemulsio n o n above bacteria in vit ro was remarkable.
1 材料与方法
1. 1 材 料 1. 1. 1 菌 种 巴氏杆菌 、无乳链球菌 、金黄色葡 萄球菌 、致病性大肠杆菌和沙门氏菌 ,由西北农林科 技大学预防兽医学实验室提供 。 1. 1. 2 主要试剂 吐温280 ,化学纯 ,天津市登峰化 学试剂厂生产 ;聚氧乙烯氢化蓖麻油 ( R H240) ,上海 昌为医药辅料技术有限公司生产 ;乙酸乙酯 、无水乙 醇 、丙二醇和 1 ,32丁二醇均为分析纯 ,西安化学试 剂厂生产 ;肉豆蔻酸异丙酯 ( IPM) ,药用级 ,陕西省 医药公司生产 ;亚甲基蓝和苏丹红 ,北京化学试剂公 司生产 ;替米考星原料药 、替米考星溶液 ,山东齐鲁 制药有限公司生产 ;酒石酸泰乐菌素 ,沈阳中亚兽药 有限公司生产 。 1. 1. 3 主要仪器 J EM1230 型透射电子显微镜 , 日本日立电子公司生产 ; T GL216B 型高速离心机 ,
湖南星科科学仪器有限公司生产 ; S KP02. 420 电热 恒温培养箱 ,黄山市恒丰医疗器械有限公司生产 ; XSZ2HS7 偏光显微镜 ,重庆光学仪器厂生产 ; Zetas2 izer Nano ZS 型激光粒度分析仪 ,英国 Malvern In2 st rument 公司生产 。 1. 2 替米考星纳米乳配方的筛选
Leabharlann Baidu
【结论】替米考星纳米乳为澄清透明的淡黄色液体 ,稳定性良好 ,对巴氏杆菌 、无乳链球菌 、金黄色葡萄球菌 、致病性大
肠杆菌 、沙门氏菌均有较强的抑菌和杀菌作用 。
[ 关键词 ] 替米考星 ;纳米乳 ;质量评价
[ 中图分类号 ] S859. 5 + 3
[ 文献标识码 ] A
[文章编号 ] 167129387 (2009) 0420042205
43. 5 %(各组分含量均为质量分数) 。替米考星纳米乳在透射电镜下呈圆形 ,激光粒度分析仪测定其粒径为 10～25
nm 。经高速离心和在 - 4 ℃、室温 、60 ℃条件下留样观察 ,外观均未见发生变化 。替米考星纳米乳对巴氏杆菌 、无乳 链球菌 、金黄色葡萄球菌 、致病性大肠杆菌 、沙门氏菌的最小抑菌浓度分别是 1. 95 ,3. 9 ,7. 81 ,3. 9 和 1. 95 μg/ mL 。
目前 ,国内用纳米乳载体对传统的 、难溶的 、药 效低的药物进行改造的研究很多 ,如孙红武等[7] 制 备的盐酸小檗碱纳米乳 ,中国药科大学赵建等[8] 制 备的胰岛素纳米乳 ,宋梅等[9] 制备的水飞蓟宾纳米 乳 ,沈阳药科大学毛世瑞等[10] 制备的硫酸沙丁胺醇 油包水型口服纳米乳等 ,但目前尚未见关于替米考 星纳米乳研制方面的报道 。为此 ,本试验通过伪三 元相图法优选处方 ,将替米考星制成了一种纳米乳 , 并对其理化性质及体外药效进行了考察 ,以期为替 米考星纳米乳在兽医临床中的应用提供参考 。
(西北农林科技大学 动物医学院 ,陕西 杨凌 712100)
[ 摘 要 ] 【目的】制备替米考星纳米乳 ,并进行质量评价 。【方法】通过伪三元相图法优选处方 ,以吐温280 为
表面活性剂 、无水乙醇为助表面活性剂 、IPM 为油相制备替米考星纳米乳 ,并对其形态特征 、稳定性和体外药效进行
评价 。【结果】替米考星纳米乳的最佳处方是 :替米考星 5. 5 % ,无水乙醇 18. 5 % ,吐温280 27. 5 % , IPM 5 % ,蒸馏水
E2mail :oywq506 @sina. co m
第4期
李向辉等 :替米考星纳米乳的制备及其质量评价
43
通过内核油相和表面活性剂烃链两部分的增溶 ,可 大大提高难溶性药物在水中的溶解性 ;其粒径小且 均匀 ,有利于促进药物的吸收 ,并可提高药物的生物 利用度等[3 ] 。
替米考星是一种半合成的大环内酯类畜禽专用 广谱抗生素 ,为泰乐菌素的衍生物 ,具有同泰乐菌素 相似的抗菌谱 ,对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性 菌 、霉形体 、螺旋体等均有抑制作用[4] ,尤其对胸膜 肺炎放线杆菌 、溶血性巴氏杆菌及畜禽霉形体作用 最强[5] 。替米考星的主要靶器官为肺和乳房 ,药物 浓度高 ,因此主要用于畜禽呼吸道感染和奶牛乳房 炎的治疗[6] 。然而替米考星在水中溶解度低 ,市场 上主要制剂是其磷酸盐 ,内服后易被胃酸破坏 ,吸收 不完全 ,生物利用度低 ,体内半衰期短 。提高替米考 星的生物利用度 、靶向性 ,延长其在体内的半衰期 , 增强疗效 ,已成为当前替米考星高效利用研究的重 要课题之一 。
