抗甲状腺过氧化物酶抗体测定操作规程

抗甲状腺过氧化物酶过氧化物酶标准操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：抗抗甲状腺过氧化物酶过氧化物酶测定(缩写Anti-TPO)；检验项目申请：抗甲状腺过氧化物酶组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1标本采集

2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对于测定和吸样有干扰的标本：如近期使用鼠源性单克隆抗体诊断后采取。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存

2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20℃。冰冻标本仅可冻融一次。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项

2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

2.3.2采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用肝素、EDTA抗凝的血液标本。

3 方法原理

Anti-TPO测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本、包被着链霉亲和素及结合了生物素化甲状腺过氧化物酶蛋白的超顺磁性磁粒（磁珠)添加到反应管中，经过孵化，样本中 Anti-TPO和磁珠上的TPO结合。反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合物质。

第二步：将蛋白A碱性磷酸酶结合物添加到反应管中，该结合物与 Anti-TPO结合。在第二次孵育完成后，磁场吸附磁珠，洗去未结合的物质。

第三步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态

量。所产生光子数与样本内的 Anti-TPO浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。

4 试剂及其他用品

剂盒组分试剂1（Ra）：

组分：包被着链霉亲和素及结合了生物素化TPO蛋白的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：包被着链霉亲和素及结合了生物素化TPO蛋白的超顺磁性微粒，0.2g/l；HEPE缓冲液，50mmol/L；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠，0.9g/L。含防腐剂。

装量:2×30人份/盒，2×2.7ml；2×50人份/盒,2×3.8ml；2×100人份/盒,2×6.6ml。

4.2.2试剂2标记物（Rb）

组分：蛋白A-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：蛋白A-碱性磷酸酶标记物，3mg/L；MES缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2×30人份/盒，2×5.0ml；2×50人份/盒,2×7.8ml；2×100人份/盒,2×14.8ml。

4.2.3试剂2缓冲液（Rc）

组分：缓冲液，含防腐剂。

原料及含量：HEPE缓冲液，50mmol/L；Proclin300,0.5g/L；叠氮钠，0.9g/L。含防腐剂。

装量:2×30人份/盒，2×2.4ml；2×50人份/盒,2×3.5ml；2×100人份/盒,2×6.3ml。

4.2.4试剂4样本处理液（Rd）

组分：样本处理液，含防腐剂。

原料及含量：Tris缓冲液，50mmol/L；Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。装量:2×30人份/盒，2×2.4ml；2×50人份/盒,2×3.5ml；2×100人份/盒,2×6.3ml。

4.2.5 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准备。

4.3其他试剂与用品

4.3.1 化学发光底物：发光剂底物液。

5 校准品与校准模式

5.1校准品: 深圳迈瑞公司提供的专用 Anti-TPO校准液。需贮2～8℃。

5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，4个校准点。

5.3校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔56d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。

5.4校准液重建方法：液体试剂，直接使用。

6.1质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。

6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。

6.4质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。

6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正

并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

7 适用仪器

深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪。

8 标本检测步骤

装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告

9 主要分析参数

无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量15µL。

10 结果计算

仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以IU/mL表示。

11 检验结果的报告及范围

11.1结果的报告

11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2报告范围：0.00~ 9.00 IU/mL，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。

12 操作性能

12.1精密度：批内CV＜4.5％，批间CV＜5.0％。

12.2 分析范围：0.25 ~ 1000IU/mL 。

12.3灵敏度：0.25IU/mL 。

12.4方法的有限性及干扰因素：胆红素≤75mg/dL、TG≤3000m g/dL、Hb ≤1500m g/dL、总蛋白≤10g/dl，在检测结果的干扰偏差±10%范围内。

13 参考范围及医学决定水平

参考值（血清）： 0.00 ~ 9.00IU/mL ng/ml

14 临床意义