蜜环菌提取工艺规程

目的

本规程是蜜环菌发酵提取的生产技术标准，使其生产技术管理科学化、规范化，保证产品质量。

范围

蜜环菌发酵提取

内容

1 产品概述

1.1蜜环菌浓缩液是脑心舒口服液的原料。本品为白蘑科植物蜜环菌，人工液体发酵的培养液，经浓缩滤过的液体。

1.2蜜环菌培养产物：本品为担子菌纲，白蘑科蜜环菌的发酵培养产物。本品每年进行一次以上复壮培养及菌丝检查。鲜品置显微镜下观察：在菌丝周围可见到棒状结晶体。菌索外部有一层质脆的鞘，鞘内为坚硬的白色或近白色的细长菌丝束。本品不得混有其他杂质，水分不得过10%，已发霉变质的培养产物，不得供药用。

1.3 功能与主治：镇静安神、养肝止晕，活性祛风。用于眩晕，头痛、失眠、癫痫。

1.4 贮藏：密封，置阴凉处储存。

2 制法

2.1 蜜环菌液体深层发酵培养

2.1.1斜面菌种培养

试管菌种用PDA培养基培养将保存在冰箱中的优良菌株的试管种转入已制备好的PDA培养基中；在25-26 ℃培养15-20天，菌丝呈棕红色，边缘白色，在暗室可见荧光，有时长出稍卷曲、驼色气生菌丝、试管背面能见到长入培养基中白黄色的根状菌索、长出培养基外的菌索蹭红色或褐色。即转入种子培养基培养。

2.1.2种子培养种子培养基配方为：麦麸（或马铃薯）煮汁5%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，维生素 B10.001%，蚕蛹粉0.5%，自来水加至100%，PH值自然。

2.1.2.1一级种子培养：在500ml三角瓶100-150ml培养基液，灭菌后接入1支斜面菌种，用接菌铲切碎菌种，培养基温度为24-26 ℃.在卧室加高型大容量全温度恒温培养摇床上培养120-148小时，在当菌球稠密，培养液澄清时，可转入二级种子培养。

2.1.2.2二级种子培养：在5000ml三角瓶中装入1000ml种子培养基液，灭菌后接入一级种子，接菌量为10%，在卧室加高型大容量全温度恒温培养摇床培养72-96小时，转速120转/min，培养基温度为26-28 ℃，菌球稠密培养基澄清后，即可转入三级种子培养。

2.1.2.3三级种子培养：三级种子培养是在种子发酵罐内进行的扩大种子培养，其培养基配方为：蔗糖1%，葡萄糖2%，蚕蛹粉1%，硫酸镁0.075，磷酸二氢钾0.15%，自来水加至100%，PH自然。

在种子发酵罐中，装入罐体积60-70%的培养基液，以120℃灭菌半小时，冷却以后以5%-10%接种量接入二级种子，在26-28℃温度下搅拌通气培养，搅拌速度为150-180转/min，通气量每分钟为1:0.3-1:0.5（v/v），培养96-120小时即可长好备用。

2.1.3发酵培养是在发酵罐中进行的通气搅拌培养，发酵培养基与三级种子罐培养基相同。其培养条件与种子罐种子培养相同，灭菌后接入三级种子，接菌量为5-10%，搅拌速度为190转/min，培养168-192小时，当发酵液变为棕褐色、菌丝较密生长旺盛，有荧光，PH值下降至4-5，残糖

量降至0.3%-0.5%静止培养后发酵液澄清透明，啤酒色，即可终止发酵。

2.1.4采收、过滤和浓缩发酵终止后出罐，采用离心机或板框过滤，使菌体和滤液分开，滤液浓缩至相对密度1.030-1.035（20℃），即得蜜环菌浓缩液。

2.1.5 水沉如果滤液浑浊，可采取水沉的方法处理。

2.2.3工艺流程图

25-26℃ 24-26℃

试管斜面培养 500ml摇瓶种子培养

15-20天 120-148小时

25-26℃ 26-28℃

5000ml摇瓶种子培养种子罐培养

72-96小时 72-96小时

26-28℃

发孝罐培养板式过滤滤液

160-190小时

相对密度

浓缩蜜环菌浓缩液

1.030-1.035（20℃）

3.清场

各工序完成后彻底清场，用过的提取罐、浓缩罐等加水清洗2次，然后加水煮沸30分钟，再加水冲洗干净，设备表面擦洗干净，地面清洁无污物，做到物品摆放有序，并填写好设备清洁、清场记录。

4.请验：及时填写请验单，标明：请验岗位、品名、批号、数量、日期等。

5.生产注意：产前产后清场；产中贴挂相应标志标识，及时贴挂标签，各岗位操作结束后，认真填写设备运行记录、批生产记录。

6 主要生产设备及操作、保养、清洁。

6.1 主要生产设备一览表

7. 质量控制点

8. 技术安全、劳动保护及工艺卫生

8.1技术安全：

8.1.1禁止在车间通道、走廊、仓库出入口及灭火器旁堆积物品。

8.1.2各工作岗位、走廊应有足够的照明设备。

8.1.3设备工作台的布置应便于工人安全操作，留有安全通道。

8.1.4擦玻璃窗及登高作业要注意安全。

8.2.1机械电器设备

8.2.1.1湿手掌不准摸电源开关，不可以用湿布擦电源部分。

8.2.2.2机械发生故障时，必须立即停机，由维修人员进行修理，对于正在运转的机器，不得进行维修，检修设备时必须切断电源。挂上标牌，并有人监护。

8.2.3.3擦机器时必须停机进行，不可把抹布缠在手指上，也不可以接触转动部分。

8.2.3.4设备检修结束，在开动前，必须仔细检查有无零件、杂物混入齿轮和运转部分，工具不准放在机器上，加油要用注油器，难于加油的部分，应停机加油。

8.2.3.5任何设备使用时不能超过规定负荷，清洁设备时，严防电机进水。

8.2.3.6一切电路和电器设备发生故障时，应立即通知值班电工，仪表工进行修理。

8.3防火防毒

8.3.1车间内禁止吸烟，各工作岗位及仓库须有足够的消防设施，以备急用。

8.3.2凡易燃材料，如乙醇，必须建立严格的领发和存放制度，专人管理，贮存量应有一定限度。

8.3.3散发粉尘的岗位，要设排风装置，严加密闭，设备管道和阀门要经常的检修和维护。

8.4劳动保护

8.4.1散发粉尘的岗位操作人员配带防护口罩、手套。

8.4.2接触洗涤剂、清洁剂、消毒剂人员配备橡皮手套，清洗设备人