食品大肠菌群的测定(平板计数法).
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大肠菌群计数
1ml
1ml
1ml
生理 盐水
1:100
1:1000 1ml
1:10000 1ml 1ml
1:10
25g或 ml样品
1ml
VRBA的主要成分 乳糖、胆盐、结晶紫、 中性红及细菌生长所 必需的营养成分如:蛋 白胨、酵母膏等。 结晶紫和中性红为VRBA 的指示剂系统，在酸性条 件下为紫红色。 大肠菌群分解乳糖所 产生的酸与胆盐结合， 可形成沉淀。
• 任务七 结果报告 • 经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比 乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为 每g (mL)样品中大肠菌群数 。 • 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典 型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6 个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
任务四 平板制备
选择适宜的稀释样液 根据对标本情况的估计,选择 3 个适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于灭菌平皿内。 待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作侵入无菌培 养皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，利用培养基冲 散菌液，混匀。冷却凝固后，再在表面加3-4mL培养基。
从样品稀释到平板 涂布要求在15min 内 完成。
注意事项 • 1、选择稀释度时，应以对含菌量的估计为 依据，具体情况所选稀释度不同。 • 2、两种检测方法的比较
• 平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更 精确。 • 适合用于污染比较严重的样品，但对于污 染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。
Hale Waihona Puke Baidu
加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基 12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。 挑选菌落接种BGLB
典型菌落为紫红色 , 菌 落周围有红色的胆盐沉 淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。
实践操作
任务一 仪器试剂准备
任务二 仪器试剂灭菌
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？ ⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL， 放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的 均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁 徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 （注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使 之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按 上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次, 即换用1支1mL灭菌吸管。
任务五 典型和可疑菌落计数
• 选择菌落数在15~150之间的平板，分别计 数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 • 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形 成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
• 任务六 证实试验
• 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和 可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进 行证实试验。 • BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大 肠菌群阳性菌落。
1ml
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生理 盐水
1:100
1:1000 1ml
1:10000 1ml 1ml
1:10
25g或 ml样品
1ml
VRBA的主要成分 乳糖、胆盐、结晶紫、 中性红及细菌生长所 必需的营养成分如:蛋 白胨、酵母膏等。 结晶紫和中性红为VRBA 的指示剂系统，在酸性条 件下为紫红色。 大肠菌群分解乳糖所 产生的酸与胆盐结合， 可形成沉淀。
• 任务七 结果报告 • 经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比 乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为 每g (mL)样品中大肠菌群数 。 • 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典 型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6 个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
任务四 平板制备
选择适宜的稀释样液 根据对标本情况的估计,选择 3 个适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于灭菌平皿内。 待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作侵入无菌培 养皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，利用培养基冲 散菌液，混匀。冷却凝固后，再在表面加3-4mL培养基。
从样品稀释到平板 涂布要求在15min 内 完成。
注意事项 • 1、选择稀释度时，应以对含菌量的估计为 依据，具体情况所选稀释度不同。 • 2、两种检测方法的比较
• 平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更 精确。 • 适合用于污染比较严重的样品，但对于污 染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。
Hale Waihona Puke Baidu
加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基 12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。 挑选菌落接种BGLB
典型菌落为紫红色 , 菌 落周围有红色的胆盐沉 淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。
实践操作
任务一 仪器试剂准备
任务二 仪器试剂灭菌
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？ ⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL， 放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的 均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁 徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 （注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使 之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按 上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次, 即换用1支1mL灭菌吸管。
任务五 典型和可疑菌落计数
• 选择菌落数在15~150之间的平板，分别计 数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 • 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形 成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
• 任务六 证实试验
• 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和 可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进 行证实试验。 • BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大 肠菌群阳性菌落。