污水中苯酚降解菌的分离与初探
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一
１ １ ３ 选择培养基 ．． 以苯酚为唯一碳 源的无机盐培养基：苯酚浓度 梯 度 为 ５０～９ ０ ｇ Ｌ ｇＯ ． ９ ， Ｃ Ｃ ０ ０ ｍ ／ ，Ｍ Ｓ４ ０ ｇ ａ １ ０ ２
０ ７ ｍｇ， Ｆｅ ０ ・７ ２ ０ ００ ｇ， Ｍ ０ ・Ｈ ０ ．０ ５５ Ｓ４ Ｈ０ ． ５ ｎＳ ４ ２
电子天平 （ Ａ ０ ４）。 Ｆ ２０
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 菌株分 离 ．．
取污水 １ｍ ，加入 ９ Ｌ无菌水稀释成 １ Ｌ ９ｍ ０ 倍浓度的菌液摇匀；再从 １ Ｏ 浓度菌液中 １ Ｅ 取 ，加 ｍ 入 ９ｍ Ｌ无菌水摇匀，制成 １ ０ 浓度的菌液；依 照 此法依次进行梯度稀释，得 １一 ０，１～ ， ０，１一 ０ ，１～ ０ １ 稀释液，取稀释 的样品 ０２ｍ ０ ． Ｌ分别涂布于 基本 培养基上， 做重复。ＰＡ培养基在室温 ２ Ｄ ８℃下培养 １ 材料 和方 法 ３ ，高氏 １ ～４ｄ 号培养基在 ３ ７℃下培养 ３ ４ｄ ～ ， １ １ 材 料 ． 牛肉 膏蛋白 胨培养基在 ３ ７℃下培养 ２ ３ｄ ～ 。观察菌 １ １ １ 污水 ．． 落特征并进行划线分 离纯化，以获取纯的菌种 ，转 污水：取 自邢 台市建涛焦化有限公 司的工业污 到试管中备用。 水 和邢 台市污水 处理 厂 的生活 污水 。 １ ２２ 苯酚降解菌的筛选 ．． １１ ２ 基本培养基 ．． 将分离得到的菌株接种到含苯酚的选择培养基 牛 肉膏蛋 白胨培养基 ：牛肉膏 ３ ｇ ，蛋 白胨 中进行划线培养。 １ ｇ Ｎ Ｃ ５ ０ ， ａ １ ｇ， 琼 脂 １ ｇ， 水 １ ０ Ｌ １ ２ ３ 菌株的生理生化反应测试 ７ ０ｍ ， ０ ．．
要 ：用基本培养基采用涂布平板 法从工业和生活 污水 中共分 离得 到 ４ １种菌株 ，其 中有 １ 能够在 以苯酚为唯 ３株
碳源 的无机盐培养基上生长即为苯酚 降解 菌——细 菌 １ 株 ，真 菌 １ ，放 线菌 １株 。同时对其进行 了革 兰氏染色、生 １ 株
关键词 ：污水；苯酚降解菌；苯酚 ；分 离 中图分类号 ：Ｘ１２ ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ： １７ ．６ ８２ １）４０ ９ ．３ ６ ２４ ５ （０ ０ ．１００ １
０ ０ １ ｇ （ Ｈ ）ｚ０ ２ ｇ ＨＰ １ ． ，琼 脂 ． ０ ， Ｎ Ｓ ４ ，Ｋ ２Ｏ ０ ７ ｇ １ ，水 １ ０ Ｅ Ｈ ７ ０ ｇ ７ ０ ０ ｍ ，ｐ ． 。 １ １ ４ 主要仪器 ．．
