食源性阪崎肠杆菌研究进展

食源性阪崎肠杆菌研究进展

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）属肠杆菌科，是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性菌[1]，一直以来被称为黄色阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae），于1980年以日本细菌学家Riichi Sakazakii的名字命名[2]。由于阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和败血症，并且可能引起神经系统后遗症和死亡，近年来已经受到了研究者的广泛关注[3]。目前，有关阪崎肠杆菌的污染来源还尚不清楚，有研究认为婴儿配方奶粉是新生儿阪崎肠杆菌感染的主要感染源[4]。

1阪崎肠杆菌的生物学特性

1.1 菌落培养特性

阪崎肠杆菌属兼性厌氧菌，对营养要求不高，能在营养琼脂、血平板、麦康凯琼脂、TSA、BHI琼脂和伊红美兰琼脂等多种培养基上生长繁殖。阪崎肠杆菌在TSA、BHI琼脂和血平板上培养48h-72h后能长出黄色菌落，在25℃培养比36℃培养时黄色色素产生更显著，且株与株之间黄色色素产生水平也存在差异。Farmer等[5]发现阪崎肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（violet red bile glucose agar,VRBGA）平板上首次划线分离时，生长24h后可生成2种或2种以上的菌落形态，一种是呈干燥或粘液样，周边呈放射状，用接种环触碰可发现菌落极富弹性；另一种是典型的光滑型菌落，极易被接种环移动，且该菌在肉汤培养基中生长呈团块或沉淀状，但目前还不清楚菌落特征差别是否与其毒性有关。

1.2 生理生化特性

阪崎肠杆菌与阴沟肠杆菌的生化反应有许多相似的地方，两者有31%-49%的DNA序列同源性，G+C含量为57%[5]。为了对阪崎肠杆菌进行更深入的研究，Muytjens 等[6]对229株肠杆菌进行酶学研究，结果发现阪崎肠杆菌在α-葡萄糖苷酶和磷酰胺酶上与其他肠杆菌存在明显的差异，阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶表现为阳性，并缺少磷酰胺酶活，因此将α-葡萄糖苷酶阳性认为是快速检测阪崎肠杆菌的可靠方法。而Aldova 等和POSTUOA[7]研究认为阪崎肠杆菌具有产生吐温80酯酶的能力，所以将吐温80酯酶活性测定作为其鉴定依据。另外，阪崎肠杆菌还具有氧化酶阴性、过氧化酶阳性、D-山梨醇阴性和细胞外DNAse阳性等多种特征。

1.3 阪崎肠杆菌的抗性

早期研究认为婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染与该菌的高度耐热性有关[8]，而抗性研究发现其热抗性并不足以经过标准巴氏消毒步骤后存活，但它具有更高的抵抗干燥和渗透压的能力[9]。

2 阪崎肠杆菌研究进展

2.1 传统检测方法

目前，国内对阪崎肠杆菌进行检测时常用的方法主要有两种：

2.1.1 阪崎肠杆菌定量检验（MPN法）

该方法主要是依据美国食品药品管理局（FDA）推荐的检测程序“婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数”进行。用“三管法”增菌可检测样品中微量的阪崎肠杆菌并定量，检测时至少需要样品333g。具体步骤为：无菌称取样品100g、10g和1g各三份，分别稀释成1:10的溶液（用蒸馏水或蛋白胨缓冲液稀释），取10ml混合液到90ml肠杆菌增菌肉汤中进行增殖培养，直接取0.1ml增菌液涂布于平板培养或者用0.01ml菌液划线培养或者去1ml的增

菌液倒平板培养，采用VRBGA培养基在36℃过夜进行选择培养，再挑取5个可疑菌落到胰蛋白酶大豆琼脂培养基上25℃培养48h-72h，挑取黄色菌落，用API 20E生化鉴定试剂盒或VITEK生化鉴定系统进行生化鉴定，同时进行氧化酶试验。

2.1.2 DFI法

该方法是在FDA法基础上的改进，主要是利用α-葡萄糖苷酶水解XαGLC，释放糖苷配基5-溴-4-氯-吲哚，该糖苷配基在氧存在时形成色素溴-氯-吲哚，使菌落呈现特异性的蓝绿色的特性，在TSA培养基中加入5-溴-4-氯-吲哚-α-D-吡喃葡萄苷（XαGLC）作为发色集团，组成显色培养基，成为DFI琼脂。检测时取0.1mlEE（肠道菌增菌肉汤）肉汤增菌液涂布DFI平板，36℃培养24h，比VRBGA提高了检测的特异性。

当然，国内也有不少学者进行了一些相对快速的传统检验方法尝试，如李洁莉等[10]应用VITEK全自动微生物鉴定系统对人工污染的婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌进行检测，获得了与FDA推荐的API 20E生化鉴定方法相一致的结果；孙霞等[11]利用测试片法实现了乳品阪崎肠杆菌的快速检测。李兆辉等[12]、赵贵明等[13]也都从不同角度介绍了阪崎肠杆菌的性状和检测方法，为阪崎肠杆菌的检测提供了一定的借鉴。

2.2 分子生物学检测法

随着分子生物学技术的飞速发展，阪崎肠杆菌传统检测方法已经不能满足食品安全控制的需要，采用分子生物学技术进行阪崎肠杆菌检测已经发挥了非常重要的作用。Keyser 等以阪崎肠杆菌16S rDNA和16S-23S rDNA 居间序列（ITS）为分子靶点，建立了阪崎肠杆菌的分子检测方法；Nair[14]等通过鉴定和分子克隆阪崎肠杆菌的外膜蛋白A（ompA）基因，建立了针对该基因的单重PCR快速检测阪崎肠杆菌的方法。国内学者高旗利等[15]利用阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区序列设计了11条阪崎肠杆菌PCR引物，组合成30对PCR 引物并筛选出一对特异性的引物，建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法，而高虹等[16]建立了阪崎肠杆菌的荧光定量PCR检测方法。张朝[17]利用荧光定量PCR技术建立了一套从婴儿奶粉中快速检出阪崎肠杆菌的方法，并将荧光定量PCR方法与行业标准SN/T 1632.1-2005方法进行比较，确定荧光定量PCR方法敏感性为100%，特异性为99.0%，符合率为99.0%。胡连霞等[18]、叶应旺等[19]、周吉海等[20]也都从不同角度对阪崎肠杆菌的分子检测技术进行研究，为阪崎肠杆菌的检测提供了很好的参考依据。

3 结语

与其他致病菌相比，阪崎肠杆菌的发病率相对较低，但其导致的疾病死亡率较高，特别是对婴幼儿具有不可逆的致命伤害，受到了各国学者的关注，并已逐步建立了阪崎肠杆菌的常规生化等检测方法。随着研究的不断深入，阪崎肠杆菌生物学性状、毒力、传播途径和流行病学已不断被人们所掌握，这对阪崎肠杆菌的控制将具有重要的意义，为食品安全控制必将发挥不可估量的作用。