1-3-2 实训 病毒的鸡胚培养技术
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实训 病毒的鸡胚培养技术
（一）实训目的
掌握鸡胚的孵化过程和不同日龄鸡胚的 接种途径和接种方法。
掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔增殖过程
，掌握接毒和收毒的方法。
（二）实训原理
病毒培养可用动物接种、鸡胚培养 和组织培养法。
鸡胚尤其是SPF鸡胚被广泛利用于分
离病毒、制造疫苗和抗原等。除病 毒外，衣原体、立克次氏体也可用 鸡胚来培养。
（三）材料和用具 白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架 、新城疫Ⅰ系和Ⅱ系弱毒苗等。
（四）实训准备 1．鸡胚的选择和孵化 2．接种前的准备
（五）操作步骤
1．鸡胚的接种 （1）绒毛尿囊腔内注射取9～10日龄鸡胚，用锥子 在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿 无血管处各钻一小孔，针头从气室下沿小孔处插入 ，深1.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距 离，注射量约0.1～0.2mL。注射后以石蜡封闭小孔 ，置孵育箱中直立孵育。 （2）卵黄囊内注射取6～8日龄鸡胚，可从气室顶 侧接种(针头插入3～3.5cm)，因胚胎及卵黄囊位置 已定，也可从侧面钻孔，将针头插入卵黄囊接种。 侧面接种不易伤及鸡胚，但针头拔出后部分接种液 有时会外溢，需用酒精棉球擦去。其余同尿囊腔内 注射。 （3）绒毛尿囊膜接种。 （4）羊膜腔内接种所用鸡胚为10日龄，有两种方 法---开窗法 、盲刺法 。
（六）思考题 常用鸡胚接种方法有哪些? 鸡胚接种时应注意哪些事项?
2．接种后检查 3．鸡胚材料的收获 (1)绒毛尿囊腔内接种者用无菌手术去气 室顶壳，开口直径为整个气室区大小，以 无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而 不撕破羊膜，用镊子轻轻按住胚胎，以无 菌吸管或消毒注射器吸取绒毛尿囊液置于 无菌试管中，多时可收获5～8mL，将收获 的材料低温保存。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(2)羊膜腔内接种首先收完绒毛尿囊液，后 用注射器带针头插人羊膜腔内收集，约可 收到1mL液体，无菌检查合格保存。 (3)卵黄囊内接种者，先收掉绒毛尿囊液和 羊膜腔液，后用吸管吸卵黄液，无菌检查 同上。将整个内容物倾人无菌平皿中，剪 取卵黄膜保存，若要做卵黄囊膜涂片时， 可此时进行。
（一）实训目的
掌握鸡胚的孵化过程和不同日龄鸡胚的 接种途径和接种方法。
掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔增殖过程
，掌握接毒和收毒的方法。
（二）实训原理
病毒培养可用动物接种、鸡胚培养 和组织培养法。
鸡胚尤其是SPF鸡胚被广泛利用于分
离病毒、制造疫苗和抗原等。除病 毒外，衣原体、立克次氏体也可用 鸡胚来培养。
（三）材料和用具 白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架 、新城疫Ⅰ系和Ⅱ系弱毒苗等。
（四）实训准备 1．鸡胚的选择和孵化 2．接种前的准备
（五）操作步骤
1．鸡胚的接种 （1）绒毛尿囊腔内注射取9～10日龄鸡胚，用锥子 在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿 无血管处各钻一小孔，针头从气室下沿小孔处插入 ，深1.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距 离，注射量约0.1～0.2mL。注射后以石蜡封闭小孔 ，置孵育箱中直立孵育。 （2）卵黄囊内注射取6～8日龄鸡胚，可从气室顶 侧接种(针头插入3～3.5cm)，因胚胎及卵黄囊位置 已定，也可从侧面钻孔，将针头插入卵黄囊接种。 侧面接种不易伤及鸡胚，但针头拔出后部分接种液 有时会外溢，需用酒精棉球擦去。其余同尿囊腔内 注射。 （3）绒毛尿囊膜接种。 （4）羊膜腔内接种所用鸡胚为10日龄，有两种方 法---开窗法 、盲刺法 。
（六）思考题 常用鸡胚接种方法有哪些? 鸡胚接种时应注意哪些事项?
2．接种后检查 3．鸡胚材料的收获 (1)绒毛尿囊腔内接种者用无菌手术去气 室顶壳，开口直径为整个气室区大小，以 无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而 不撕破羊膜，用镊子轻轻按住胚胎，以无 菌吸管或消毒注射器吸取绒毛尿囊液置于 无菌试管中，多时可收获5～8mL，将收获 的材料低温保存。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(2)羊膜腔内接种首先收完绒毛尿囊液，后 用注射器带针头插人羊膜腔内收集，约可 收到1mL液体，无菌检查合格保存。 (3)卵黄囊内接种者，先收掉绒毛尿囊液和 羊膜腔液，后用吸管吸卵黄液，无菌检查 同上。将整个内容物倾人无菌平皿中，剪 取卵黄膜保存，若要做卵黄囊膜涂片时， 可此时进行。