标准双人净化工作 台 （Ｗ Ｃ－ Ｃ Ｓ－ Ｊ１ ），蒸汽消毒 器 （ ＸＧ ２ ＹＱ０ ），电热鼓风干燥箱 （ Ａ－ ），恒 １ｌＢ １ ０ 温培养箱 （Ｒ一 ５一 ），光学显微镜 （ ２ ０Ａ ＬＨ ２０Ｇ Ｌ ００ ）， 恒温振荡器 （ Ｚ ８） Ｓ － ２ ，架盘药物天平 （ Ｐ １０ ）， Ｈ Ｊ－ ００ 冰箱 （Ｃ－８ＫＦＲ ，磁力加热搅拌器 （９Ｉ ＢＤ１３ ＆ ） ７－ ），
ｐ ．４～ ７ 。 Ｈ７ ．６
１ — 反 应 ）源自文库 Ｐ
高氏 １ 号培养基：可溶性淀粉 ２ ，Ｋ０ ， ０ｇ Ｎ １ｇ
Ｎ Ｃ ０ ５ ｇ， Ｋ Ｈ Ｏ ａ １ ． Ｐ ４・ ３ ０ ５ ２ Ｈ ０ ． ｇ， Ｍ Ｓ ４ ‘７ ２ ｇ０ Ｈ０ ２
葡萄糖蛋 白胨水培养基：蛋白胨 ２５ｇ ． ，葡萄
理 生 化 反 应 测 试 和 对 苯 酚 浓度 耐 受 能 力 测试 研 究 。
污水 已经成为现实生活中一个沉重的话题 ，而 苯酚是焦化、造纸和石油等工业废水 以及生活污水 中的主要污染物Ⅲ 。大量酚类化合物 以及衍生物的 积累给环境和人体健康 带来 了 严重的威胁。 现代污水处理技术按处理程度可分为三个等级： 级处理为物理法，去除悬浮状固体 污染物；二级 处理主要去除胶体、溶解状态的有机污染物；三级 处理用 生物脱氮除磷法、混凝沉淀法、砂率法、活 性炭吸附法、离子交换法等方法主要去除难降解的 有机物、氮、磷等导致水体 富营养化的可溶性无机 物等 。其中的生物法为一种纯天然的方法，利用 污水 中微生物分解其有毒有害物质 ，反应过程简单 （ 即微 生物的生理代谢 ），产物也无污染。但其在 自然状态下反应较慢，污水 中有害物对于微生物来 说 常常是 “ 供不应求”。 目前国内外有很多的权威 学者从不同的污染源中分离 了 一些降解苯酚的菌株， 但是认识得不够全面 。因为不 同的选择条件得到 的结果是不同的，这必然使得某些菌种尚未被发现。 鉴于 以上原因，本文的目的是尽最大可能筛选出一 些功能上 占主导地位 的苯酚降解菌 ，以提高污水处 理 中苯酚降解的速率。
糖 ２ ５ ｇ ２Ｐ ４１ ｇ ． ，ＫＨ ０ ，水 ５ ０ ｍ ，ｐ ． 。 ０ Ｌ Ｈ ７ ２
ＶＰ试剂：Ｃ Ｓ １ｇ － ｕ ０ ，蒸馏水 １ Ｌ ０ｍ ，浓氨水 ｐＨ ． ７ ４～ ７ ６。 ． ４ Ｌ ＯＮ Ｏ ５ Ｌ ０ｍ ，１％ ａＨ ９ ０ｍ 。先将 Ｃ Ｓ ｕ０ 溶于蒸馏水 中， 然后 加 浓氨水 ，最后 加 １％ ａＨ ０Ｎ ０ 。 Ｐ Ａ培养基 ：土豆 ２ ０ｇ Ｄ ０ ，葡萄糖 ２ ，琼 ０ｇ 将菌种接种培养在 ３ ７℃下，培养 ２ ～ ８ ｈ ４ ４ ， 脂 １ ，水 １ ０ Ｌ ｐ 自然 。 ７ｇ ０ ０ｍ ， Ｉ － Ｉ
第２ ６卷 第 ４期 ２１年 １ ０１ ２月
邢 台学 院学 报
Ｊ ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ ＸＩ ＮＧＴ ＡＩ ＵＮＩ ＶＥＲＳ Ｔ Ｉ Ｙ
Ｖｏ ． ６ Ｎｏ ４ １２ ． ．
Ｄ ｅ ． ０ｌｌ ｃ２
污水 中苯酚 降解 菌的分离与初探
