微生物的纯种分离培养及接种技术

五.思考题
1 分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎 分离活性污泥为什么要稀释水样？ 样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养？ 样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养？ 2 用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从 用一根无菌吸管取几种浓度的水样时， 哪一个浓度开始？为什么？ 哪一个浓度开始？为什么？
超过试管一半。
（二）微生物的分离、培养及形态观察
1. 平板划线分离法
(1) 倒平板: 将融化并冷至50℃的细菌培养基倒约 倒平板: 将融化并冷至50℃ 15~20ml于无菌培养皿中 15~20ml于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之 于无菌培养皿中， 均匀。冷后成平板。（3个） 均匀。冷后成平板。（ 。（3 (2) 划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取 划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环， 一环菌液（原污水）在平板上划线。 一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如 下三种： 下三种： 划线完毕后 盖上皿盖， 盖上皿盖，倒置 37℃ 于37℃恒温箱中 培养48小时后观 培养48小时后观 察结果。 察结果。
三．操作方法及步骤
（二）其他一些接种的操作技术 1．斜面接种技术 2．液体接种 3．由液体培养基接种到液体培养基 4．穿刺接种
四、实验报告Hale Waihona Puke Baidu求
1) 实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日 实验名称，学生姓名，学号， 期 2) 实验目的和要求 3) 实验仪器，设备和材料 实验仪器， 4) 实验原理 5) 实验步骤 6) 实验原始记录 7) 实验数据计算结果 8) 实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思 实验结果分析， 考题， 考题，写心得体会
三. 实验内容
（一）培养基的制备及灭菌 1. 玻璃器皿的包扎与灭菌 六套培养皿一组, 用报纸包装。 （1） 六套培养皿一组, 用报纸包装。 取四支吸量管， （2） 取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用 长报纸条包扎。 长报纸条包扎。 干热灭菌:上述玻璃器皿在160 烘箱内2 （3） 干热灭菌:上述玻璃器皿在160°C烘箱内2小 时。 2.无菌水的制备 2.无菌水的制备 支试管中各装入9ml自来水 塞上硅胶塞, 自来水， 在3支试管中各装入9ml自来水，塞上硅胶塞, 同下 述培养基一起用高压蒸汽灭菌。 述培养基一起用高压蒸汽灭菌。
3. 培养基的制备
⑴ 称量：牛肉膏 称量：
蛋白胨 NaCl 琼脂 自来水 0.75g 0.75g 1.5g 0.75g 3g 150ml 溶化：用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水。 ⑵ 溶化：用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水。
⑶ 调pH值： 溶液稍冷后用pH试纸、10% NaOH或10%HCl pH值 溶液稍冷后用pH试纸 试纸、 NaOH或10%HCl
1.无菌培养皿（直径90mm），无菌吸管， 1.无菌培养皿（直径90mm），无菌吸管， ），无菌吸管 无菌培养皿 无菌锥形瓶，无菌试管， 管无菌水（ 无菌锥形瓶，无菌试管，5管无菌水（每管 9ml灭菌过的自来水 灭菌过的自来水）。 有9ml灭菌过的自来水）。 2.营养琼脂培养基（已灭菌的），活性污泥。 2.营养琼脂培养基 已灭菌的），活性污泥。 营养琼脂培养基（ ），活性污泥 3,接种环，酒精灯，恒温箱，等。 3,接种环 酒精灯，恒温箱， 接种环，
pH在7.6左右 左右。 调整溶液 的 pH在7.6左右。 分装：试管4支各装其高度1/5的溶液 其余溶液装锥形瓶。 的溶液， ⑷ 分装：试管4支各装其高度1/5的溶液，其余溶液装锥形瓶。
⑸ 加塞包扎 ：锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。 锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。 高压蒸汽灭菌）1.05kg/cm (103kPa)、 ⑹ 湿热灭菌 ： （高压蒸汽灭菌）1.05kg/cm2(103kPa)、 121℃ 121℃灭菌 20min。 20min。 搁置斜面： 试管培养基冷至50 时斜搁使斜面长度不` ⑺ 搁置斜面： 试管培养基冷至50℃时斜搁使斜面长度不`
实验四
微生物的纯种分离培养 及接种技术
一．实验目的
通过学习学习微生物的纯 种分离，培养和接种技术， 进而学会微生物生理生化 反应的实验，为废水处理 服务。在水处理的细菌检 查中，细菌的分离，培养 和接种也是一个重要的环 节。微生物的纯种分离的 方法有两种：稀释平板法 和平板划线法。
二. 实验器材
2.稀释平板分离法 2.稀释平板分离法 (1) 取样 … (2) 稀释水样 以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管 和无菌水将10 倍的水样稀释至10 和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。 (3) 平板制作 将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓 将三套无菌培养皿编号， 度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基， 度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基， 待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 养皿中， 待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 入培 养皿中， 马上将培养皿平 放桌上 轻轻转 动使之混合均匀， 动使之混合均匀， 成平板。 冷却后 成平板。 倒置， 37℃ 倒置，于 37℃培 样 品 48小时后观察 养48小时后观察 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 结果。 结果。