莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立

莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立

刘道峰;邓省亮;赖卫华;夏骏

【摘要】A composition,with a stable character and uniform size,and which contains fluorescent microspheres as a novel label, was obtained successfully by a EDC one-step method. A fluorescent lateral flow assay for detecting ractopamine which has high sensitivity(LOD available is 2. 5

ng/mL) , satisfying specificity and a wide range for detecting was developed based on this composition as probe. The method of fluorescent microspheres lateral flow assay is more sensitive than that of colloidal gold lateral flow assay. The novel fluorescent microspheres do contribute to improve the sensitivity of immu-nochromatographic assay.%以荧光微球作为新型标记物,采用EDC法进行偶联,制备莱克多巴胺抗体荧光微球复合物,复合物粒度均一、性质稳定,并以之为探针建立莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法,检测限为2.5 ng/mL,且特异性强、检测范围宽.与胶体金免疫层析方法相比,荧光微球免疫层析方法的灵敏度更高,新型的荧光微球可以提高免疫层析方法的灵敏度.【期刊名称】《食品与机械》

【年(卷),期】2012(028)001

【总页数】5页(P73-77)

【关键词】荧光微球;莱克多巴胺;免疫层析;检测

【作者】刘道峰;邓省亮;赖卫华;夏骏

【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;江西省科学院微生物研究所,江西南昌330029;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;江西省兽药饲料监察所,江西南昌 330029

【正文语种】中文

莱克多巴胺（ractopamine，Rac）是一种属于苯胺类的β－受体激动剂，主要以盐酸盐形式存在。其具有重新分配机体营养、抑制脂肪沉积、提高蛋白质含量、增加酮体瘦肉率、改善肉质以及促进动物生长的作用［1－3］。因此，近年来在经济利益的驱使下，大量莱克多巴胺被滥用于畜牧业和养殖业。人体摄入Rac的量过大时，会导致一系列不良反应，主要有肌肉震颤、心跳和呼吸加快等，严重的会危害生命。鉴于此，许多国家已经禁止将莱克多巴胺作为饲料及饲料添加剂使用。如欧盟于1996年便明令禁止在畜牧生产中使用包括莱克多巴胺在内的所有β－肾上腺素兴奋剂类药物，中国农业部亦于2002年明确将其列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》。

目前，检测莱克多巴胺比较经典的方法有高效液相色谱－质谱联用法（HPLC－MS）［4］、气相色谱－质谱联用法（GC－MS）［5］、高效液相色谱法（HPLC）［6］，这些都是比较传统的办法，亦是目前的确证方法［7，8］。另外，目前常用的还有酶联免疫（ELISA）［9］的方法。但由于以上方法均需先进检测仪器、检测费用昂贵、步骤繁琐、耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的大通量快速筛查检测。因此，研究莱克多巴胺的快速筛查方法有重要的意义。

荧光微球（fluorescent microspheres，FMs）是指将荧光染料通过物理和化学等方法吸附或包埋到粒子内而形成的，直径在纳米至微米级（0.01～10μm）范围内，受激发光源激发能发出荧光的固体微粒。相比胶体金等传统标记物（须大量聚

集才会被辨别出［10］），它的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以

荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限。在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性［11］。形成微球后染料荧光猝灭大大减少，发射强

而稳定，且基本不受外界环境介质变化的影响［12］。因此，荧光微球作为标记

物的免疫层析技术有较高的研究价值与前景。本试验以荧光微球作为标记物，初步建立了一种快速、灵敏的现场检测方法。

莱克多巴胺、西马特罗、特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、OVA：美国Sigma公司；

BSA：瑞士Roche公司；

1－乙基－（3－二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺（EDC）：上海国药集团化学试剂

有限公司；

NC膜：CN140，德国Sartorious公司；

荧光微球（52.9 mg／m L，表面羧基400 nmol／mg）、Anti－Rac单克隆抗体、Rac全抗原、胶体金、免疫微球复溶液：江西中德生物工程有限公司。

点喷系统：BIO－DOT XYZ－3050，美国BIO－DOT公司；

荧光分光光度计：F4500，日本Hitachi公司；

超细微粒粒度分析仪：ZLS Nicomp380，美国PSS公司；

水处理系统：Milli－Q，美国Millipore公司；

可编程切条机：HGS－201，浙江杭州峰航科技有限公司；

高速冷冻离心机：H－2050R，湖南长沙湘仪离心机仪器有限公司；

磁力搅拌器，HJ－6，江苏金坛吉特仪器厂；

真空干燥箱：DZX－6090B，上海福玛实验设备有限公司。

1.3.1 免疫微球合成及表征以5 m L标记体系分别标记30，40，50μg／mg（抗