唐
摘
一
蕊
０４０ ） ５ ０ １
（ 邢台学院，河北邢 台
１ １ ３ 选择培养基 ．． 以苯酚为唯一碳 源的无机盐培养基：苯酚浓度 梯 度 为 ５０～９ ０ ｇ Ｌ ｇＯ ． ９ ， Ｃ Ｃ ０ ０ ｍ ／ ，Ｍ Ｓ４ ０ ｇ ａ １ ０ ２
０ ７ ｍｇ， Ｆｅ ０ ・７ ２ ０ ００ ｇ， Ｍ ０ ・Ｈ ０ ．０ ５５ Ｓ４ Ｈ０ ． ５ ｎＳ ４ ２
电子天平 （ Ａ ０ ４）。 Ｆ ２０
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 菌株分 离 ．．
取污水 １ｍ ，加入 ９ Ｌ无菌水稀释成 １ Ｌ ９ｍ ０ 倍浓度的菌液摇匀；再从 １ Ｏ 浓度菌液中 １ Ｅ 取 ，加 ｍ 入 ９ｍ Ｌ无菌水摇匀，制成 １ ０ 浓度的菌液；依 照 此法依次进行梯度稀释，得 １一 ０，１～ ， ０，１一 ０ ，１～ ０ １ 稀释液，取稀释 的样品 ０２ｍ ０ ． Ｌ分别涂布于 基本 培养基上， 做重复。ＰＡ培养基在室温 ２ Ｄ ８℃下培养 １ 材料 和方 法 ３ ，高氏 １ ～４ｄ 号培养基在 ３ ７℃下培养 ３ ４ｄ ～ ， １ １ 材 料 ． 牛肉 膏蛋白 胨培养基在 ３ ７℃下培养 ２ ３ｄ ～ 。观察菌 １ １ １ 污水 ．． 落特征并进行划线分 离纯化，以获取纯的菌种 ，转 污水：取 自邢 台市建涛焦化有限公 司的工业污 到试管中备用。 水 和邢 台市污水 处理 厂 的生活 污水 。 １ ２２ 苯酚降解菌的筛选 ．． １１ ２ 基本培养基 ．． 将分离得到的菌株接种到含苯酚的选择培养基 牛 肉膏蛋 白胨培养基 ：牛肉膏 ３ ｇ ，蛋 白胨 中进行划线培养。 １ ｇ Ｎ Ｃ ５ ０ ， ａ １ ｇ， 琼 脂 １ ｇ， 水 １ ０ Ｌ １ ２ ３ 菌株的生理生化反应测试 ７ ０ｍ ， ０ ．．
要 ：用基本培养基采用涂布平板 法从工业和生活 污水 中共分 离得 到 ４ １种菌株 ，其 中有 １ 能够在 以苯酚为唯 ３株
碳源 的无机盐培养基上生长即为苯酚 降解 菌——细 菌 １ 株 ，真 菌 １ ，放 线菌 １株 。同时对其进行 了革 兰氏染色、生 １ 株
关键词 ：污水；苯酚降解菌；苯酚 ；分 离 中图分类号 ：Ｘ１２ ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ： １７ ．６ ８２ １）４０ ９ ．３ ６ ２４ ５ （０ ０ ．１００ １
０ ０ １ ｇ （ Ｈ ）ｚ０ ２ ｇ ＨＰ １ ． ，琼 脂 ． ０ ， Ｎ Ｓ ４ ，Ｋ ２Ｏ ０ ７ ｇ １ ，水 １ ０ Ｅ Ｈ ７ ０ ｇ ７ ０ ０ ｍ ，ｐ ． 。 １ １ ４ 主要仪器 ．．
标准双人净化工作 台 （Ｗ Ｃ－ Ｃ Ｓ－ Ｊ１ ），蒸汽消毒 器 （ ＸＧ ２ ＹＱ０ ），电热鼓风干燥箱 （ Ａ－ ），恒 １ｌＢ １ ０ 温培养箱 （Ｒ一 ５一 ），光学显微镜 （ ２ ０Ａ ＬＨ ２０Ｇ Ｌ ００ ）， 恒温振荡器 （ Ｚ ８） Ｓ － ２ ，架盘药物天平 （ Ｐ １０ ）， Ｈ Ｊ－ ００ 冰箱 （Ｃ－８ＫＦＲ ，磁力加热搅拌器 （９Ｉ ＢＤ１３ ＆ ） ７－ ），
