血清三酰甘油的测定
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血清三酰甘油 的测定
血清三酰甘油的测定
一、实验目的
1.掌握血清三酰甘油的测定的
基本原理和方法。
2.了解血清三酰甘油的测定的 临床意义。
血清三酰甘油的测定
二、器材和试剂
1.器材 试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微 量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计 、比色杯、记号笔。 2.试剂 (1)新鲜血清 (2)抽提剂为正庚烷—异丙醇(2∶3.5)(V／V) (3)40mmol/L H2SO4溶液 (4)异丙醇 (5)皂化剂 (6)氧化剂 (7)乙酰丙酮 (8)1.1mmol/L三油酸甘油酯标准液
三酰甘油
R 2 C O CH
血清三酰甘油的测定
三、实验原理
抽提
上层液0.4ml
三酰甘油
甘油磷脂
正庚烷 异丙醇-水
血清三酰甘油的测定
皂化
三酰甘油
+ KOH
65℃ 3 5 min
脂肪酸钾 甘油
氧化 显色
+
甲醛 乙酰丙酮 甘油
HIO4
2
甲醛
+
甲酸
OH
NH4+ 15 min 3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶 （黄色带荧光）
氧化显色 比色
65℃水浴15min
取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度
结果计算： 标准管TG浓度：1.1mmol/L
C测=A测/A标 ×C标
测定管光密度
血清三酰甘油
（mmol/L）
＝ 标准管光密度
×1.1
正常值=0.22～1.21mmol/L
五、注 意 事 项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管可用离心试管； 试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干。
四、实验步骤
抽提
血清（ml）
取3支小试管，按下表操作，边加边摇，混匀器振摇10min， 静置分层 。
试剂
空白管
— —
标准管
— 0.2
测定管
0.2 —
标准液（ml）
ຫໍສະໝຸດ Baidu
蒸馏水（ml）
抽提剂（ml） 40mmol/LH2SO4(ml)
0.2
2 0.6
—
2 0.6
—
2 0.6
皂化
吸取上层液体0.3-0.5ml，加入对应的3 只大试管（三管液量相等）， 再加异丙醇2ml及皂化剂0.4ml，立即摇匀，于65℃保温5min 各管加入氧化剂2ml充分混匀后，加入乙酰丙酮试剂2ml，摇匀，
三、实验原理
血脂 甘 油
FA
FA = Fat Acid
甘油三酯(TG)
FA FA FA X = 胆碱 乙醇胺 FA 丝氨酸 Pi O-X 肌醇等
甘油磷脂 (PL) 甘
油
胆固醇酯(CE)
胆固醇
FA
三、实验原理
O O CH 2 O C R 1 O OH 甘油磷脂 CH 2 O P X
O CH2O C R1 R2 C O CH O CH2O C R3 O
血清三酰甘油的测定
一、实验目的
1.掌握血清三酰甘油的测定的
基本原理和方法。
2.了解血清三酰甘油的测定的 临床意义。
血清三酰甘油的测定
二、器材和试剂
1.器材 试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微 量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计 、比色杯、记号笔。 2.试剂 (1)新鲜血清 (2)抽提剂为正庚烷—异丙醇(2∶3.5)(V／V) (3)40mmol/L H2SO4溶液 (4)异丙醇 (5)皂化剂 (6)氧化剂 (7)乙酰丙酮 (8)1.1mmol/L三油酸甘油酯标准液
三酰甘油
R 2 C O CH
血清三酰甘油的测定
三、实验原理
抽提
上层液0.4ml
三酰甘油
甘油磷脂
正庚烷 异丙醇-水
血清三酰甘油的测定
皂化
三酰甘油
+ KOH
65℃ 3 5 min
脂肪酸钾 甘油
氧化 显色
+
甲醛 乙酰丙酮 甘油
HIO4
2
甲醛
+
甲酸
OH
NH4+ 15 min 3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶 （黄色带荧光）
氧化显色 比色
65℃水浴15min
取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度
结果计算： 标准管TG浓度：1.1mmol/L
C测=A测/A标 ×C标
测定管光密度
血清三酰甘油
（mmol/L）
＝ 标准管光密度
×1.1
正常值=0.22～1.21mmol/L
五、注 意 事 项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管可用离心试管； 试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干。
四、实验步骤
抽提
血清（ml）
取3支小试管，按下表操作，边加边摇，混匀器振摇10min， 静置分层 。
试剂
空白管
— —
标准管
— 0.2
测定管
0.2 —
标准液（ml）
ຫໍສະໝຸດ Baidu
蒸馏水（ml）
抽提剂（ml） 40mmol/LH2SO4(ml)
0.2
2 0.6
—
2 0.6
—
2 0.6
皂化
吸取上层液体0.3-0.5ml，加入对应的3 只大试管（三管液量相等）， 再加异丙醇2ml及皂化剂0.4ml，立即摇匀，于65℃保温5min 各管加入氧化剂2ml充分混匀后，加入乙酰丙酮试剂2ml，摇匀，
三、实验原理
血脂 甘 油
FA
FA = Fat Acid
甘油三酯(TG)
FA FA FA X = 胆碱 乙醇胺 FA 丝氨酸 Pi O-X 肌醇等
甘油磷脂 (PL) 甘
油
胆固醇酯(CE)
胆固醇
FA
三、实验原理
O O CH 2 O C R 1 O OH 甘油磷脂 CH 2 O P X
O CH2O C R1 R2 C O CH O CH2O C R3 O