脱落细胞学检查技术及基本知识
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伊红(E-)通常为钠盐,既伊红化钠有色部分为阴离子，无 色部分为阳离子，其有色部分为酸性 。
伊红和亚甲蓝混合后，产生一种憎液性胶体伊红化美蓝 中性沉淀(ME)，即瑞特染料(其溶于甲醇即瑞特染液)。 ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
2021/2/14
可编辑版
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2.甲醇的作用:用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。
3 瑞氏－吉姆萨染色：多用于血液、骨髓细 胞学检查
2021/2/14
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13
常规巴氏制片与液基薄层制片比较
巴氏
液基薄层制片
10～20％标本移至玻片 100％标本收集至保存液中
干固定
湿固定
制片技术不稳定，不能重 复
易受血黏液炎性渗出物覆 盖
细胞分布不均匀，易重叠
技术稳定，可重复 去除血黏液和大量炎性遮盖物 细胞分布均匀集中，不易重叠
2021/2/14
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注意事项：
染液要充分溶解 苏木素要染前月余配制，用时每天过滤1次，加新
液。室温低时不易着色，可<50℃加热 盐酸分化前镜下观察以确定分化时间 涂片在橘黄液中不宜过长EA36染液配制和使用前
应用滤纸调试
2021/2/14
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2 HE染色：透明度好、核浆对比鲜明、染 色效果稳定，核紫蓝色、浆淡玫瑰红色。 步骤简单，适用于痰涂片。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
（ 1 ）溶解:甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在 溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着 色。
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天
青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞
• 水化：固定好的涂片→80％、70％、50％乙醇→蒸馏水
各1min • 染核：苏木素染3～5min • 分色：1％盐酸中数秒，水洗 • 蓝化：置饱和碳酸锂溶液中1min，水洗 • 脱水：50％、70％、80％、95％乙醇各1min • 染浆：置于橘黄G液中染2～4min→95％乙醇洗2次→置于
EA36染液中4～5min • 脱水：95％、无水乙醇各1～2min→二甲苯透明2～
镜下观察费力，易漏诊 镜下观察省力，不易漏诊
成本较低
成本较高
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染色
一、瑞特染色法(Wright ' s)
特点:固定和染色合并在一起,手续简便,染色时间短,对白细 胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色差.
1.瑞氏染料:由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合 染料。
亚甲蓝(M+)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种 结构。通常为氯盐，即氯化美蓝,其有色部分为阳离子，无色 部分为阴离子 。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级 染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。
脱落细胞学
哈尔滨医科大学大庆校区临床基 础检验教研室
梁松鹤
2021/2/14
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1
第一章 脱落细胞检查技术和临床应用评价
脱落细胞学：是对人体各部位特别是管腔器 官表面的脱落细胞，或对病变组织通过细针 吸取的方法获得的细胞染色并在显微镜下观 察作出诊断，又称诊断细胞学。
标本来源：自然排出物 体腔抽出液 细针穿刺吸取液
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（三）涂片的固定
目的：保持细胞形态结构，防止其自溶。
固定液：首选95％酒精，乙醇乙醚，氯仿 乙醇
注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干 燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h内 进行巴氏染色）；固定液要达到90％以上； 液体标本离心后涂片，待潮干后再固定， 宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内窥镜 的刷片、针吸涂片应立即固定。
浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要
是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（ 2 ）固定,升温:甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在 一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作 用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速 染色反应。
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3.染色原理:
3min ×2 • 封片：中性树胶封固
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结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底 层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡 蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉 红色，角化细胞呈桔黄色。
适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性 激素的影响
优点：细胞具有多色性
缺点：染色程序较复杂
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二、涂片制作
（一）要求： 1 标本要新鲜 2 操作要轻柔：细胞分布均匀；薄厚适当 勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形； 3 玻片要清洁 4 涂片要牢固 5 涂片数量 6 标号准确
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（二）涂片制备方法
推片法 涂抹法 压拉涂片法 吸管推片法 喷射法 印片法
细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学 的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同， 对各种染料的亲和力也不一样。
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固定方法：带湿固定 干燥固定
固定时间：15～30min （四）涂片的染色
目的：使细胞结构清晰显示；应用各种染色使细 胞浆与核恰当显示不同颜色；使细胞透明度高， 结构清晰。 方法：常规染色为巴氏染色，配合HE、Giemsa、 特染等。
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1 巴氏染色法
自然分泌液采取法：痰涂片、尿液涂片、 前列腺液涂片、乳头溢液涂片
灌洗法：空腔器官、盆腔或腹腔
摩擦法：鼻咽、食管、胃
针穿抽吸法：浆膜腔关节腔积液，淋巴结、 软组织、甲状腺、肝
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浆膜腔积液的处理：
抽出应立即送检（4℃保存，24h内处理完 标本）
对检查影响较大的是过多成熟的红细胞和 标本的严重凝固，需处理，淋巴细胞分离 液或低渗方法可去除红细胞，凝固的积液 将凝块吸出，剩余液体离心涂片。
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第一节 标本采集和涂片制作
一、标本采集
原则：尽量减少受检者的痛苦，取得合 作；方法简便、实用、经济；尽量取得 足够供诊断的细胞成分；及时快速送检 立刻制片；绝对避免污染；标本号标记 清楚。
途径： 细针穿刺；脱落细胞学检查