ｐ ．４～ ７ 。 Ｈ７ ．６
１ — 反 应 ）源自文库 Ｐ
高氏 １ 号培养基：可溶性淀粉 ２ ，Ｋ０ ， ０ｇ Ｎ １ｇ
Ｎ Ｃ ０ ５ ｇ， Ｋ Ｈ Ｏ ａ １ ． Ｐ ４・ ３ ０ ５ ２ Ｈ ０ ． ｇ， Ｍ Ｓ ４ ‘７ ２ ｇ０ Ｈ０ ２
葡萄糖蛋 白胨水培养基：蛋白胨 ２５ｇ ． ，葡萄
理 生 化 反 应 测 试 和 对 苯 酚 浓度 耐 受 能 力 测试 研 究 。
污水 已经成为现实生活中一个沉重的话题 ，而 苯酚是焦化、造纸和石油等工业废水 以及生活污水 中的主要污染物Ⅲ 。大量酚类化合物 以及衍生物的 积累给环境和人体健康 带来 了 严重的威胁。 现代污水处理技术按处理程度可分为三个等级： 级处理为物理法，去除悬浮状固体 污染物；二级 处理主要去除胶体、溶解状态的有机污染物；三级 处理用 生物脱氮除磷法、混凝沉淀法、砂率法、活 性炭吸附法、离子交换法等方法主要去除难降解的 有机物、氮、磷等导致水体 富营养化的可溶性无机 物等 。其中的生物法为一种纯天然的方法，利用 污水 中微生物分解其有毒有害物质 ，反应过程简单 （ 即微 生物的生理代谢 ），产物也无污染。但其在 自然状态下反应较慢，污水 中有害物对于微生物来 说 常常是 “ 供不应求”。 目前国内外有很多的权威 学者从不同的污染源中分离 了 一些降解苯酚的菌株， 但是认识得不够全面 。因为不 同的选择条件得到 的结果是不同的，这必然使得某些菌种尚未被发现。 鉴于 以上原因，本文的目的是尽最大可能筛选出一 些功能上 占主导地位 的苯酚降解菌 ，以提高污水处 理 中苯酚降解的速率。
糖 ２ ５ ｇ ２Ｐ ４１ ｇ ． ，ＫＨ ０ ，水 ５ ０ ｍ ，ｐ ． 。 ０ Ｌ Ｈ ７ ２
ＶＰ试剂：Ｃ Ｓ １ｇ － ｕ ０ ，蒸馏水 １ Ｌ ０ｍ ，浓氨水 ｐＨ ． ７ ４～ ７ ６。 ． ４ Ｌ ＯＮ Ｏ ５ Ｌ ０ｍ ，１％ ａＨ ９ ０ｍ 。先将 Ｃ Ｓ ｕ０ 溶于蒸馏水 中， 然后 加 浓氨水 ，最后 加 １％ ａＨ ０Ｎ ０ 。 Ｐ Ａ培养基 ：土豆 ２ ０ｇ Ｄ ０ ，葡萄糖 ２ ，琼 ０ｇ 将菌种接种培养在 ３ ７℃下，培养 ２ ～ ８ ｈ ４ ４ ， 脂 １ ，水 １ ０ Ｌ ｐ 自然 。 ７ｇ ０ ０ｍ ， Ｉ － Ｉ
第２ ６卷 第 ４期 ２１年 １ ０１ ２月
邢 台学 院学 报
Ｊ ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ ＸＩ ＮＧＴ ＡＩ ＵＮＩ ＶＥＲＳ Ｔ Ｉ Ｙ
Ｖｏ ． ６ Ｎｏ ４ １２ ． ．
Ｄ ｅ ． ０ｌｌ ｃ２
污水 中苯酚 降解 菌的分离与初探
唐
摘
一
蕊
０４０ ） ５ ０ １
（ 邢台学院，河北邢 台