EM菌活菌总数检测方法

活菌数的检测方法
1主题内容与适用范围
本方法规定了活菌总数的测定方法；
本方法适用于EM菌中活菌总数。

2方法提要
活菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分，培养温度和时间、pH、需
氧性质等)所得1mL水样所含菌落的总数。

3 培养基与试剂
3.1 营养琼脂成分
LB培养基：(用于检测酵母菌数)
蛋白胨1%，酵母膏0.5%，NaCl 1%，琼脂2%。

121℃，30min灭菌。

MRS培养基：(用于检测乳酸菌数)
葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏1%，乙酸钠0.5%，Tween-80 0.2%，柠檬酸铵0.2%，K2HPO4 0.2%，MgSO4·7H2O 0.06%，MnSO4·H2O 0.02%，pH 6.5，琼脂2%，115℃，30min灭菌。

3.2 制法: 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.2，分装于玻璃容器中
(如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备
用。

3.3生理盐水的制备：按总体积的0.9%称量NaCl并混合均匀，然后用移液枪或
移液管吸取9ml生理盐水加入到试管中，并在121℃灭菌20min备用。

4 仪器
高压蒸汽灭菌器，干热灭菌箱，培养箱，36±1℃，电炉，天平，冰箱，
pH计，灭菌试管，平皿(直经9cm)、刻度吸管等。

5活菌计数方法
5.1 固体样品取5.0g，溶于95mL蒸馏水(此时稀释20倍)，加入适量已灭菌玻璃珠，于200rpm摇床中振荡20min；液体样品直接吸取1ml样品液至装有9ml无菌水的试管中进行梯度稀释。

5.2用移液枪从锥形瓶取1ml样品液至装有9ml无菌水的试管中，逐步稀释至适当梯度。

5.3 吸取0.2mL适当稀释梯度的菌液放入对应平板中，用已灭菌的涂布棒来回涂匀。

5.4 涂匀的平板置于30℃培养箱中培养20~30h，待长出清晰可见的菌落，进行计数。

6菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

在记
下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。

在求同
稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无
片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。

若片状菌落不到平皿一半，而其余
一半中菌落数发布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2 以代表全皿菌落数。

然后再
求该稀释度的平均菌落数。

7 不同稀释度的选择及计数方法
7.1 首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。

7.2有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数。

若大于2 则报告其中稀释度较小的菌落总数。

若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数。

7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300
的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

7.6 若所有稀释度的均无菌落生长，则以〈1乘以稀释倍数报告之。

7.7 菌落计数的报告: 菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。