Prep aration and quality evaluation of tilmico sin nanoemulsion
L I Xiang2hui ,OU YAN G Wu2qing , YAN G Xue2feng ,ZHAO Yuan ,ZHAN G Wei
( Colle ge of veteri nary medici ne , N ort hwest A & F Uni versit y , Yan gli n g , S haanx i 712100 , Chi na)
Key words : tilmico sin ; nanoemul sio n ;qualit y evaluatio n
纳米乳是一种由油 、水 、表面活性剂和助表面活 性剂 4 部分组成的胶体分散系统 ,其粒径为 10 ～ 100 nm ,液滴多为球形 ,大小均匀 ,透明或半透明 ,
具有热力学稳定性 ,热压灭菌或高速离心稳定不分 层 ,制备条件温和 ,配方合适就可自发形成[122] 。纳 米乳的优点是物理稳定性好 ,可提高药物的稳定性 ;
44
西北农林科技大学学报 (自然科学版)
第 37 卷
入高速离心机 ,于 10 000 r/ min 离心 20 min ,观察 是否有沉淀 、浑浊 、分层等现象发生 。若外观透明 、 流动性良好 ,则用 100 倍重力加速度离心分离 5 min 后观察 ,若不发生相分离 ,即为稳定纳米乳[15] 。 1. 6. 3 留样观察试验[16] 制备 3 批替米考星纳米 乳 ,封于 5 mL 安瓿瓶中 ,分别置于 - 4 ℃冰箱 、室温 和 60 ℃恒温烘箱 ,分别于 0 ,3 ,6 个月时 ,取样品进 行外观考察和 p H 测定 。 1. 7 替米考星纳米乳的体外抗菌活性测定
利用伪三元相图法制备替米考星纳米乳 。分别 以吐温280 、R H240 为表面活性剂 ,无水乙醇 、丙二 醇 、1 ,32丁二醇为助表面活性剂 , IPM 、乙酸乙酯为 油相 ,使表面活性剂/ 助表面活性剂 ( Km = 3 ∶2) 与 油相分别按照 9 ∶1 ,8 ∶2 ,7 ∶3 ,6 ∶4 ,5 ∶5 ,4 ∶6 , 3 ∶7 ,2 ∶8 和 1 ∶9 的比例 (质量比) 变化 。精密称 取各组分 ,混合搅拌均匀 ,然后边加蒸馏水边搅拌 , 观察体系由澄清变为浑浊或由浑浊变为澄清的现 象 ,记录临界点时各组分的质量分数 ,以表面活性剂 和助表面活性剂作为三元相图的 1 个顶点 ( S) ,油相 和水分别为三元相图的另 2 个顶点 ( O , W) ,在伪三 元相图中绘制曲线 ,确定纳米乳区 ,根据各相图中纳 米乳区的大小 ,确定纳米乳的组分 。筛选出替米考 星含量最高且体系最稳定的配方 ,作为最佳配方 。 1. 3 替米考星纳米乳类型的鉴别[11 ]
参考文献[ 14 ] ,用透射电镜检测纳米乳的形态 , 取替米考星纳米乳适量 ,用蒸馏水稀释 1 倍后 ,滴在 覆有支持膜的铜网上 ,静置 10 min 后用滤纸片吸 干 ,再滴加 20 mg/ mL 磷钨酸溶液 (p H 为 7. 4) 于铜 网上负染 3 min ,自然挥干 ,在电镜下观察纳米乳液 滴的形态 。 1. 5 替米考星纳米乳的粒径分析
3 [ 收稿日期 ] 2008206210 [ 基金项目 ] 国家科技支撑计划项目 (2006BAD04A11) [ 作者简介 ] 李向辉 (1983 - ) ,男 ,河南洛阳人 ,在读硕士 ,主要从事新兽药开发研究 。E2mail : huiskys @163. co m [ 通信作者 ] 欧阳五庆 (1960 - ) ,男 ,陕西凤翔人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事新兽药开发 、细胞生物学和泌乳生理研究 。
采用离心法[12213] 对纳米乳的类型进行鉴别 。将 制备的纳米乳于 4 000 r/ min 离心 20 min ,观察是 否分层 ,如仍维持透明可判定为纳米乳 。纳米乳类 型的鉴别采用染色法 ,根据红色的油溶性染料苏丹 红 Ⅲ和蓝色的水溶性染料亚甲兰在纳米乳中扩散 的快慢来判断 ,如果蓝色的扩散速度大于红色 ,则纳 米乳为 O/ W 型 ;反之则为 W/ O 型 ,若二者速度相 同则为双连续型 。 1. 4 替米考星纳米乳的形态观察
第 37 卷 第 4 期 2009 年 4 月
西北农林科技大学学报 (自然科学版) Jo urnal of Nort hwest A &F U niversity (Nat . Sci. Ed. )
Vol. 37 No . 4 Ap r. 2009
替米考星纳米乳的制备及其质量评价 3
李向辉 ,欧阳五庆 ,杨雪峰 ,赵 元 ,张 伟