大肠杆菌病的实验室诊断之疑似病例病料中细菌的形态学检查和分离培养.ppt

可能出现的镜检结果示例
若出现如右图所示 的镜检结果，则初 步诊断病料中细菌 可能是大肠杆菌：
菌体为中等大小直 杆菌，散在或成对 排列
病料中细菌的分离培养方法
1 无菌操作从病料中取菌 2 平板划线接种 3 培养
• 将烙刀灼烧灭菌，用其将病料表面 烧烙灭菌并切开一小口，然后用灭 菌接种环从切口插入组织中转动取 菌，烙刀和接种环用完需灼烧灭菌 后再放回原处。
病料中细菌的形态学检查方法
1 触片 2 干燥 3 固定 4 美兰染色
• 镊子、剪刀在酒精灯火焰上烧灼灭菌，用镊子夹持、剪刀剪取小块 病料组织，以其新鲜切面在玻片上轻触3~5个压百度文库。
病料中细菌的形态学检查方法
1 触片
2 干燥
3 固定
4 美兰染色
• 室温下自然干燥或将标本片 的涂面向上，置酒精灯火焰 高处微烤加热干燥，至涂面 上无水为止。
病料中细菌的分离培养方法
1 无菌操作从病料中取菌 2 平板划线接种 3 培养
• 倒置37℃温箱中，培养18～24h观察结果
可能出现的分离培养结果示例
伊红美兰培养基（大肠杆 菌：紫黑色带金属光泽菌 落）
麦糠凯培养基（大肠杆 菌：红色菌落）
SS培养基（大肠杆菌：红 色菌落或不生长）
病料中细菌的分离培养方法
1 无菌操作从病料中取菌 2 平板划线接种 3 培养
1. 左手持平皿，用拇指、食指及中指将皿盖打开呈20 ° 左右。 2. 右手持接种环，将已取被检材料涂于培养基一侧，然后自涂抹处
呈30～40°角，以腕力在平板表面轻轻地分区划线。每划完一区， 接种环取出灼烧灭菌，冷却后从上一区取菌划下一区，即下一区 开始的几条划线应通过上一区划线。
病例临床资料
临床初步诊断结论：疑为大肠杆菌病
如何设计实 验方案呢
大肠杆菌病实验室诊断方案
病料
病料中菌多
病料中细菌的形态学检查
病料中细菌的分离培养
药敏试验
18小时后 病料中菌少
涂片革兰氏染色 糖发酵试验
纯培养 生化试验
H2S试验
动物致病性试验 10日龄小鸡，皮 下注射0.2ml/只
MR试验
药敏试验
大肠杆菌病的实验室诊断
疑似病例病料中细菌的形态学检查 和分离培养
实验目标
• 病料中细菌的形态学检查实验目标： – 通过观察病料中是否有菌，从而初步判断病料是否 取自细菌感染病例。 – 若病料中有菌，根据细菌形态初步鉴定其种类
• 病料中细菌的分离培养实验目标： – 用鉴别培养基分离培养后，看是否得到菌落。若有 菌落生长，则根据菌落特征进一步鉴定细菌种类。
病料中细菌的形态学检查方法
1 触片 2 干燥 3 固定 4 美兰染色
• 火焰固定方法：将干燥好的标本片涂面向上，在酒精灯火焰上通过 3~4次，以手背触及玻片微烫手为宜。
病料中细菌的形态学检查方法
1 触片 2 干燥 3 固定 4 美兰染色
• 滴加美蓝染色液覆盖涂面， 静置染色 2~3min，水洗， 用吸水纸吸干镜检。