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常用方法：
直视采集法：直接用刮片刮取、吸管吸取、 刷洗
伊红和亚甲蓝混合后，产生一种憎液性胶体伊红化美蓝 中性沉淀(ME)，即瑞特染料(其溶于甲醇即瑞特染液)。 ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
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2.甲醇的作用:用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。
3 瑞氏－吉姆萨染色：多用于血液、骨髓细 胞学检查
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常规巴氏制片与液基薄层制片比较
巴氏
液基薄层制片
10～20％标本移至玻片 100％标本收集至保存液中
干固定
湿固定
制片技术不稳定，不能重 复
易受血黏液炎性渗出物覆 盖
细胞分布不均匀，易重叠
技术稳定，可重复 去除血黏液和大量炎性遮盖物 细胞分布均匀集中，不易重叠
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注意事项：
染液要充分溶解 苏木素要染前月余配制，用时每天过滤1次，加新
液。室温低时不易着色，可<50℃加热 盐酸分化前镜下观察以确定分化时间 涂片在橘黄液中不宜过长EA36染液配制和使用前
应用滤纸调试
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2 HE染色：透明度好、核浆对比鲜明、染 色效果稳定，核紫蓝色、浆淡玫瑰红色。 步骤简单，适用于痰涂片。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
（ 1 ）溶解:甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在 溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着 色。
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天
青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞
• 水化：固定好的涂片→80％、70％、50％乙醇→蒸馏水
各1min • 染核：苏木素染3～5min • 分色：1％盐酸中数秒，水洗 • 蓝化：置饱和碳酸锂溶液中1min，水洗 • 脱水：50％、70％、80％、95％乙醇各1min • 染浆：置于橘黄G液中染2～4min→95％乙醇洗2次→置于
EA36染液中4～5min • 脱水：95％、无水乙醇各1～2min→二甲苯透明2～
镜下观察费力，易漏诊 镜下观察省力，不易漏诊
成本较低
成本较高
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染色
一、瑞特染色法(Wright ' s)
特点:固定和染色合并在一起,手续简便,染色时间短,对白细 胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色差.
1.瑞氏染料:由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合 染料。
亚甲蓝(M+)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种 结构。通常为氯盐，即氯化美蓝,其有色部分为阳离子，无色 部分为阴离子 。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级 染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。
脱落细胞学
哈尔滨医科大学大庆校区临床基 础检验教研室
梁松鹤
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第一章 脱落细胞检查技术和临床应用评价
脱落细胞学：是对人体各部位特别是管腔器 官表面的脱落细胞，或对病变组织通过细针 吸取的方法获得的细胞染色并在显微镜下观 察作出诊断，又称诊断细胞学。
标本来源：自然排出物 体腔抽出液 细针穿刺吸取液
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（三）涂片的固定
目的：保持细胞形态结构，防止其自溶。
固定液：首选95％酒精，乙醇乙醚，氯仿 乙醇
注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干 燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h内 进行巴氏染色）；固定液要达到90％以上； 液体标本离心后涂片，待潮干后再固定， 宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内窥镜 的刷片、针吸涂片应立即固定。
浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要
是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（ 2 ）固定,升温:甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在 一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作 用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速 染色反应。
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3.染色原理:
3min ×2 • 封片：中性树胶封固
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结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底 层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡 蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉 红色，角化细胞呈桔黄色。
适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性 激素的影响
优点：细胞具有多色性
缺点：染色程序较复杂
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二、涂片制作
（一）要求： 1 标本要新鲜 2 操作要轻柔：细胞分布均匀；薄厚适当 勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形； 3 玻片要清洁 4 涂片要牢固 5 涂片数量 6 标号准确
2021/2/14
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（二）涂片制备方法
推片法 涂抹法 压拉涂片法 吸管推片法 喷射法 印片法
细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学 的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同， 对各种染料的亲和力也不一样。
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固定方法：带湿固定 干燥固定
固定时间：15～30min （四）涂片的染色
目的：使细胞结构清晰显示；应用各种染色使细 胞浆与核恰当显示不同颜色；使细胞透明度高， 结构清晰。 方法：常规染色为巴氏染色，配合HE、Giemsa、 特染等。
2021/2/14
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1 巴氏染色法
自然分泌液采取法：痰涂片、尿液涂片、 前列腺液涂片、乳头溢液涂片
灌洗法：空腔器官、盆腔或腹腔
摩擦法：鼻咽、食管、胃
针穿抽吸法：浆膜腔关节腔积液，淋巴结、 软组织、甲状腺、肝
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浆膜腔积液的处理：
抽出应立即送检（4℃保存，24h内处理完 标本）
对检查影响较大的是过多成熟的红细胞和 标本的严重凝固，需处理，淋巴细胞分离 液或低渗方法可去除红细胞，凝固的积液 将凝块吸出，剩余液体离心涂片。
2021/2/14
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2
第一节 标本采集和涂片制作
一、标本采集
原则：尽量减少受检者的痛苦，取得合 作；方法简便、实用、经济；尽量取得 足够供诊断的细胞成分；及时快速送检 立刻制片；绝对避免污染；标本号标记 清楚。
途径： 细针穿刺；脱落细胞学检查
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常用方法：
直视采集法：直接用刮片刮取、吸管吸取、 刷洗